7. 식품 중 잔류농약 시험법

7.1 식품일반

7.1.1 일반원칙

가. 검체의 처리

1) 잔류농약 시험에 사용하는 검체의 품목별 사용부위는 아래표와 같다. 다만, 이 표에서 정하지 아니한 품목은 원칙적으로 가식부를 사용부위로 한다.

대분류	소분류	품목*	사용부위‧처리방법
곡류	-	귀리, 기장, 메밀, 밀, 보리, 수수, 쌀, 아마란스(씨), 옥수수, 율무, 조, 퀴노아, 트리티케일, 피, 호밀 등	탈각한 시료 전체 옥수수: 껍질, 수염, 심을 제거한 알곡
서류	-	감자, 고구마, 곤약(구약), 마, 마카, 야콘, 카사바(타피오카), 토란 등	잔뿌리를 제거하고 물로 가볍게 씻어 흙을 제거한 것
두류	-	강낭콩, 녹두, 대두, 동부, 렌즈콩, 리마콩, 완두, 이집트콩, 작두콩, 잠두, 제비콩, 팥, 피전피 등	꼬투리를 제거한 종실
견과 종실류	땅콩 또는 견과류	땅콩, 개암, 도토리, 마카다미아, 밤, 브라질넛, 아몬드, 은행, 잣, 케슈너트, 피스타치오, 피칸, 호두 등	겉껍질(hull, shell)을 제거한 전체
	유지 종실류	달맞이꽃(씨), 대마(씨), 드럼스틱/모링가(씨), 들깨, 면실/목화(씨), 올리브(열매), 유채/카놀라(씨), 참깨, 팜, 해바라기(씨), 호박(씨), 홍화(씨) 등	씨(종자) 전체, 또는 제거 가능한 겉껍질을 제거한 종자 또는 낟알 올리브(열매): 씨를 포함한 열매 전체
	음료 및 감미 종실류	결명자, 과라나, 카카오원두, 커피원두, 콜라 너트, 헛개(열매) 등	전체(열매의 다른 부분을 포함하지 않는 종자만 사용) 카카오원두: 내피를 제거한 종자
과일류	인과류	감, 모과, 배, 비파, 사과, 석류 등	꼭지를 제거한 과일 전체 감: 꼭지, 받침을 제거한 과일 전체 비파: 꼭지, 씨를 제거한 과일 전체
	감귤류	감귤(금귤 포함), 레몬(라임 포함), 시트론, 오렌지, 유자, 자몽, 탱자 등	과일 전체
	핵과류	대추, 매실, 복숭아, 산수유, 살구, 앵두, 오미자, 자두, 체리 등	줄기(꼭지)와 씨를 제거한 과일 전체 산수유, 앵두, 오미자: 꼭지를 제거한 시료 전체

대분류	소분류	품목*	사용부위‧처리방법
과일류	장과류	구기자, 꾸지뽕(열매), 다래, 딸기, 마가목(열매), 무화과, 베리류[블루베리, 빌베리, 복분자(라즈베리, 블랙베리, 산딸기 포함), 아로니아, 엘더베리, 오디/멀베리, 커런트, 크랜베리/월귤 등], 으름, 포도(머루 포함) 등	줄기를 제거한 과일 전체. 단, 받침이 있는 경우 받침을 제거한다 포도: 꼭지와 줄기를 제거한 것
	열대 과일류	가시여지/그라비올라(열매), 구아바, 대추야자, 두리안, 리치, 망고, 망고스틴, 바나나, 바라밀/잭프루트, 아보카도, 아사이팜, 아세로라, 용과, 용안, 코코넛, 키위/참다래, 파인애플, 파파야, 패션 프루트, 포포나무(열매) 등	줄기를 제거한 과일 전체 구아바, 바나나, 키위: 꼭지를 제거한 전체 아보카도, 망고, 용안, 두리안, 리치, 포포나무(열매): 씨(stone)를 제거한 전체 파인애플: 왕관(crown)을 제거한 전체 대추야자: 줄기 및 씨(stone)를 제거한 전체 코코넛: 껍질(shell)을 제거한 과일 전체(코코넛워터 포함)
채소류	결구 엽채류	배추, 브로콜리(콜리플라워 포함), 양배추(방울다다기양배추 포함) 등	변질 잎을 제거한 전체 브로콜리, 콜리플라워(꽃양배추): 모든 잎을 제거한 전체 방울다다기양배추: 잎과 줄기를 제거한 것
	엽채류	갓, 갯기름나물/방풍나물, 겨자채, 경수채/교나, 고들빼기, 고려엉겅퀴/곤드레나물, 고추냉이(잎), 고춧잎, 곤달비, 공심채, 근대, 꾸지뽕(잎), 냉이, 눈개승마/삼나물, 뉴그린, 다채/비타민, 다청채, 당귀(잎), 돌나물, 둥굴레(잎), 들깻잎, 라디치오, 루꼴라/로케트, 머위, 무(잎, 열무 포함), 민들레, 배암차즈기/곰보배추, 비름나물, 비트(잎), 뽕(잎), 산마늘/명이나물(잎), 상추, 쑥부쟁이(섬쑥부쟁이/부지깽이나물 포함), 순무유채, 시금치, 신선초, 쑥, 쑥갓, 씀바귀, 아욱, 양상추, 어수리, 엇갈이배추(봄동, 쌈배추 등 포함), 엉겅퀴, 왕고들빼기, 우엉(잎), 원추리, 위트루프/치콘, 유채/동초, 질경이(잎), 차즈기/차조기/자소엽(잎), 참나물, 청경채, 춘채, 취나물(곰취, 미역취, 참취), 치커리(잎)(앤디브 포함), 케일, 파드득나물/삼엽채, 파슬리, 호박(잎) 등	변질 잎을 제거한 전체. 단, 뿌리가 있는 경우 이를 제거하고 또한 흙이 묻어 있는 경우 가볍게 털어 제거한 것 뿌리와 함께 섭취하는 경우 뿌리를 포함(고들빼기, 씀바귀, 열무 등)

대분류	소분류	품목*	사용부위‧처리방법
채소류	엽경채류	갯개미자리/세발나물, 고구마(줄기), 고비, 고사리, 달래, 두릅, 락교/염교, 리크, 미나리, 부추, 삼채, 셀러리, 아스파라거스, 죽순, 콜라비, 토란(줄기), 파(쪽파 포함), 풋마늘(마늘종 포함) 등	변질 잎을 제거한 전체. 단, 뿌리가 있는 경우 이를 제거하고 흙이 묻어 있는 경우 가볍게 털어 제거한 것 셀러리, 아스파라거스: 줄기 전체 파, 리크: 뿌리를 제거한 전체. 죽순: 가식부위(단단한 밑동 및 껍질을 제거한 것) 아티초크: 꽃봉오리 고구마(줄기): 지상부의 잎을 제외한 줄기 뿌리와 함께 섭취하는 경우 뿌리를 포함(달래, 삼채 등)
	근채류	고추냉이(뿌리), 당근, 더덕, 도라지, 둥굴레(뿌리), 마늘, 무(뿌리), 물방기(뿌리), 비트, 사탕무, 생강, 셀러리악, 수삼(산양삼 포함), 순무, 양파, 연근, 우엉, 참나리(비늘줄기, 뿌리), 치커리(뿌리), 파스닙 등	지상부를 제거한 전체. 뿌리나 괴경을 흐르는 물로 씻어 흙과 찌꺼기를 제거한 것 마늘, 양파: 지상부, 잔뿌리 및 외피를 제거한 전체 인삼: 지상부를 제거한 뿌리 전체(뇌두가 있는 경우 뇌두 포함) 새싹인삼: 지상부와 뿌리를 포함한 전체 산양삼: 전체(지상부가 있는 경우 포함)
	박과 과채류	멜론, 박, 수박, 여주, 오이, 참외, 호박 등	줄기(덩굴, 꼭지)를 제거한 전체
	박과 이외 과채류	가지, 고추, 오크라, 토마토(방울토마토 포함), 풋콩(꼬투리 포함된 그린빈, 대두, 스냅빈, 완두 등), 피망(파프리카 포함) 등	줄기(꼭지), 받침, 잎을 제거한 전체 풋콩: 꼬투리를 포함한 전체
버섯류	-	갓버섯, 꽃송이버섯, 나도팽나무버섯/맛버섯, 느타리버섯, 목이버섯, 목질진흙버섯/상황버섯, 새송이버섯, 석이버섯, 송이버섯, 신령버섯, 싸리버섯, 양송이버섯, 영지버섯, 팽이버섯, 표고버섯, 황금뿔나팔버섯 등	갓과 줄기: 흙, 불순물, 대주머니(기부)를 제거한 것

대분류	소분류	품목*	사용부위‧처리방법
향신식물	허브류	가시여지/그라비올라(가지, 잎), 고수(잎), 돌외(잎), 드럼스틱/모링가(잎, 줄기), 라벤더, 레몬그라스, 레몬머틀, 레몬밤, 로즈마리, 루이보스, 마타리(순), 마테(잎), 민트(박하, 서양박하/페퍼민트, 스피어민트, 애플민트 등), 밀크씨슬(잎), 바질(잎), 배초향/방아잎, 사향초/백리향, 서양자초/딜(잎), 스테비아, 식용꽃(국화, 금잔화/마리골드, 장미, 캐모마일, 히비스커스 등), 아이언워트, 오레가노, 올리브(잎), 월계수, 쟈스민, 초피나무, 쿨란트로, 타임, 허니부쉬, 호로파(잎), 회향(잎) 등	허브류(생): 부패하거나 시든 부분을 제거한 전체. 흙이 묻어 있는 경우 가볍게 털어 제거한 것 허브류(건조): 전체
	향신열매	노간주나무(열매), 바닐라(열매), 백미후추(열매), 산초(열매), 소두구(열매), 스타아니스/팔각회향(열매), 케이퍼(열매), 후추(열매) 등	건조한 열매 전체
	향신씨	겨자(씨), 고수(씨), 밀크씨슬(씨), 바질(씨), 서양자초/딜(씨), 셀러리(씨), 아니스(씨), 육두구(씨), 차즈기/차조기/자소자(씨), 캐러웨이(씨), 쿠민(씨), 호로파(씨), 회향(씨) 등	건조한 씨 전체
	향신뿌리	강황/심황/울금(뿌리) 등	건조한 뿌리 전체
	기타 향신식물	계피(가지, 줄기껍질), 몰약(고무수지), 사프란(암술머리), 정향(꽃봉오리) 등	건조한 식물 전체
차	-	차	건조된 차
호프	-	호프	건조된 꽃
기타 식물류		단수수, 마가목(껍질), 사탕수수, 알로에 등	전체 단수수, 사탕수수: 잎, 뿌리를 제거한 전체 알로에: 부패한 부분을 제거한 전체
* 제1. 총칙 4. 식품원료 분류 1) 식물성 원료의 분류와 품목을 따름

2) 검체 1 kg(건조채소, 차 등은 0.3 kg)을 ‘1)’에서 정한 사용부위에 해당하는 전량을 혼합·분쇄(곡류, 두류, 견과종실류는 표준체 420 μm를 통과하도록 분쇄)하여 균질화한 후 개별시험법에서 정한 무게를 정밀히 달아 시료로 사용한다.

나. 추출 전 건조시료에 대한 처리 방법

1) 개별 시험법에 건조시료의 습윤화 과정을 명시하지 않은 경우 개별 시험법에서 정한 시료 무게의 1/2 이하를 정밀히 단 후, 측정한 시료 무게의 두 배 이상의 물을 넣어 30분 이상 방치하여 습윤화한다.

다. 표준용액의 조제 및 정량

1) 이 시험법에서 사용하는 표준용액의 조제는 개별 시험법에서 명시한 방법에 따른다.

2) 질량분석기를 이용하여 정량하는 경우, 표준용액은 개별 시험법에서 명시하지 않더라도 표준원액을 무처리 시료 추출물*을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함)한 것을 사용하여야 한다(무처리 시료 첨가법, blank sample dilution calibration method).

* 무처리 시료 추출물: 분석대상 물질을 함유하고 있지 않는 시료와 동일한 종류의 식품을 시험용액과 같은 방법으로 추출, 정제한 것

3) 질량분석기를 이용하여 2 종류 이상 품목의 시료를 분석할 경우에는 임의의 무처리 시료 추출물 하나로 조제한 표준용액으로 분석할 수 있다. 다만, 결과에 의문이 있을 때에는 해당시료의 무처리 시료 추출물로 표준용액을 조제하여 정량하여야 한다.

4) 무처리 시료를 확보하기 어려운 경우에는 시험용액에 표준물질을 농도별로 넣어 검량선을 작성(표준물질 첨가 검량법, standard addition calibration method)하여 시료 중 분석물질을 정량할 수 있다.

5) 시험용액에서 대상 농약의 검출농도가 검량선의 범위를 초과하는 경우 무처리 시료 추출물로 희석하여 검량선 범위 내에서 정량한다.

라. 질량분석기 분석을 위한 특성이온

1) 질량분석기를 이용하여 분석하는 경우, 각 선구이온(precursor ion) 및 생성이온(product ion)에 대한 질량분석기의 기기조건은 사용기기의 최적값으로 변경하여 사용할 수 있으며, 개별 시험법에서 제시되지 않은 특성이온도 적용이 가능하다.

2) 표준용액과 시험용액의 선구이온 및 생성이온이 일치하여야 하고, 표준용액과 시험용액의 생성이온간 반응세기의 비율(response ratio)을 비교하여 그 비율이 ± 20∼30% 이내에서 일치하여야 한다.

※ 생성이온간 반응세기의 비율 허용 범위

이온간 반응세기의 비율(%)	허용범위(%)
〉50	±20
〉20, ≤50	±25
〉10, ≤20	±30

7.1.2 다성분 시험법(multiresidue methods)

7.1.2.1 다성분 시험법-제1법

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프 및 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD), 불꽃광도검출기(GC-FPD) 또는 질소․인 검출기(GC-NPD), 불꽃이온화검출기(GC-FID)

2) 액체크로마토그래프-자외선검출기(HPLC-UVD) 또는 형광검출기(HPLC-FLD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 각 농약의 표준품을 헥산 등에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 헥산, 아세톤 등을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 과실, 야채 등 비지방성 식품: 시료 100 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 이에 아세톤 200 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 섞은 다음(셀라이트는 넣지 않는다.) 바닥에 여과지(Sharkskin paper)를 깔은 12 cm의 부흐너깔때기로 흡인여과하여 500 mL의 감압플라스크(Suction flask)에 모으고(이 때 여과는 1분 안에 마치고 사용하는 여과지는 분석시 방해성분을 제거하기 위하여 시료를 여과하기 전에 아세톤으로 씻은 후 사용한다.) 여액의 양을 기록한다. 이 여액 중 80 mL를 취하여 1 L 분액깔때기에 옮기고 ★ 이에 석유에테르 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 하층(물층)은 다른 1 L 분액깔때기에 옮긴다. 상층은 무수황산나트륨을 약 4 cm 충전하고 유리솜(아세톤 및 에탄올로 씻어 말린 것)으로 막은 깔때기(10 cm)에 통과시켜 탈수하고 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기에 넣는다. 물층(하층)이 남아있는 분액깔때기에 염화나트륨 7 g을 넣고 염화나트륨이 녹을 때까지 30초간 강하게 흔들어 섞은 후 이에 디클로로메탄 100 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 용매층(하층)을 위와 같은 방법으로 탈수하여 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기 중에 넣고 물층(상층)에는 디클로로메탄 100 mL를 넣고 위와 같은 조작을 되풀이한 후 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기 중에 합하고 깔때기 중에 무수황산나트륨을 디클로로메탄 50 mL로 씻고 이 씻은 액은 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기 중에 합친다. 비등석을 넣어 100～150 mL까지는 낮은 온도에서 천천히 농축시키고 이후 온도를 높여 약 2 mL까지 농축한다. 석유에테르 100 mL를 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기의 스나이더관(snyder tube column)을 통하여 넣고 다시 약 2 mL까지 농축한다. 다시 석유에테르 50 mL를 위와 같은 방법으로 넣고 약 2 mL까지 농축시키고 아세톤 20 mL를 넣어 약 2 mL까지 농축한다. 이 때는 용매를 완전히 날려보내지 않은 상태(소량남김)에서 아세톤으로 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

나) 곡류, 두류 및 종실류 등 지방성 식품: 시료 30 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 이에 30% 물 함유 아세톤 350 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 여과지를 깔은 12 cm의 부흐너깔때기로 여과하여 500 mL의 감압 플라스크에 모으고(이 때 여과는 1분 안에 마치고 사용하는 여과지는 시료를 여과하기 전에 아세톤으로 씻어 분석의 방해성분을 미리 제거하고 사용한다.) 여액의 양을 기록한다. 이 여액 중 80 mL를 취하여 분액깔때기에 옮기고, 마. 시험용액의 조제 1) 추출 (가) 과실, 야채 등 비지방성 식품의 ★ 이후와 같이 실험하고 용매를 완전히 날려버린 즉시 잔류물을 아세토니트릴 포화 석유에테르에 녹여 125 mL 분액깔때기(Ⅰ)에 넣고 분액깔때기 내의 아세토니트릴 포화 석유에테르 총량이 15 mL 정도 되게 한다. 이에 석유에테르 포화 아세토니트릴 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층을 미리 물 650 mL, 포화염화나트륨 40 mL 및 석유에테르 100 mL가 들어있는 1 L 분액깔때기에 넣는다. 다시 분액깔때기(Ⅰ)에 석유에테르 포화 아세토니트릴 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 이 조작을 2회 되풀이한 후 아세토니트릴층을 앞의 1 L 분액깔때기에 합한다. 이어서 1 L 분액깔때기를 수평으로 하여 30～45초간 강하게 흔들어 섞은 후 층을 분리시키고 물층은 다른 1,000 mL의 분액깔때기에 옮기고 이에 석유에테르 또는 헥산 100 mL를 넣고 15초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 물층은 버린다. 석유에테르층은 앞의 석유에테르층과 합하여 물 100 mL씩으로 2회 가볍게 흔들어 씻고 석유에테르층은 안지름 25 mm, 길이 50 mm의 무수황산나트륨 컬럼을 통과하여 탈수한 후 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기 중에 넣는다. 컬럼을 석유에테르 30 mL씩으로 3회 씻고 씻은 액은 쿠데르나-다니쉬(Kuderna-Danish) 농축기 중에 합하고 이를 40℃ 이하에서 일정량으로 농축하여 시험용액으로 한다. 이 방법에 의해 정제효과가 떨어지는 시료 등은 분배한 아세토니트릴층을 모두 모아 아세토니트릴포화석유에테르 30 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞어 층을 분리시킨 후 아세토니트릴층을 물 650 mL, 포화염화나트륨 40 mL 및 석유에테르 100 mL가 들어있는 1 L 분액깔때기에 넣는다(미량 남아있는 지방을 제거하기 위함).

2) 정제
안지름 22 mm의 컬럼에 40～50 mL의 석유에테르 또는 헥산을 넣고 활성화시킨 플로리실 20 g을 충전한 후 그 위에 컬럼 길이의 1 cm 정도 되게 무수황산나트륨을 넣는다. 컬럼의 상단에 소량의 용매가 남을 정도로 유출시켜 버리고 이어서 위의 농축액을 컬럼에 넣고 용기를 소량의 석유에테르 또는 헥산으로 2회 씻어 컬럼에 넣어 약 5 mL/분의 속도로 흘려버리고 컬럼의 기벽을 소량의 석유에테르 또는 헥산으로 씻어준다. 이어서 6% 에테르 함유 석유에테르 또는 6% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받고, 용기를 바꾼 후 15% 에테르 함유 석유에테르 또는 15% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받는다. 다시 용기를 바꾼 후 50% 에테르 함유 석유에테르 또는 50% 에테르 함유 헥산의 혼합액 200 mL를 5 mL/분의 속도로 용출하여 받아 각각의 용출액을 5 mL 이하의 일정량으로 감압농축하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 충전컬럼(Packed column)

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80메쉬(mesh), 80～100메쉬(mesh)) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 100% methyl siloxane, 50% phenyl 50% pethyl siloxane, 50% cyanopropylphenyl 50% methyl siloxane, 2% DEGS(Stabilized)를 3～5%로 입힌 것 또는 이와 동등한 것(7.1.2.1 다성분 시험법 자. 분석 대상 및 상세조건 중 ｢1) 사용 가능한 동등한 컬럼｣ 참조).

(3) 컬럼: 안지름 2～5 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

나) 모세관 컬럼(capillary column): 0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 컬럼에 적합한 고정상액을 화학적 결합시키거나 또는 교차결합(cross-link)하여 코팅한 것

다) 주입부 및 검출기의 온도: 각각 220℃, 250℃

라) 오븐 온도: 130～230℃사이에서 항온(필요에 따라서 적절히 조절한다.)
승온: 측정농약의 종류 및 기기상태에 따라 적절히 조절한다.

마) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 헬륨(He)을 적절하게 조절한다.

바) 검출기(GC-FPD, GC-NPD)의 가스유량: 수소와 공기를 적절히 조절한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래피를 하여 피크높이법 또는 피크면적법에 따라서 정량한다.

자. 분석 대상 및 상세조건

1) 사용 가능한 동등한 컬럼

Basic Structure, Substitution	Capillary Open Tubular	Packed
Polysiloxane, 100% Methyl	DB-1, HP-1, HP-101, SP-2100, SPB-1, BP-1, CP-Sil 5CB, Ultra 1, RSL-150, RSL-160, Rtx-1, CB-1, OV-1, PE-1, SE-30, AT-1, 007-1(MS)	OV-101, OV-1, SP-2100, DC-200, CP-Sil 5, SE-30
Polysiloxane, 50% Phenyl 50% Methyl	DB-17, HP-17, 007-17(MPS-50), PE-17, AT-50, SP-2250, Rtx-50, RSL-300	OV-17, OV-11 SP-2250, OV-22 DC-710
Polysiloxane, 50% Cyanopropyl phenyl 50% Methyl	DB-225, HP-225, OV-225, SP-2330, CP-Sil 43CB, RSL-500, Rtx-225, BP-225, CB-225, PE-225, 007-225, AT-225	OV-225
Polysiloxane, 14% Cyanopropyl phenyl 86% Methyl	DB-1701, SPB-7, CP-Sil 19 CB, BP-10, CB-1701, OV-1701, PE-1701, 007-1701, Rtx-1701	OV-1701
Polysiloxane, 5% Phenyl 95% Methyl	DB-5, HP-5, Ultra 2, OV-5, SPB-5, CP- Sil 8CB, RSL-2000, BP-5, CB-5, PE-5, SE-5, 007-2(MPS-5), SE-54, Rtx-5, CP-SIL 8	OV-3, OV-73
Polysiloxane, 50% Trifluoropropyl, 50% Methyl	DB-210, RSL-400, SP-2401	OV-210, OV-202 SP-2401, OV-215
Polyethylene glycol(PEG)	HP-20 m, Carbowax, CP-WAX 52CB, Supelcowax 10, SUPEROX Ⅱ, BP□20, CB-WAX, PE- CW, DB-WAX, Stabilwax	Carbowax 20m Supelcowax 10
Diethylene glycol succinate	없음	DEGS

2) 분석대상(회수율 %, 기기 분석정보)
Acephate(DEGS 컬럼) Acetochlor Alachlor Aldrin(ECD) Allidochlor(DEGS, 낮은 온도 사용) Ametryn(NPD, FPD) Aminocarb(BPD) Aramite Atrazine(ECD, NPD) Azinphos-ethyl Azinphos-methyl(DE GS 컬럼에 불안정) Bendiocarb(NPD) Benfluralin Benomyl(HPLC) Benoxacor Bensulide Benzoylprop-ethyl(79%) BHC(α, β, γ, δ 이성체, ECD) Bifenox Bifenthrin(66～133%) Binapacryl(NPD) Biphenyl(FID) Bromacil(ECD, NPD) Bromophos Bromophos-ethyl Bromopropylate(ECD) BTS 27919(NPD) Bupirimate(NPD, FPD) Butachlor Butralin(77～90%, NPD)		Cadusafos Captafol(ECD) Captan(ECD) Carbaryl(NPD, HPLC) Carbofuran(NPD, HPLC) Carbophenothion(NPD) Carbosultan(47～75%, NPD) Carboxin(NPD) Chlorbenside Chlorbromuron(73～ 100%) Carbofuran Chlordane(ECD) Chlordimeform hydrochloride(ECD) Chlorfenvinphos(NPD) Chlorflurecol methyl ester Chlormephos(저온컬럼) Chlornitrofen Chlorobenzilate(ECD) Chloroneb(저온컬럼) Chloroxuron Chlorpropham Chlorpyrifos Chlorpyrifos oxygen analog(DEGS 컬럼) Chlorpyrifos-methyl Chlorthiophos Clomazone Coumaphos CP 51214 Crotoxyphos		Crufomate Cyanazine Cyanofenphos Cyanophos Cycloate(FPD- Cyfluthrin, (고온컬럼) Cypermethrin(ECD) Cyprazine DCPA(ECD) DDE(ECD) DDT(ECD) DEF Deltamethrin Demeton-O Demeton-O-sulfone Demeton-O-sulfoxide Demeton-S Demeton-S-sulfone (DEGS 컬럼) Demeton-S-sulfoxide (DEGS 컬럼) Diallate Dialifor Diazinon Diazinon oxygen analog Dichlobenil(저온컬럼) Dichlofenthion Dichlofluanide(ECD, NPD) Dichlorvos(DDVP) (DEGS 또는 저온컬럼) Diclobutrazol Diclofop-methyl		Dicloran(ECD) Dicofol(ECD) Dicrotophos(DEGS 컬럼) Dieldrin(ECD) Diethatyl-ethyl Dimetachlor Dimethametryn(NPD) Dimethoate(DEGS 컬럼) Dinitramine(NPD) Dinobuton Dinocap(NPD) Dioxabenzofos Dioxacarb(NPD) Diphenylamine(NPD) Dioxathion(72～94%) Diphenamid(57～155%, NPD) Disulfoton Disulfoton sulfone(NPD) Disulfoton sulfoxide (DEGS 컬럼) Diuron(저온컬럼) Edifenphos Endosulfan(ECD) Endrin(ECD) EPN Esfenvalerate(고온컬럼) Etaconazole Ethalfluralin Ethiofencarb(NPD) Ethiolate(저온컬럼, NPD) Ethion

Ethofumesate(FPD) Ethoprophos Ethoxyquin(NPD) Ethyl p-toluene sulfonamide(NPD, FPD) Etridiazole(저온컬럼) Etrimfos Famphur Fenamiphos(ECD, FPD, NPD) Fenamiphos sulfon Fenamiphos sulfoxide Fenarimol Fenbuconazole Fenfuram Fenitrothion Fenoxycarb(NPD) Fenpropimorph Fensulfothion Fenthion Fenvalerate(고온컬럼) Flamprop-methyl Fluazifop butyl ester Fluchroralin(ECD) Flucythrinate(고온컬럼) Flusilazole(ECD, FPD, NPD) Fluvalinate(고온컬럼) Folpet(ECD) Fonofos Formothion(ECD, FPD, NPD) Furilazole		G-27550(NPD) Gardona Heptachlor(ECD) Heptachlor epoxide(ECD) Hetenophos HCB(Hexachlorobenzene) Hexaconazole(ECD, FPD, NPD) Imazalil Imazamethabenz methyl ester(NPD) IN-A2213(저온컬럼) Iprobenfos Iprodione(ECD, NPD) Iprodione isomeric metabolite(ECD, NPD) Isazofos(NPD) Isofenphos(ECD, FPD, NPD) Isopropalin(NPD) Jodfenphos, Cyhalothrin Leptophos Linuron(57～101%, ECD, NPD) Malathion Mecarbam(ECD, FPD, NPD) Mephosfolan Metalaxyl(NPD) Metasystoxthiol Metazachlor Metabenzthiazuron Methamidophos(DEGS 컬럼) Methidathion		Methiocarb(NPD, FPD) Metoprotryne Methoxychlor Metobromuron Metolachlor(NPD, DEGS 또는 OV-17) Metoxuron(73～110%, 저온컬럼) Metribuzin(NPD, FPD) Mevinphos(DEGS 컬럼, ECD, FPD, NPD) Mirex(71～83%) Monocrotophos(DEGS 컬럼, ECD, FPD, NPD) Monolinuron Myclobutanil Naled(DEGS 컬럼) Napropamide(NPD, DEGS 컬럼) Neburon Nitralin(NPD, FPD) Nitrapyrin, Nitrofen Nitrofluorfen Nitrothal-isopropyl(NPD) Nonachlor(ECD) Norea(NPD) Norflurazon(60～200%) Nuarimol Octachlor epoxide(ECD) Octhilinone(NPD, FPD) Ofurace Omethoate(DEGS 컬럼) Ovex		Oxadiazon Oxadixyl(NPD) Oxycarboxin Oxydemeton-methyl (DEGS 컬럼) Oxydemeton-methyl sulfone(DEGS 컬럼) Oxyfluorfen Oxythioquinox(NPD, FPD, 짧은 DEGS컬럼) Paclobutrazol(ECD, FPD, NPD) Parathion(NPD) Parathion-methyl(NPD) Pebulate Penconazole Pendimethalin(NPD) Pentachloraniline Pentachlorbenzene(NPD) Pentachlorobenzonitrile Pentachlorphenyl- methyl ester Pentachlorphenyl- methyl sulfide Permethrin(ECD, 고온 컬럼) Perthane(ECD) Phenthoate ο -Phenylphenol(FID) Phorate Phorate sulfone Phorate sulfoxide Phosalone Phosfolan

Phosmet Phosphamidon(ECD, FPD, NPD) Phoxim(컬럼온도 160℃, 200℃에서 분해됨) Piperophos Pirimicarb(NPD) Pirimiphos-ethyl Pirimiphos-methyl Pretilachlor Probenazole(NPD, FPD) Prochloraz(고온컬럼, ECD, FPD, NPD) Procymidone Prodiamine Profenofos Profluralin(40～90%) Prometryn(NPD, FPD) Pronamide(NPD) Propachlor Propanil		Propargite(FPD, NPD) Propazine Propetamphos Propham(NPD, 저온컬럼) Propiconazole Propoxur(ECD, FPD, NPD) Prothiofos Prothoate Pyrazon Pyrazophos Pyridaphenthion(FPD, NPD) Quinalphos Quintozene(ECD, FPD, NPD) Quizalofop-ethyl ester R25788 RH-9129(68～92%) Ronnel Schradan Simazine		Simetryn(NPD, FPD) Sulfallate Sulfotep(DEGS 컬럼) Sulphenone Sulprofos TCMTB TDE(ECD) Tebuconazole Technazene(ECD, FPD, NPD) TEPP Terbacil(ECD) Terbufos Terbumeton Terbutryn(NPD, FPD) Tetradifon(ECD) Tetramethrin Tetrasul Thiabendazole(NPD, FPD, HPLC) Thiobencarb Thiometon(ECD, FPD, NPD)		Thionazin, THPI(NPD, DEGS 컬럼) Tolylfluanid(ECD, FPD, NPD) Toxaphene Tralomethrin Triallate Triadimefon(ECD) Triadimenol Triazophos Trichlorfon Trichloronate Tridiphane Triflumizole Trifluralin Triflusulfuron-methy l ester(67～106%) Triphenyl Phosphate Vamidothion Vinclozolin(ECD, FPD, NPD)
3) 정제과정 중 용출조건 예시(에테르 %비율, 회수율%)
Acetochlor(15＋50) Alachlor(15, 68%) Aldrin(15) Allidochlor(15, 80%) Allethrin(15, 80%) Atrazine(50) Azinphos-ethyl(15) BHC(15) Bifenthrin(15)		Binapacryl(15, 83%) Biphenyl(15) Bromophos(15) Chlorbenside(15) Chlordane(15) Chlornitrofen(15) Chlor thalonil(15, 81%) Chlorpyrifos(15) Cypermethrin(15)		DCPA(15) DDE(15) DDT(15) Deltamethrin(15) Diazinon(15) Dichlofluanide(15+50)) Diclobutrazol(15, 50～ 80%) Dicloran(15)		Dicofol(15) Dieldrin(15) Dinobuton(15, 83%) Endosulfan(15) Endrin(15) Esfenvalerate(15) Fenpropathrin(15) Fenson(15) Fluchloralin(15)

Flucythrinate(15+50) Flusilazole(15, 35～44%) Fluvalinate(15) Heptachlor(15) Heptachlor epoxide(15) Hexachlorbenzene(15) Iprodione(15, 24～97%) Methyl 3, 5- dichloroben-zoate(15) Mirex(15) Nitrofen(15) Nitrothal-isopropyl(15)		Nonachlor(15) Ovex(15) Oxadiazon(15) Oxythioquinox(15) Paclobutrazol(15, 50～ 80%) Parathion(15) Parathion-methyl(15) Pentachlo-raniline(15) Pentachlorbenzene(15) Pentachlorphenyl- methyl sulfide(15)		Permethrin(15) Penothrin(15, 60%) ο -Phenylphenol(15) Procymidone(15) Propargite(15) Propham(15) Propiconazole(15, 50～ 80%) Quintozene(15) Quizalofop-ethyl ester(15)		Simazine(15, 69%) Terbuthylazine(15) Tetradifon(ECD) Thiometon(15) Toxaphene(15) Trichloronate(15) Triflumizole(15, 50～ 80%) Vinclozolin(15).

4) Benzimidazole계 농약의 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: μ-Bondapak C18 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼: 안지름 4.6 mm, 길이 25 cm의 스테인리스관

다) 유량: 7 mL의 인산이 섞인 200 mL의 물, 4.1 mm의 1-decanesulfonate, sodium salt를 이동상에 넣어 ion-pairing 방법으로 분리

라) 검출기: 자외선검출기(HPLC-UVD), 형광검출기(HPLC-FLD)는 MBC와 티아벤다졸(thiabendazole)에 대해서만 유효

5) Carbamate계 농약의 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: μ-Bondapak C8 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 물을 gradient 방법으로 사용

다) 포스트 컬럼 유도체화: 유출되어 나오는 성분들을 관 내부에서 알칼리 조건으로 가수분해시켜 메틸아민으로 만들어준 후 관 내부에서 ο-phthaldehyde(OPA), 2-mercaptoethanol(BME)과 반응시켜 fluorophore를 생성

라) 검출기: 형광검출기(HPLC-FLD)

7.1.2.2 다성분 시험법-제2법

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

4) 표준용액: 무처리 시료용액을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 ★ 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.2 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 시험용액을 주입하여 20℃/분의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 300℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 인터페이스 온도: 300℃

바) 분석대상(272종) 물질의 조건

	분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Colllision energy, eV)
1	노나클로르-시스*** (Nonachlor-cis)	16.35	444.2	439.7	407	300	30
					409	300	15
	노나클로르-트랜스*** (Nonachlor-trans)	14.45	444.2	439.7	407	300	15
					409	300	25
2	뉴아리몰 (Nuarimol)	17.99	314.7	314.0	139	111	15
					107	52	30
3	니트로탈-아이소프로필 (Nitrothal-isopropyl)	12.50	295.3	295.1	194	120	20
					236	194	10
4	다이아지논 (Diazinon)	9.64	304.3	304.1	199	93	15
						135	10
5	다이알레이트 (Diallate)	8.63	270.2	269.0	234	150	20
						192	15
6	다이알리포르 (Dialifor)	21.84	393.8	393.0	357	97	25
					208	89	25
7	데스메트린 (Desmetryn)	10.63	213.3	213.1	213	58	20
						198	5
8	델타메트린 (Deltamethrin)	27.20	505.2	502.9	253	93	15
						174	27
9	디니코나졸 (Diniconazole)	16.25	326.2	325.0	268	136	35
						232	15
10	디니트라민 (Dinitramine)	9.85	322.2	322.0	261	241	10
						195	20
11	p,p’-디디디* (p,p’-DDD)	16.40	320.0	317.9	237	165	25
					235	165	25
	p,p’-디디이* (p,p’-DDE)	15.06	318.0	315.9	246	176	30
					248	176	30
	o,p’-디디티* (o,p’-DDT)	16.47	354.5	351.9	237	165	25
					235	165	25
	p,p’-디디티* (p,p’-DDT)	17.64	354.5	351.9	237	165	25
					235	165	25
12	디메타메트린 (Dimethametryn)	13.19	255.4	255.1	212	122	5
						94	20
13	디메타클로르 (Dimethachlor)	10.66	255.7	255.1	134	105	15
					197	148	10
14	디메테나미드 (Dimethenamid)	10.67	275.8	275.0	154	111	10
					230	154	10
15	디메토모르프(E)* (Dimethomorph E)	27.99	387.9	387.1	301	165	12
					387	301	12
	디메토모르프(Z)* (Dimethomorph Z)	28.58	387.9	387.1	387	301	12
					301	165	12
16	디메티핀* (Dimethipin)	9.24	210.3	210.0	124	76	5
					118	58	5
17	디메틸빈포스(E) (Dimethylvinphos E)	11.73	331.5	329.9	295	109	20
					297	109	20
	디메틸빈포스(Z) (Dimethylvinphos Z)	12.1.0	331.5	329.9	295	109	20
					297	109	20
18	디메피퍼레이트 (Dimepiperate)	13.61	263.4	263.1	145	112	5
						69	15
19	2,6-디아이피엔* (2,6-DIPN, (2,6-Diisopropylnaphthalene)	9.06	212.3	212.1	212	197	15
					197	155	10
20	디에타틸-에틸 (Diethatyl-ethyl)	14.44	311.8	311.1	188	160	10
						130	40
21	디에토펜카브 (Diethofencarb)	12.10	267.3	267.1	267	225	5
					225	168	10
22	디옥사티온 (Dioxathion)	9.42	456.5	456.0	270	97	30
					125	97	5
23	디코폴 (Dicofol)	12.49	370.5	367.9	139	75	35
						111	15
24	디크로토포스 (Dicrotophos)	8.28	237.2	237.0	127	95	15
					193	127	5
25	디클로란** (Dicloran)	9.01	207.0	205.9	160	124	10
					206	176	15
26	디클로르미드 (Dichlormid)	5.86	208.1	207.0	172	108	5
					166	56	10
27	디클로베닐 (Dichlobenil)	5.80	172.0	170.9	173	136	10
					171	136	30
28	디클로뷰트라졸 (Diclobutrazol)	15.37	328.2	327.0	272	161	10
					270	159	15
29	디클로펜티온** (Dichlofenthion)	10.65	315.1	313.9	279	223	10
					223	205	15
30	디클로포프메틸 (Diclofop-methyl)	18.21	341.2	340.0	340	253	10
					253	162	40
31	디클로플루아니드* (Dichlofluanid)	8.27	333.2	331.9	200	45	5
						44	25
32	디티오피르 (Dithiopyr)	11.31	401.4	401.0	354	286	15
						306	5
33	디페노코나졸 (Difenoconazole)	26.90	406.3	405.0	325	267	15
					323	265	15
34	디페닐아민 (Diphenylamine)	8.02	169.2	169.0	168	167	20
					169	168	15
35	디펜아미드 (Diphenamid)	12.69	239.3	239.1	167	165	30
						152	20
36	디플루페니칸 (Diflufenican)	18.29	394.3	394.0	266	218	25
						238	15
37	렙토포스 (Leptophos)	20.46	412.1	409.8	377	362	25
					171	77	25
38	린단** (Lindane, γ-BHC)	9.47	290.8	287.8	181	145	15
					217	181	5
39	마이클로뷰타닐 (Myclobutanil)	15.18	288.8	288.1	179	125	15
						152	5
40	메탈락실 (Metalaxyl)	11.17	279.3	279.1	234	146	20
					249	190	5
41	메토프로트린 (Methoprotryn)	15.47	271.4	271.1	256	170	25
						212	15
42	메톡시클로르 (Methoxychlor)	19.56	345.6	344.0	227	141	40
						169	25
43	메톨라클로르 (Metolachlor)	11.99	283.8	283.1	162	133	15
					238	162	10
44	메트리뷰진 (Metribuzin)	10.79	214.3	214.0	198	82	20
						55	30
45	메티다티온 (Methidathion)	13.90	302.3	301.9	145	58	15
						85	5
46	메틸트리티온 (Methyl trithion)	16.09	314.8	313.9	125	47	15
					157	121	35
47	메파니피림 (Mepanipyrim)	14.42	223.3	223.1	222	221	20
						222	10
48	메펜피르-디에틸 (Mefenpyr-diethyl)	18.72	373.3	372.0	299	253	10
					253	190	20
49	메프로닐 (Mepronil)	16.89	269.3	269.1	269	91	40
						119	15
50	모노리누론 (Monolinuron)	9.24	214.6	214.0	126	99	15
					214	61	5
51	몰리네이트* (Molinate)	7.30	187.3	187.1	187	126	5
					126	98	5
52	베노다닐 (Benodanil)	16.68	323.1	322.9	231	203	20
						76	25
53	벤조일프로프-에틸 (Benzoylprop-ethyl)	18.78	366.2	365.0	292	105	10
					105	77	10
54	벤퓨러세이트 (Benfuresate)	10.62	256.3	256.0	256	163	5
					163	121	5
55	벤플루라린 (Benfluralin)	8.31	335.3	335.1	292	160	20
						264	10
56	보스칼리드 (Boscalid)	24.34	343.2	342.0	140	76	25
						112	10
57	부피리메이트 (Bupirimate)	15.31	316.4	316.1	273	193	10
						108	10
58	뷰타클로르 (Butachlor)	14.22	311.9	311.1	237	160	10
					176	147	10
59	뷰타페나실 (Butafenacil)	23.41	474.8	474.0	331	180	20
						124	40
60	뷰트랄린 (Butralin)	12.56	295.3	295.1	266	174	20
						220	15
61	뷰틸레이트** (Butylate)	6.36	217.4	217.3	156	57	5
					146	57	10
62	뷰프로페진 (Buprofezin)	15.32	305.4	305.1	172	57	15
					175	132	15
63	브로모뷰타이드 (Bromobutide)	10.81	312.3	311.0	118	117	10
					232	176	10
64	브로모포스-메틸 (Bromophos-methyl)	12.67	366.0	363.8	331	316	20
					329	314	15
65	브로모포스-에틸 (Bromophos-ethyl)	13.91	394.0	391.8	303	211	30
						63	30
66	브로모프로필레이트 (Bromopropylate)	19.37	428.1	425.9	343	185	15
					339	183	15
67	α-비에이치시 (α-BHC)	8.77	290.8	287.8	181	145	15
					217	181	5
	β-비에이치시 (β-BHC)	9.25			181	145	15
					217	181	5
	δ-비에이치시 (δ-BHC)	10.07			181	145	15
					217	181	5
68	비페녹스* (Bifenox)	19.89	342.1	341.0	341	311	10
						189	20
69	비펜트린 (Bifenthrin)	19.41	422.9	422.1	181	166	15
						165	30
70	빈클로졸린 (Vinclozolin)	10.89	286.1	284.9	198	145	15
					187	124	20
71	사이퍼메트린* (Cypermethrin)	24.60	416.3	415.0	165	91	10
					163	127	5
72	사이프라진 (Cyprazine)	10.71	227.7	227.0	170	109	15
					212	109	30
73	사이프로디닐 (Cyprodinil)	13.03	225.3	225.1	225	224	10
					224	208	25
74	사이플루트린* (Cyfluthrin)	23.99	434.3	433.0	226	206	10
					163	127	5
75	사이플루페나미드 (Cyflufenamid)	15.67	412.4	412.1	223	203	12
					188	88	40
76	γ-사이할로트린* (γ-Cyhalothrin)	20.93	449.9	449.1	208	181	5
					197	141	10
	λ-사이할로트린* (λ-Cyhalothrin)	21.27			208	181	5
					197	141	10
77	사이할로포프뷰틸**** (Cyhalofop-butyl)	20.98	357.4	357.1	256	120	20
					229	109	15
78	설포텝 (Sulfotep)	8.39	322.3	322.0	202	146	10
					322	146	25
79	스피로메시펜 (Spiromesifen)	18.75	370.5	370.2	272	209	10
						254	10
80	스피록사민 (Spiroxamine)	10.98	297.5	297.2	100	72	5
					198	126	5
81	시메코나졸 (Simeconazole)	10.98	293.4	293.1	121	101	15
						75	35
82	시메트린 (Simetryn)	11.08	213.3	213.1	213	170	10
						185	10
83	시아노포스 (Cyanophos)	9.53	243.2	243.0	125	79	5
					243	109	10
84	신메틸린 (Cinmethylin)	11.27	274.4	274.1	154	111	5
					169	107	10
85	실라플루오펜 (Silafluofen)	25.31	408.6	408.1	179	91	10
					286	258	10
86	아닐로포스** (Anilofos)	19.85	367.8	367.0	226	157	15
						184	5
87	아라마이트 (Aramite)	15.77	334.9	334.1	187	65	10
					185	63	10
88	아메트린 (Ametryn)	11.18	227.3	227.1	227	185	5
						170	10
89	아세토클로르* (Acetochlor)	10.76	269.8	269.1	223	146	10
						132	20
	에이치이엠에이* (HEMA(2-(1-hydroxyl-ethyl)-6-methyl-aniline))	6.28	151.2	151.0	151	117	40
						132	20
	이엠에이* (EMA(2-ethyl-6-methylaniline))	5.14	135.2	135.1	120	77	20
					135	120	10
90	아스폰 (Aspon)	11.93	378.4	378.0	211	115	10
						97	35
91	아이소티아닐 (Isotianil)	17.48	298.1	296.9	180	91	20
					297	180	15
92	아이소펜포스 (Isofenphos)	13.28	345.4	345.1	213	121	20
						185	5
93	아이소펜포스-메틸 (Isofenphos-methyl)	12.85	331.4	331.1	199	93	30
						121	15
94	아이소프로카브 (Isoprocarb)	7.17	193.2	193.1	136	121	10
						77	30
95	아이소프로티올레인 (Isoprothiolane)	14.86	290.4	290.0	189	89	20
						145	10
96	아이소프로파린 (Isopropalin)	12.82	309.4	309.1	238	165	10
					280	238	5
97	아이소피라잠 (Isopyrazam)	21.87	359.4	359.1	359	159	40
					159	139	10
98	아이속사디펜-에틸 (Isoxadifen-ethyl)	17.19	295.3	295.1	222	205	5
						204	20
99	아자코나졸 (Azaconazole)	15.39	300.1	299.0	219	175	15
					217	173	15
100	아크리나트린* (Acrinathrin)	21.70	541.4	541.1	208	181	5
					289	93	10
101	아트라진 (Atrazine)	9.21	216.7	215.0	215	200	10
						58	15
102	알드린** (Aldrin)	12.18	364.9	361.8	263	193	40
						191	40
	디엘드린** (Dieldrin)	15.20	380.9	377.8	263	193	40
					265	193	40
103	알라클로르 (Alachlor)	10.99	269.8	269.1	188	160	10
					160	130	30
104	알리도클로르 (Allidochlor)	5.38	173.6	173.0	134	56	5
					132	56	5
105	에디펜포스* (Edifenphos)	17.36	310.4	310.0	173	109	10
					201	109	15
106	에타코나졸 (Etaconazole)	16.35	328.2	327.0	173	109	25
					245	173	20
107	에탈플루랄린 (Ethalfluralin)	8.12	333.3	333.0	276	202	15
					316	276	5
108	에토퓨메세이트 (Ethofumesate)	11.67	286.3	286.0	161	105	10
					207	137	10
109	에토프로포스 (Ethoprophos)	8.06	242.3	242.0	158	114	5
						97	20
110	에톡사졸 (Etoxazole)	19.65	359.4	359.1	300	270	25
					204	176	10
111	에트리디아졸 (Etridiazole)	6.55	247.5	245.9	211	140	25
						183	10
112	에티온 (Ethion)	16.45	384.5	383.9	231	129	25
						175	10
113	에티클로제이트 (Ethychlozate)	13.29	238.7	238.0	165	138	10
						102	15
114	에폭시코나졸 (Epoxiconazole)	18.57	329.8	329.0	192	111	25
						138	15
115	α-엔도설판 (α-Endosulfan)	14.36	406.9	403.8	241	206	15
					205	170	15
	β-엔도설판 (β-Endosulfan)	16.20	406.9	403.8	205	170	15
					207	172	15
	엔도설판 설페이트 (Endosulfan sulfate)	17.43	422.9	419.8	274	237	25
					272	237	20
116	엔드린 (Endrin)	15.85	380.9	377.8	263	193	40
						191	35
	δ-케토-엔드린 (δ-keto-Endrin)	18.80	380.9	377.8	317	281	10
						245	20
117	엠지케이-264 (MGK-264)	13.11	275.4	275.1	164	67	5
						98	10
118	오쏘페닐페놀* (Ortho-phenyl phenol)	7.10	170.2	170.0	169	115	30
						141	15
119	옥사디아존 (Oxadiazon)	15.12	345.2	344.0	175	112	5
					258	175	15
120	옥사딕실 (Oxadixyl)	16.33	278.3	278.1	163	117	25
						132	5
121	옥시플루오르펜 (Oxyfluorfen)	15.29	361.7	361.0	300	223	20
					361	300	20
122	이사조포스 (Isazofos)	9.93	313.7	313.0	257	162	5
					208	166	10
123	이프로디온* (Iprodione)	19.03	330.2	329.0	314	56	20
						245	10
124	이프로벤포스 (Iprobenfos)	10.28	288.3	288.0	204	91	10
						121	35
125	이프코나졸 (Ipconazole)	21.28	333.9	333.1	125	99	20
						89	20
126	이피엔 (EPN)	19.29	323.3	323.0	169	141	5
					157	77	30
127	이피티씨 (EPTC)	5.88	189.3	189.1	132	90	5
					189	128	5
128	인다노판 (Indanofan)	19.78	340.8	340.0	139	75	35
					159	103	15
129	인독사카브** (Indoxacarb)	27.34	527.8	527.0	203	106	25
						134	15
130	족사마이드 (Zoxamide)	18.62	336.6	335.0	187	159	20
						123	30
131	카두사포스 (Cadusafos)	8.56	270.4	270.0	159	97	20
					158	97	20
132	카보페노티온 (Carbophenothion)	17.30	342.9	341.9	344	159	5
					342	157	5
133	카복신 (Carboxin)	15.32	235.3	235.0	235	143	10
						87	20
134	카펜트라존에틸* (Carfentrazone-ethyl)	17.24	412.2	411.0	340	312	10
					312	151	20
135	코마포스 (Coumaphos)	22.61	362.8	362.0	210	182	5
					226	163	10
136	퀴날포스 (Quinalphos)	13.49	298.3	298.0	146	118	10
						91	30
137	퀴녹시펜 (Quinoxyfen)	17.43	308.1	306.9	237	208	30
					307	237	20
138	퀴잘로포프에틸* (Quizalofop-ethyl)	24.68	372.8	372.0	372	299	10
					299	255	15
139	퀸토젠 (Quintozene)	9.35	295.3	292.8	249	214	10
					295	237	20
140	크레속심메틸 (Kresoxim-methyl)	15.37	313.4	313.1	131	89	35
					116	89	15
141	클로로넵 (Chloroneb)	6.94	207.1	205.9	193	53	30
					191	113	15
142	클로로벤질레이트 (Chlorobenzilate)	16.14	325.2	324.0	251	139	10
					139	111	10
143	클로로탈로닐* (Chlorothalonil)	9.79	265.9	263.8	266	231	20
						170	30
144	클로로프로필레이트 (Chloropropylate)	16.14	339.2	338.0	251	139	10
					139	111	10
145	클로르니트로펜 (Chlornitrofen)	17.19	318.5	316.9	317	287	15
					236	173	5
146	클로르단-시스 (Chlordane-cis)	14.36	409.8	405.7	375	266	20
					373	266	20
	클로르단-트랜스 (Chlordane-trans)	13.97	409.8	405.7	375	266	20
					373	266	20
147	클로르벤시드** (Chlorbenside)	13.97	269.2	267.9	268	125	10
					125	89	15
148	클로르부팜 (Chlorbufam)	9.21	223.7	223.0	223	53	15
						127	15
149	클로르에톡시포스 (Chlorethoxyfos)	7.88	336.0	333.8	153	97	15
					97	47	35
150	클로르탈-디메틸 (Chlorthal-dimethyl)	12.18	332.0	329.9	299	221	25
					301	223	25
151	클로르티오포스 (Chlorthiophos)	16.52	361.2	359.9	325	269	10
					269	205	10
152	클로르티온 (Chlorthion)	12.47	297.6	296.9	125	47	10
					297	109	10
153	클로르페나피르 (Chlorfenapyr)	15.60	407.6	405.9	247	227	15
					328	247	20
154	클로르펜손 (Chlorfenson)	14.72	303.2	301.9	175	111	10
					111	75	15
155	클로르프로팜 (Chlorpropham)	8.25	213.7	213.0	171	127	15
					153	90	25
156	클로르플루레놀-메틸 (Chlorflurenol-methyl)	13.79	274.7	274.0	217	152	25
					215	152	20
157	클로르피리포스 (Chlorpyrifos)	12.05	350.6	348.9	314	258	20
					199	171	15
158	클로르피리포스-메틸 (Chlorpyrifos-methyl)	10.80	322.5	320.8	286	271	20
						93	20
159	클로마존 (Clomazone)	9.32	239.7	239.0	125	89	15
					204	107	25
160	클로졸리네이트 (Chlozolinate)	13.22	332.1	331.0	331	259	5
					259	188	10
161	키노메티오네이트* (Chinomethionat)	13.99	234.3	233.9	234	206	5
					206	148	15
162	터바실 (Terbacil)	9.89	216.7	216.0	160	76	15
					161	88	20
163	터부메톤 (Terbumeton)	9.32	225.3	225.1	169	154	10
					210	100	20
164	터부트린 (Terbutryn)	11.60	241.4	241.1	185	170	5
					241	185	0
165	테부코나졸 (Tebuconazole)	18.09	307.8	307.1	250	125	30
					252	127	30
166	테부펜피라드 (Tebufenpyrad)	19.89	333.9	333.1	276	171	10
					333	171	20
167	테부피림포스 (Tebupirimfos)	10.21	318.4	318.1	276	234	5
					261	137	15
168	테크나젠 (Tecnazene)	7.70	260.9	258.8	213	142	25
					215	179	25
169	테트라디폰 (Tetradifon)	20.21	356.0	353.8	229	201	10
					159	111	20
170	테트라메트린* (Tetramethrin)	19.18	331.4	331.1	164	77	25
						107	15
171	테트라코나졸 (Tetraconazole)	12.34	372.1	371.0	336	204	40
						218	20
172	테트라클로르빈포스 (Tetrachlorvinphos)	14.10	366.0	363.8	329	109	25
					331	109	25
173	테플루트린 (Tefluthrin)	9.95	418.7	418.0	177	137	20
						127	20
174	톨클로포스메틸 (Tolclofos-methyl)	11.00	301.1	299.9	265	93	30
						250	15
175	트랄로메트린 (Tralomethrin) (Deltamethrin으로 분석)	27.20	665.0	660.0	253	93	15
						174	27
176	트리디판** (Tridiphane)	11.29	320.4	317.8	173	109	30
					187	159	15
177	트리아디메폰 (Triadimefon)	12.36	293.8	293.0	208	111	35
						181	10
	트리아디메놀 (Triadimenol)	13.59	295.8	295.1	130	65	25
					128	65	20
178	트리아조포스 (Triazophos)	16.94	313.3	313.0	161	134	5
						106	15
179	트리알레이트 (Tri-allate)	10.11	304.7	303.0	268	184	10
						226	20
180	트리플록시스트로빈 (Trifloxystrobin)	17.49	408.4	408.1	116	89	15
					222	130	10
181	트리플루랄린 (Trifluralin)	8.26	335.3	335.1	264	206	5
					306	264	10
182	트리플루미졸 (Triflumizole)	13.66	345.8	345.0	206	179	15
					278	43	15
183	티오나진 (Thionazin)	7.76	248.2	248.0	192	96	15
					248	140	10
184	티오메톤 (Thiometon)	8.89	246.3	245.9	125	47	25
					93	63	5
185	티플루자마이드 (Thifluzamide)	15.10	528.1	525.8	194	125	25
						166	10
186	파라티온 (Parathion)	12.27	291.3	291.0	291	81	40
						109	10
187	파라티온메틸 (Parathion-methyl)	10.96	263.2	263.0	263	79	35
						109	15
188	파클로부트라졸 (Paclobutrazol)	14.14	293.8	293.1	236	125	10
						167	5
189	퍼메트린-시스*** (Permethrin-cis)	22.72	391.3	390.0	183	168	20
						155	10
	퍼메트린-트랜스*** (Permethrin-trans)	22.97				168	20
						155	10
190	퍼탄 (Perthane)	15.92	307.3	306.0	223	165	20
						193	20
191	페나리몰 (Fenarimol)	21.40	331.2	330.0	251	139	15
					219	107	10
192	페나미돈 (Fenamidone)	19.67	311.4	311.1	268	180	20
					238	237	10
193	페노뷰카브 (Fenobucarb)	7.77	207.3	207.1	121	103	15
					150	121	5
194	페노티오카브 (Fenothiocarb)	14.26	253.4	253.1	72	56	10
					160	72	8
195	페녹사닐** (Fenoxanil)	15.84	329.2	328.0	189	125	10
						154	10
196	페니트로티온 (Fenitrothion)	11.61	277.2	277.0	277	260	5
						109	20
197	펜디메탈린 (Pendimethalin)	12.99	281.3	281.1	252	162	10
						208	0
198	펜발러레이트, 이성체 1* (Fenvalerate, Iso. 1)	26.06	419.9	419.1	167	125	10
					169	127	10
	펜발러레이트, 이성체 2* (Fenvalerate, Iso. 2)	26.47	419.9	419.1	167	125	10
					169	127	10
199	펜뷰코나졸 (Fenbuconazole)	23.57	336.8	336.1	198	129	5
					129	78	20
200	펜손 (Fenson)	12.64	268.7	267.9	141	77	10
					268	77	20
201	펜코나졸 (Penconazole)	13.18	284.2	283.0	248	157	30
						192	20
202	펜클로르포스 (Fenchlorphos)	11.24	321.5	319.9	285	270	20
						240	30
203	펜클로림** (Fenclorim)	8.78	225.1	223.9	189	104	10
					224	189	20
204	펜타클로로벤조니트릴 (Pentachlorobenzonitrile)	9.43	275.3	272.8	275	179	30
						240	20
205	펜토에이트 (Phenthoate)	13.47	320.4	320.0	274	125	15
						121	10
206	펜톡사존 (Pentoxazone)	20.47	353.8	353.0	287	70	10
					285	70	15
207	펜티오피라드 (Penthiopyrad)	16.34	359.4	359.1	302	177	20
					177	101	20
208	펜티온 (Fenthion)	12.17	278.3	278.0	278	109	20
						169	20
209	펜퓨람 (Fenfuram)	9.99	201.2	201.0	201	109	25
					109	53	20
210	펜프로파트린*** (Fenpropathrin)	19.71	349.4	349.1	265	210	10
						89	40
211	펜프로피모르프 (Fenpropimorph)	12.28	303.5	303.2	128	70	15
						110	10
212	펜플루펜 (Penflufen)	16.80	317.4	317.1	141	84	15
					274	141	15
213	펜피라자민 (Fenpyrazamine)	21.33	331.4	331.1	230	188	10
						117	30
214	포노포스 (Fonofos)	9.64	246.3	246.0	246	137	5
						109	15
215	포모티온 (Formothion)	10.40	257.3	256.9	126	93	5
					170	93	15
216	포사론 (Phosalone)	20.43	367.8	366.9	182	138	5
						102	15
217	포스멧 (Phosmet)	19.15	317.3	316.9	160	133	10
						77	30
218	포스파미돈(E) (Phosphamidon E)	9.52	299.7	299.0	264	127	10
					127	109	15
	포스파미돈(Z) (Phosphamidon Z)	10.42	299.7	299.0	264	127	10
					127	109	15
219	프레틸라클로르 (Pretilachlor)	14.86	311.9	311.1	162	132	20
					262	202	5
220	프로디아민 (Prodiamine)	11.59	350.3	350.1	275	255	10
					321	279	10
221	프로메톤 (Prometon)	9.09	225.3	225.1	183	168	5
					210	168	10
222	프로메트린 (Prometryn)	11.26	241.4	241.1	226	184	10
					241	199	10
223	프로사이미돈 (Procymidone)	13.57	284.1	283.0	283	96	5
					285	96	5
224	프로클로라즈* (Prochloraz)	22.97	376.7	375.0	308	70	15
					180	138	10
	2,4,6-트리클로로페놀* (2,4,6-trichlorophenol)	5.90	376.7	375.0	132	97	15
					196	97	40
225	프로티오포스 (Prothiofos)	14.81	345.2	343.9	267	221	20
						239	10
226	프로파닐 (Propanil)	10.67	218.1	217.0	161	126	25
					217	161	25
227	프로파진 (Propazine)	9.29	229.7	229.1	229	58	15
					214	172	10
228	프로파클로르 (Propachlor)	7.82	211.7	211.0	169	93	10
					176	92	20
229	프로팜 (Propham)	6.57	179.2	179.0	179	93	15
					137	93	8
230	프로페노포스 (Profenofos)	14.95	373.6	371.9	337	267	10
					339	269	10
231	프로페탐포스 (Propetamphos)	9.47	281.3	281.0	138	64	20
					194	166	5
232	프로플루랄린 (Profluralin)	9.39	347.3	347.1	318	199	20
						55	10
233	프로피소클로르 (Propisochlor)	11.10	283.8	283.1	162	120	20
						147	15
234	프로피자마이드 (Propyzamide)	9.59	256.1	255.0	173	145	20
						109	35
235	프로피코나졸, 이성체 1 (Propiconazole, Iso. 1)	17.42	342.2	341.0	259	69	10
						173	5
	프로피코나졸, 이성체 2 (Propiconazole, Iso. 2)	17.62				69	10
						173	5
236	프로하드로자스몬 (Prohydrojasmon)	9.91	254.4	254.1	153	97	5
					184	83	15
237	프탈리드 (Phthalide, Fthalide)	12.52	271.9	269.8	241	213	15
					243	215	15
238	플람프로프-아이소프로필 (Flamprop-isopropyl)	16.19	363.8	363.1	105	77	15
						51	40
239	플루메트랄린 (Flumetralin)	14.20	421.7	421.0	143	117	20
						107	30
240	플루미옥사진 (Flumioxazin)	25.95	354.3	354.1	354	326	5
					287	259	5
241	플루발리네이트, 이성체 1* (Fluvalinate, Iso. 1)	26.36	502.9	502.1	250	55	20
						200	20
	플루발리네이트, 이성체 2* (Fluvalinate, Iso. 2)	26.51				55	20
						200	20
242	플루시트리네이트, 이성체 1** (Flucythrinate, Iso. 1)	24.74	451.5	451.1	157	107	15
					199	107	25
	플루시트리네이트, 이성체 2** (Flucythrinate, Iso. 2)	25.13			157	107	15
					199	107	25
243	플루실라졸 (Flusilazole)	15.26	315.4	315.1	233	165	20
						152	20
244	플루아지포프-뷰틸 (Fluazifop-butyl)	15.96	383.4	383.1	282	91	5
						238	25
245	플루아크리피림 (Fluacrypyrim)	16.80	426.4	426.1	145	102	30
					204	189	5
246	플루엔설폰 Fluensulfone	7.70	291.7	290.9	119	59	30
						92	10
247	플루오로클로리돈 (Fluorochloridone)	12.49	312.1	311.0	187	109	20
					311	174	20
248	플루오피람 (Fluopyram)	13.35	396.7	396.0	173	95	35
						145	20
249	플루퀸코나졸 (Fluquinconazole)	22.84	376.2	375.0	340	108	40
						286	30
250	플루클로랄린 (Fluchloralin)	9.66	355.7	355.0	306	264	5
					326	63	15
251	플루티아닐 (Flutianil)	25.19	426.4	426.0	231	216	5
						200	10
252	플루펜피르-에틸 (Flufenpyr-ethyl)	16.15	408.7	408.0	408	345	15
					321	286	15
253	플룩사피록사드 (Fluxapyroxad)	19.27	381.3	380.0	159	43	30
						139	10
254	피라조포스 (Pyrazophos)	21.52	373.4	373.0	232	204	10
					221	193	10
255	피라카볼리드 (Pyracarbolid)	12.70	217.3	217.1	125	97	5
						55	15
256	피라클로포스** (Pyraclofos)	22.04	360.8	360.0	194	138	20
						139	10
257	피라플루펜에틸 (Pyraflufen-ethyl)	17.71	413.2	412.0	412	349	10
					349	307	15
258	피리달릴*** (Pyridalyl)	25.10	491.1	488.9	204	176	10
						148	20
259	피리메타닐 (Pyrimethanil)	9.77	199.3	199.1	198	118	35
						158	20
260	피리미노박메틸(E) (Pyriminobac-methyl E)	17.58	361.4	361.1	302	230	15
						256	20
	피리미노박메틸(Z) (Pyriminobac-methyl Z)	16.14				230	15
						256	20
261	피리미카브 (Pirimicarb)	10.22	238.3	238.1	166	96	12
					238	166	10
262	피리미포스메틸 (Pirimiphos-methyl)	11.55	305.3	305.0	290	125	20
					233	151	5
263	피리미포스에틸 (Pirimiphos-ethyl)	12.69	333.4	333.1	304	168	10
					318	166	10
264	피리페녹스 (Pyrifenox)	14.06	295.2	294.0	187	124	20
					171	100	25
265	피리프탈리드 (Pyriftalid)	21.50	318.3	318.0	318	273	20
						274	5
266	피콕시스트로빈 (Picoxystrobin)	14.41	367.3	367.1	145	102	30
					335	173	10
267	피페로닐부톡사이드 (Piperonyl butoxide)	18.50	338.4	338.2	176	131	25
						145	10
268	피프로닐 (Fipronil)	13.10	437.1	435.9	367	213	30
						255	30
269	할펜프록스*** (Halfenprox)	24.51	477.3	476.0	265	117	10
					263	129	40
270	헥시티아족스 (Hexythiazox)	13.96	352.9	352.1	184	149	5
					156	155	5
271	헵타클로르 (Heptachlor)	11.22	373.3	369.8	272	237	20
					274	237	20
	헵타클로르 에폭사이드 (Heptachlor epoxide)	13.26	389.3	385.8	353	253	30
					217	182	20
272	헵테노포스 (Heptenophos)	7.46	250.6	250.0	124	63	40
						89	15

2) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 등등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
13.0	0	100
18.0	0	100
18.1	95	5
25.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

바) 분석대상(242종) 물질의 조건

	분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
1	나프로파마이드 (Napropamide)	Positive	9.20	271.4	271.1	272	129	21
							171	23
2	네뷰론 (Neburon)	Positive	9.60	275.2	274.0	275	88	23
							114	21
3	노레아(노루론) (Norea(Noruron))	Positive	8.17	222.3	222.1	223	72	39
							67	49
4	노르플루라존 (Norflurazon)	Positive	7.48	303.7	303.0	304	140	49
							145	61
5	노발루론* (Novaluron)	Negative	11.18	492.7	492.0	491	471	18
							156	22
6	니텐피람 (Nitenpyram)	Positive	4.65	270.7	270.0	271	225	17
							126	39
7	다이뮤론 (Daimuron)	Positive	8.60	268.4	268.1	269	151	17
							119	27
8	도딘 (Dodine)	Positive	9.46	287.4	287.2	228	43	51
							57	37
9	디노테퓨란 (Dinotefuran)	Positive	4.40	202.2	202.1	203	129	17
							113	17
10	디메토에이트 (Dimethoate)	Positive	5.56	229.2	228.9	230	125	27
							199	13
11	데메톤-S (Demeton-S)	Positive	7.92	258.3	258.0	259	89	17
							61	47
	데메톤-S-설폰 (Demeton-S-sulfone)	Positive	5.71	290.3	290.0	291	235	21
							99	29
	데메톤-S-설폭사이드 (Demeton-S-sulfoxide)	Positive	5.62	274.3	274.0	275	141	29
							109	33
	디설포톤 (Disulfoton)	Positive	10.93	274.4	274.0	275	89	21
							61	45
	디설포톤 설폰 (Disulfoton sulfone)	Positive	7.15	306.4	306.0	307	125	23
							153	17
	디설포톤 설폭사이드 (Disulfoton sulfoxide)	Positive	7.04	290.4	290.0	291	185	19
							129	41
12	데메톤-S-메틸 (Demeton-S-methyl)	Positive	6.65	230.3	230.0	231	89	19
							61	43
13	데메톤-S-메틸-설폰 (Demeton-S-methyl-sulfone)	Positive	4.98	262.3	262.0	263	169	21
							109	37
14	디우론 (Diuron)	Positive	7.45	233.1	232.0	233	72	37
							46	31
15	디클로르보스 (Dichlorvos)	Positive	6.41	221.0	219.9	221	109	23
							127	21
16	디클로슐람 (Diclosulam)	Positive	6.87	406.2	404.9	406	161	33
							125	83
17	디플루벤주론 (Diflubenzuron)	Positive	9.41	310.7	310.0	311	158	19
							141	45
18	레나실 (Lenacil)	Positive	7.30	234.3	234.1	235	153	23
							136	45
19	레피멕틴 A3* (Lepimectin A3)	Positive	13.70	705.8	705.3	728	549	31
							531	39
	레피멕틴 A4* (Lepimectin A4)	Positive	14.19	719.9	719.3	742	563	33
							545	39
20	루페뉴론 (Lufenuron)	Negative	11.99	511.1	509.9	509	339	18
							326	28
21	리뉴론 (Linuron)	Positive	8.13	249.1	248.0	249	160	23
							182	19
22	만데스트로빈 (Mandestrobin)	Positive	9.98	313.4	313.1	314	192	15
							132	39
23	만디프로파미드 (Mandipropamid)	Positive	9.82	411.9	411.1	412	366	25
							384	21
24	말라티온 (Malathion)	Positive	8.57	330.4	330.0	331	127	17
							125	39
25	말라옥손 (Malaoxon)	Positive	6.55	314.3	314.0	315	127	17
							99	35
26	메빈포스 (Mevinphos)	Positive	5.85	224.1	224.0	225	127	23
							193	13
27	메소트리온* (Mesotrione)	Positive	5.74	339.3	339.0	340	228	25
							104	41
28	메카밤 (Mecarbam)	Positive	9.22	329.4	329.0	330	227	13
							199	19
29	메타미도포스 (Methamidophos)	Positive	2.38	141.1	141.0	142	94	21
							125	19
30	메타미트론 (Metamitron)	Positive	5.57	202.2	202.0	203	104	31
							175	23
31	메타미포프 (Metamifop)	Positive	11.46	440.9	440.0	441	288	27
							123	41
32	메타벤즈티아주론 (Methabenzthiazuron)	Positive	7.33	221.3	221.0	222	165	23
							150	45
33	메타플루미존(E) (Metaflumizone E)	Positive	11.68	506.4	506.1	507	178	37
							287	35
	메타플루미존(Z) (Metaflumizone Z)	Positive	10.89	506.4	506.1		178	37
							287	35
34	메토미노스트로빈 (Metominostrobin)	Positive	7.56	284.3	284.1	285	194	27
							196	19
35	메토밀 (Methomyl)	Positive	4.90	162.2	162.0	163	88	13
							106	13
36	메토브로뮤론 (Metobromuron)	Positive	7.24	259.1	258.0	259	170	23
							148	23
37	메톡시페노자이드 (Methoxyfenozide)	Positive	8.52	368.5	368.2	369	149	23
							313	11
38	메톨카브 (Metolcarb)	Positive	6.30	165.2	165.0	166	109	17
							94	41
39	메트라페논 (Metrafenone)	Positive	10.70	409.3	408.0	409	209	23
							227	29
40	메트코나졸 (Metconazole)	Positive	10.25	319.8	319.1	320	70	43
							125	61
41	메티오카브 (Methiocarb)	Positive	8.16	225.3	225.0	226	169	13
							122	31
42	메페나셋 (Mefenacet)	Positive	8.78	298.4	298.0	299	148	19
							120	35
43	메펜트리플루코나졸 (Mefentrifluconazole)	Positive	10.04	397.8	397.0	398	70	51
							182	41
44	메포스폴란 (Mephosfolan)	Positive	6.40	269.3	269.0	270	168	21
							140	21
45	모노크로토포스 (Monocrotophos)	Positive	5.00	223.2	223.0	224	193	11
							127	21
46	바미도티온 (Vamidothion)	Positive	5.47	287.3	287.0	288	146	17
							118	31
47	바이오레스메트린* (Bioresmethrin)	Positive	14.02	338.4	338.1	339	171	21
							143	35
48	발리페날레이트 (Valifenalate)	Positive	8.77	398.9	398.1	399	155	45
							116	35
49	버놀레이트 (Vernolate)	Positive	10.82	203.3	203.1	204	128	15
							86	19
50	베나락실 (Benalaxyl)	Positive	10.06	325.4	325.1	326	148	29
							91	51
51	벤디오카브 (Bendiocarb)	Positive	6.54	223.2	223.0	224	109	25
							167	13
52	벤설라이드 (Bensulide)	Positive	9.51	397.5	397.0	398	314	15
							356	11
53	벤조비사이클론 (Benzobicyclon)	Positive	8.41	467.0	446.0	447	257	35
							229	51
54	벤족시메이트 (Benzoximate)	Positive	10.70	363.8	363.0	364	199	11
							105	35
55	벤티아발리카브아이소프로필(R) (Benthiavalicarb-isopropyl R)	Positive	8.59	381.5	381.1	382	180	43
							197	27
	벤티아발리카브아이소프로필(S) (Benthiavalicarb-isopropyl S)	Positive	8.81	381.5	381.1		180	43
							197	27
56	뷰토카복심 (Butocarboxim)	Positive	6.03	190.3	190.0	213	75	19
							156	15
57	브로마실 (Bromacil)	Positive	6.58	261.1	260.0	261	205	21
							188	41
58	비스트리플루론 (Bistrifluron)	Negative	12.60	446.7	446.0	445	262	34
							186	80
59	비터타놀* (Bitertanol)	Positive	10.27	337.4	337.1	338	269	13
							99	21
60	빅사펜 (Bixafen)	Positive	9.53	414.2	413.0	414	394	21
							266	33
61	사이목사닐 (Cymoxanil)	Positive	10.70	198.2	198.0	199	184	25
							141	37
62	사이아조파미드 (Cyazofamid)	Positive	9.18	324.8	324.0	325	108	21
							261	13
63	사이안트라닐리프롤 (Cyantraniliprole)	Positive	6.78	473.7	472.0	475	286	23
							112	81
64	사이에노피라펜 (Cyenopyrafen)	Positive	12.87	393.5	393.2	394	310	35
							254	45
65	사이클라닐리프롤 (Cyclaniliprole)	Positive	9.46	602.1	598.9	600	284	21
							112	113
66	사이클로프로트린 (Cycloprothrin)	Positive	13.03	482.4	481.0	499	181	45
							257	19
67	사이클로에이트 (Cycloate)	Positive	10.97	215.4	215.1	216	83	23
							134	19
68	사이프로코나졸, 이성질체1 (Cyproconazole, Isomer1)	Positive	8.55	291.8	291.1	292	70	35
							125	39
	사이프로코나졸, 이성질체2 (Cyproconazole, Isomer2)	Positive	8.82	291.8	291.1	292	70	35
							125	39
69	사이플루메토펜 (Cyflumetofen)	Positive	11.38	447.5	447.1	465	173	33
							249	19
70	사플루페나실 (Saflufenacil)	Positive	7.78	500.9	500.0	501	198	59
							349	35
71	설펜트라존 (Sulfentrazone)	Positive	6.64	387.2	385.9	404	387	19
							307	35
72	설폭사플로르 (Sulfoxaflor)	Positive	5.66	277.3	277.0	278	174	13
							154	39
73	설프로포스 (Sulprofos)	Positive	12.64	322.4	322.0	323	219	21
							139	41
74	세닥산-시스 (Sedaxane-cis)	Positive	8.68	331.4	331.1	332	292	26
							159	38
	세닥산-트랜스 (Sedaxane-trans)	Positive	9.17	331.4	331.1		292	26
							159	38
75	세크뷰메톤 (Secbumeton)	Positive	7.21	225.3	225.1	226	170	27
							100	39
76	세톡시딤 (Sethoxydim)	Positive	11.90	327.5	327.1	328	178	25
							282	17
77	스피네토람-J (Spinetoram-J)	Positive	10.46	748.0	747.4	748	142	37
							98	99
	스피네토람-L (Spinetoram-L)	Positive	11.09	760.0	759.4	760	142	35
							98	99
78	스피노신 A (Spinosyn A)	Positive	9.62	732.0	731.4	732	142	37
							98	97
	스피노신 D (Spinosyn D)	Positive	10.23	746.0	745.4	746	142	37
							98	97
79	스피로디클로펜 (Spirodiclofen)	Positive	13.01	411.3	410.1	411	313	17
							213	47
80	스피로테트라맷* (Spirotetramat)	Positive	8.93	373.4	373.1	374	302	23
							216	45
	스피로테트라맷-엔올* (Spirotetramat-enol)	Positive	6.93	301.4	301.1	302	216	37
							117	47
81	시마진 (Simazine)	Positive	6.62	201.7	201.0	202	132	25
							124	25
82	시아나진 (Cyanazine)	Positive	6.27	240.7	240.0	241	214	25
							104	43
83	아메톡트라딘 (Ametoctradin)	Positive	10.59	275.4	275.2	276	176	51
							149	49
84	아미설브롬 (Amisulbrom)	Positive	11.27	466.3	464.9	466	227	27
							148	67
85	아미트라즈* (Amitraz)	Positive	13.47	293.4	293.1	294	163	21
							122	41
86	아바멕틴* (아바멕틴 B1a) (Abamectin B1a)	Positive	13.86	873.1	872.4	891	305	31
							568	19
87	아세타미프리드 (Acetamiprid)	Positive	5.51	222.7	222.0	223	126	29
							99	53
88	아세페이트 (Acephate)	Positive	3.60	183.2	183.0	184	143	11
							95	29
89	아이소프로튜론 (Isoproturon)	Positive	7.36	206.3	206.1	207	72	31
							134	31
90	아이속사벤 (Isoxaben)	Positive	8.33	332.4	332.1	333	165	23
							107	77
91	아이속사티온 (Isoxathion)	Positive	10.58	313.3	313.0	314	286	13
							170	19
92	아자메티포스 (Azamethiphos)	Positive	6.36	324.7	323.9	325	112	47
							139	35
93	아족시스트로빈 (Azoxystrobin)	Positive	7.88	403.4	403.1	404	372	21
							344	35
94	아진포스메틸 (Azinphos-methyl)	Positive	7.83	317.3	317.0	318	132	19
							160	19
95	알디카브 (Aldicarb)	Positive	6.09	190.3	190.0	208	116	11
							89	23
96	알레트린 (Allethrin)	Positive	11.97	302.4	302.1	303	135	15
							91	53
97	에마멕틴 벤조에이트 (에마멕틴 B1a) (Emamectin B1a)	Positive	11.25	886.1	885.5	886	82	111
							158	43
98	에스프로카브 (Esprocarb)	Positive	11.87	265.4	265.1	266	91	33
							65	79
99	에타복삼 (Ethaboxam)	Positive	6.96	320.4	320.0	321	183	31
							200	35
100	에토펜프록스 (Etofenprox)	Positive	14.84	376.5	376.2	394	177	21
							135	33
101	에트림포스 (Etrimfos)	Positive	10.22	292.3	292.0	293	125	33
							265	21
102	에티오펜카브 (Ethiofencarb)	Positive	6.96	225.3	225.0	226	169	9
							107	23
103	엑스엠씨 (XMC)	Positive	6.99	179.2	179.0	180	123	15
							77	79
104	오리사스트로빈 (Orysastrobin)	Positive	8.51	391.4	391.1	392	205	21
							116	31
105	오리잘린 (Oryzalin)	Negative	9.06	346.4	346.0	345	281	32
							147	36
106	오메토에이트 (Omethoate)	Positive	4.20	213.2	213.0	214	125	29
							183	15
107	오퓨레이스 (Ofurace)	Positive	6.52	281.7	281.0	282	160	31
							254	17
108	옥사디아길 (Oxadiargyl)	Positive	10.37	341.2	340.0	341	151	39
							222	37
109	옥사밀 (Oxamyl)	Positive	4.67	219.3	219.0	237	90	11
							72	29
	옥사밀 옥심 (Oxamyl oxime)	Positive	4.17	162.0	162.2	163	72	17
							90	23
110	옥사지클로메폰 (Oxaziclomefone)	Positive	11.50	376.3	375.0	376	190	19
							161	39
111	옥사티아피프롤린 (Oxathiapiprolin)	Positive	8.36	539.5	539.1	540	500	43
							163	43
112	옥시데메톤메틸 (Oxydemeton-methyl)	Positive	4.80	246.3	246.0	247	169	21
							109	39
113	옥시카복신 (Oxycarboxin)	Positive	5.75	267.3	267.0	268	175	21
							147	31
114	유니코나졸 (Uniconazole)	Positive	9.19	291.8	291.1	292	70	41
							125	39
115	육-비에이 (Benzyladenine, 6-Benzyl aminopurine)	Negative	6.04	225.2	225.1	224	133	30
							106	42
116	이나벤파이드 (Inabenfide)	Positive	8.03	338.8	338.0	339	80	49
							321	23
117	이마잘릴 (Imazalil)	Positive	6.65	297.2	296.0	297	159	33
							69	35
118	이미다클로프리드 (Imidacloprid)	Positive	5.31	255.7	255.0	256	209	21
							212	17
119	이미벤코나졸 (Imibenconazole)	Positive	11.80	411.7	409.9	411	125	50
							171	28
120	이미시아포스 (Imicyafos)	Positive	6.17	304.3	304.1	305	201	31
							235	25
121	이프로발리카브 (Iprovalicarb)	Positive	8.97	320.4	320.2	321	119	35
							203	15
122	이프펜카바존 (Ipfencarbazone)	Positive	9.95	427.2	426.0	427	198	17
							156	31
123	카바릴 (Carbaryl)	Positive	6.77	201.2	201.0	202	145	15
							127	39
124	카베타마이드 (Carbetamide)	Positive	6.27	236.3	236.1	237	192	11
							120	23
125	카벤다짐 (Carbendazim)	Positive	5.01	191.2	191.0	192	160	25
							132	41
126	카보퓨란* (Carbofuran)	Positive	6.56	221.3	221.1	222	165	17
							123	29
	3-하이드록시카보퓨란* (3-hydroxycarbofuran)	Positive	5.53	237.3	237.1	238	181	15
							163	23
127	카펜스트롤 (Cafenstrole)	Positive	8.67	350.4	350.1	351	100	19
							72	41
128	카프로파마이드 (Carpropamide)	Positive	9.97	334.7	333.0	334	139	31
							196	17
129	크로톡시포스 (Crotoxyphos)	Positive	8.24	314.3	314.0	332	211	13
							127	35
130	퀴노클라민 (Quinoclamine)	Positive	8.39	207.6	207.0	208	151	13
							109	23
131	크로마페노자이드 (Chromafenozide)	Positive	8.90	394.5	394.2	395	175	21
							339	11
132	크루포메이트 (Crufomate)	Positive	9.40	291.7	291.0	292	236	27
							204	37
133	클로란트라닐리프롤 (Chlorantraniliprole)	Positive	7.65	483.1	480.9	484	453	27
							286	19
134	클로로벤주론 (Chlorobenzuron)	Positive	9.81	309.1	308.0	309	156	21
							139	43
135	클로로톨루론 (Chlorotoluron)	Positive	7.11	212.7	212.0	213	72	39
							104	43
136	클로록수론 (Chloroxuron)	Positive	8.74	290.7	290.0	291	72	47
							111	63
137	클로르펜빈포스(E) (Chlorfenvinphos E)	Positive	10.10	359.6	357.9	359	155	17
							99	45
	클로르펜빈포스(Z) (Chlorfenvinphos Z)	Positive	10.50	359.6	357.9		155	17
							99	45
138	클로르플루아주론 (Chlorfluazuron)	Positive	13.14	540.7	538.9	540	383	31
							158	33
139	클로리다존 (Chloridazone)	Positive	5.61	221.6	221.0	222	104	33
							77	53
140	클로메프로프 (Clomeprop)	Positive	11.72	324.2	323.0	324	120	27
							148	21
141	클로티아니딘 (Clothianidin)	Positive	7.34	249.7	249.0	250	93	47
							131	25
142	클로펜테진 (Clofentezine)	Positive	10.94	303	302.0	303	138	21
							102	55
143	터부틸라진 (Terbuthylazine)	Positive	8.33	229.7	229.1	230	174	21
							104	43
144	터부포스 (Terbufos)	Positive	11.93	288.4	288.0	289	103	13
							233	9
	터부포스 옥손 (Terbufos oxon)	Positive	8.98	272.4	272.0	273	103	13
							115	39
	터부포스 옥손 설폰 (Terbufos oxon sulfone)	Positive	6.21	304.4	304.0	305	231	19
							95	45
	터부포스 옥손 설폭사이드 (Terbufos oxon sulfoxide)	Positive	6.02	288.4	288.0	289	171	15
							115	41
	터부포스 설폰 (Terbufos sulfone)	Positive	8.01	320.4	320.0	321	97	55
							115	39
	터부포스 설폭사이드 (Terbufos sulfoxide)	Positive	7.97	304.4	304.0	305	187	15
							131	39
145	테닐클로르 (Thenylchlor)	Positive	9.11	323.8	323.0	324	127	17
							97	57
146	테부티우론 (Tebuthiuron)	Positive	6.64	228.3	228.1	229	172	25
							116	35
147	테부페노자이드 (Tebufenozide)	Positive	9.47	352.5	352.2	353	133	25
							297	11
148	테부플로퀸 (Tebufloquin)	Positive	9.92	289.3	289.1	290	248	23
							232	57
	테부플로퀸 M1 (Tebufloquin M1)	Positive	7.97	247.3	247.1	248	232	47
							192	35
149	테트라닐리프롤 (Tetraniliprole)	Negative	7.39	554.9	544.1	543	137	24
							109	78
150	테프랄록시딤 (Tepraloxydim)	Positive	6.77	341.8	341.1	342	250	19
							166	29
151	테플루벤주론 (Teflubenzuron)	Negative	11.89	381.1	379.9	379	339	16
							359	10
152	톨펜피라드 (Tolfenpyrad)	Positive	11.93	383.9	383.1	384	197	37
							154	59
153	2,3,5-트리메타카브 (2,3,5-Trimethacarb)	Positive	7.46	193.2	193.1	194	137	17
							122	35
	3,4,5-트리메타카브 (3,4,5-Trimethacarb)	Positive	7.46	193.2	193.1		137	17
							122	35
154	트리뷰포스 (Tribufos)	Positive	13.50	314.5	314.0	315	169	21
							57	37
155	트리사이클라졸 (Tricyclazole)	Positive	5.90	189.2	189.0	190	136	37
							109	47
156	트리아자메이트 (Triazamate)	Positive	9.00	314.4	314.1	315	72	35
							226	17
157	트리아파몬 (Triafamone)	Positive	6.60	406.3	406.0	407	245	33
							160	61
158	트리클로르폰***** (Trichlorfon)	Positive	5.58	257.4	255.9	257	109	27
							221	17
159	트리티코나졸 (Triticonazole)	Positive	9.01	317.8	317.1	318	70	53
							125	45
160	트리포린* (Triforine)	Positive	7.45	435	431.9	435	390	37
							215	45
161	트리플루뮤론 (Triflumuron)	Positive	10.35	358.7	358.0	359	156	23
							139	45
162	티디아주론 (Thidiazuron)	Positive	6.45	220.3	220.0	221	102	19
							128	25
163	티아디닐 (Tiadinil)	Negative	8.75	267.7	267.0	266	71	38
							238	16
164	티아메톡삼 (Thiamethoxam)	Positive	4.98	291.7	291.0	292	211	17
							132	29
165	티아벤다졸 (Thiabendazole)	Positive	5.36	201.2	201.0	202	175	35
							131	43
166	티아조피르 (Thiazopyr)	Positive	9.93	396.4	396.0	397	377	27
							335	31
167	티아클로프리드 (Thiacloprid)	Positive	5.71	254.7	252.0	253	126	29
							90	51
168	티오디카브****** (Thiodicarb)	Positive	6.76	354.5	354.0	355	88	27
							108	21
169	티오벤카브 (Thiobencarb)	Positive	10.72	257.8	257.0	258	125	25
							89	65
170	티오파네이트메틸 (Thiophanate-methyl)	Positive	6.45	342.4	342.0	343	151	20
							311	10
171	파목사돈 (Famoxadone)	Positive	10.13	374.4	374.1	392	238	23
							239	27
172	페나미포스 (Fenamiphos)	Positive	9.41	303.4	303.1	304	217	31
							202	47
	페나미포스설폰 (Fenamiphos sulfone)	Positive	6.53	335.4	335.0	336	266	27
							308	21
	페나미포스설폭사이드 (Fenamiphos sulfoxide)	Positive	6.43	319.4	319.1	320	233	35
							171	33
173	페나자퀸 (Fenazaquin)	Positive	13.52	306.4	306.1	307	161	19
							147	59
174	페노트린-시스 (Phenothrin-cis)	Positive	14.39	350.5	350.1	351	183	31
							128	87
	페노트린-트랜스 (Phenothrin-trans)	Positive	14.55	350.5	350.1		183	31
							128	87
175	페녹사프로프-에틸 (Fenoxaprop-ethyl)	Positive	11.50	361.8	361.0	362	288	25
							119	35
176	페녹슐람 (Penoxsulam)	Positive	6.71	483.4	483.0	484	195	39
							164	49
177	페녹시카브 (Fenoxycarb)	Positive	9.56	301.3	301.1	302	116	15
							256	17
178	페림존(E) (Ferimzone E)	Positive	7.55	254.3	254.1	255	132	27
							124	29
	페림존(Z) (Ferimzone Z)	Positive	8.02	254.3	254.1	255	132	27
							124	29
179	페뷰레이트 (Pebulate)	Positive	10.83	203.3	203.1	204	128	17
							72	19
180	펜메디팜 (Phenmedipham)	Positive	7.59	300.3	300.1	301	136	27
							168	13
181	펜사이큐론 (Pencycuron)	Positive	10.61	328.8	328.1	329	125	35
							218	23
182	펜설포티온 (Fensulfothion)	Positive	7.28	308.4	308.0	309	157	33
							235	31
183	펜트라자마이드 (Fentrazamide)	Positive	9.92	349.8	349.1	350	154	15
							72	35
184	펜피록시메이트 (Fenpyroximate)	Positive	13.02	421.5	421.2	422	366	23
							138	41
185	펜헥사미드 (Fenhexamid)	Positive	8.92	302.2	301.0	302	97	31
							143	43
186	포레이트 (Phorate)	Positive	10.71	260.4	260.0	261	75	23
							199	13
	포레이트옥손 (Phorate oxon)	Positive	7.65	244.3	244.0	245	75	17
							47	41
	포레이트옥손설폰 (Phorate oxon sulfone)	Positive	5.70	276.3	276.0	277	111	39
							127	21
	포레이트설폰 (Phorate sulfone)	Positive	7.19	292.3	292.0	293	171	17
							115	33
	포레이트옥손설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide)	Positive	5.54	260.3	260.0	261	111	29
							97	31
	포레이트설폭사이드 (Phorate sulfoxide)	Positive	7.06	276.4	276.0	277	199	13
							143	29
187	포메사펜 (Fomesafen)	Negative	8.05	438.8	437.9	437	195	50
							222	48
188	포스티아제이트 (Fosthiazate)	Positive	6.99	283.3	283.0	284	104	29
							228	15
189	포스폴란 (Phosfolan)	Positive	5.98	255.3	255.0	256	228	5
							61	5
190	포클로르페뉴론 (Forchlorfenuron)	Positive	7.34	247.7	247.0	248	129	25
							93	47
191	폭심 (Phoxim)	Positive	10.54	298.3	298.0	299	129	17
							77	47
192	퓨라티오카브* (Furathiocarb)	Positive	11.66	382.5	382.1	383	195	23
							252	17
193	프로메카브 (Promecarb)	Positive	8.40	207.3	207.1	208	151	13
							109	23
194	프로베나졸 (Probenazole)	Positive	5.61	223.2	223.0	224	51	113
							63	111
195	프로설포카브 (Prosulfocarb)	Positive	11.43	251.4	251.1	252	91	37
							128	17
196	프로퀴나지드 (Proquinazid)	Positive	13.35	372.2	372.0	373	331	21
							289	33
197	프로파모카브 (Propamocarb)	Positive	4.10	188.3	188.1	189	102	23
							74	33
198	프로파자이트* (Propargite)	Positive	12.69	350.5	350.1	368	231	21
							175	47
199	프로파퀴자포프* (Propaquizafop)	Positive	11.83	443.9	443.1	444	371	23
							299	31
200	프로폭서 (Propoxur)	Positive	6.52	209.2	209.1	210	168	11
							153	11
201	플로니카미드 (Flonicamid)	Positive	4.96	229.2	229.0	230	203	27
							98	53
202	플루디옥소닐 (Fludioxonil)	Positive	8.20	248.2	248.0	266	229	21
							158	47
203	플루리돈 (Fluridone)	Positive	7.76	329.3	329.1	330	310	41
							115	89
204	플루벤디아마이드 (Flubendiamide)	Positive	9.61	682.4	682.0	683	408	15
							274	47
205	플루설파마이드 (Flusulfamide)	Negative	10.27	415.2	413.9	413	171	46
							179	50
206	플루아지남 (Fluazinam)	Negative	11.96	465.1	463.9	463	416	28
							398	24
207	플루오메투론 (Fluometuron)	Positive	6.96	232.2	232.0	233	160	35
							140	47
208	플루오피콜라이드 (Fluopicolide)	Positive	8.53	383.6	381.9	383	173	31
							109	89
209	플루톨라닐 (Flutolanil)	Positive	8.40	323.3	323.1	324	262	23
							242	23
210	플루트리아폴 (Flutriafol)	Positive	7.17	301.3	301.1	302	70	45
							123	39
211	플루티아셋-메틸 (Fluthiacet-methyl)	Positive	9.81	403.9	403.0	404	274	39
							215	53
212	플루페나셋 (Flufenacet)	Positive	9.11	363.3	363.0	364	152	27
							124	47
213	플루페녹수론 (Flufenoxuron)	Negative	12.58	488.8	488.0	487	467	12
							304	26
214	플루폭삼 (Flupoxam)	Positive	9.48	460.8	460.0	461	444	37
							123	69
215	플루피라디퓨론 (Flupyradifurone)	Positive	13.35	288.7	288.0	289	272	31
							216	47
216	플룩사메타마이드 (Fluxametamide)	Positive	12.17	474.3	473.0	474	400	29
							160	51
217	피디플루메토펜 (Pydiflumetofen)	Positive	10.63	426.7	425.0	426	193	51
							166	37
218	피라족시펜 (Pyrazoxyfen)	Positive	10.02	403.3	402.0	403	91	61
							105	29
219	피라졸레이트 (Pyrazolate)	Positive	10.60	439.3	438.0	439	173	25
							145	77
220	피라지플루미드 (Pyraziflumid)	Positive	8.93	379.3	379.0	380	147	41
							175	27
221	피라클로닐 (Pyraclonil)	Positive	6.94	314.8	314.1	315	169	37
							276	23
222	피라클로스트로빈 (Pyraclostrobin)	Positive	10.36	387.8	387.0	388	163	33
							194	17
223	피로퀼론 (Pyroquilon)	Positive	6.43	173.2	173.0	174	132	31
							117	43
224	피리다벤 (Pyridaben)	Positive	13.33	364.9	364.1	365	147	31
							309	31
225	피리다펜티온 (Pyridaphenthion)	Positive	8.67	340.3	340.0	341	189	33
							205	31
226	피리데이트* (Pyridate)	Positive	14.08	378.9	378.1	379	207	25
							351	15
227	피리미디펜 (Pyrimidifen)	Positive	11.82	377.9	377.1	378	184	31
							150	45
228	피리미설판 (Pyrimisulfan)	Positive	7.52	419.4	419.0	420	370	23
							388	21
229	피리벤족심 (Pyribenzoxim)	Positive	11.84	609.6	609.1	610	413	17
							180	47
230	피리벤카브 (Pyribencarb)	Positive	7.98	361.8	361.1	362	239	25
							207	37
	KIE-9749 (KIE-9749)	Positive	7.45	361.8	361.1		239	27
							207	41
231	피리뷰티카브 (Pyributicarb)	Positive	12.33	330.4	330.1	331	108	39
							133	35
232	피리오페논 (Pyriofenone)	Positive	10.86	365.8	365.1	366	184	31
							209	33
233	피리프록시펜* (Pyriproxyfen)	Positive	12.44	321.4	321.1	322	96	21
							185	31
234	피리플루퀴나존 (Pyrifluquinazon)	Positive	8.68	464.3	464.1	465	423	27
							107	45
235	피메트로진* (Pymetrozine)	Positive	4.25	217.2	217.0	218	105	27
							79	55
236	피카뷰트라족스 (Picarbutrazox)	Positive	9.40	409.4	409.1	410	310	19
							107	35
	TZ-1E (TZ-1E)	Positive	9.22	409.4	409.1		310	19
							107	35
237	피콜리나펜 (Picolinafen)	Positive	11.87	376.3	376.0	377	238	43
							256	31
238	피페로포스 (Piperophos)	Positive	10.93	353.5	353.1	354	171	29
							255	19
239	피플루뷰마이드 (Pyflubumide)	Positive	12.11	535.5	535.2	536	155	27
							111	75
	피플루뷰마이드-NH (Pyflubumide-NH)	Positive	11.35	465.4	465.1	466	137	39
							111	37
240	헥사지논 (Hexazinone)	Positive	6.57	252.3	252.1	253	171	23
							71	43
241	헥사코나졸 (Hexaconazole)	Positive	10.20	314.2	313.0	314	70	39
							159	43
242	헥사플루뮤론 (Hexaflumuron)	Negative	11.07	461.1	459.9	459	439	18
							276	26

3) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 물질을 확인한다.

아. 정량시험

1) 위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

2) ‘바. 시험조작’의 분석대상 농약 중 * 표시된 농약의 정량시험은 다음을 따른다.

가) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 개별 시험법(7.1.2.3 다성분 시험법-제3법 제외)으로 정량한다.

나) ‘**’ 표시된 농약이 두류에서 검출될 경우 ‘7.1.2.2 마. 시험용액의 조제 1) 추출’ 에서아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 ★이하의 과정을 따라 시험하여 정량한다.

다) ‘***’ 표시된 농약이 두류에서 검출될 경우 7.1.2.4(펜프로파트린, 퍼메트린), 7.1.2.17(할펜프록스), 7.1.2.18(노나클로르), 7.1.3.51(피리달릴) 시험법으로 정량한다.

라) ‘****’ 표시된 사이할로포프뷰틸(Cyhalofop-butyl)이 서류에서 검출될 경우 7.1.2.21시험법으로 정량한다.

마) ‘*****’ 표시된 트리클로르폰(Trichlorfon)이 식품에서 검출될 경우 디클로르보스(Dichlorvos)의 잔류량으로 환산하여 정량한다.

디클로르보스의 잔류량 = 환산계수* × 트리클로르폰의 잔류량

* 환산계수 = 0.85(디클로르보스 분자량 221/트리클로르폰의 분자량 257)

바) ‘******’ 표시된 티오디카브(Thiodicarb)가 식품에서 검출될 경우 메토밀(Methomyl)의 잔류량으로 환산하여 정량한다.

메토밀의 총 잔류량 = 메토밀 잔류량 + (환산계수* × 티오디카브의 잔류량)

* 환산계수 = 0.91 [(메토밀의 분자량 162 × 2 ) / 티오디카브의 분자량 355]

7.1.2.3 다성분 시험법-제3법

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴 또는 아세톤으로 추출한 다음, 기체크로마토그래프 분석농약은 플로리실 및 카본 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석하고 액체크로마토그래프 분석농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프: 전자포획검출기(GC-ECD), 질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD), 질량분석기(GC-MS 또는 GC-MS/MS)

2) 액체크로마토그래프: Post-column derivatization system, 형광검출기(HPLC-FLD), 자외선흡광검출기(HPLC-UVD), 질량분석기(LC-MS 또는 LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 일회용 카트리지: 플로리실(Florisil, 1 g), 카본(Carbon, 500 mg) 및 아미노프로필(Amino-propyl, 1 g) 등의 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각 농약의 표준품을 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 아세토니트릴 추출법
시료(곡류 및 두류는 50 g, 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 50 g, 차는 10 g)를 정밀히 달아 추출용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 500 mL를 분액깔때기에 옮기고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 아세토니트릴을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 아세토니트릴층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL로 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.

나) 아세톤 추출법
시료(곡류 및 두류는 50 g, 채소류, 과일류, 서류 및 견과종실류는 50 g, 차는 10 g)를 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 30 mL를 넣어 2시간 방치, 차의 경우 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액을 1 L 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨 용액 50 mL, 물 100 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣고 마개를 막은 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 다시 디클로로메탄 50 mL로 상기의 과정을 되풀이 하여 여액을 합하고 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 후 별도의 디클로로메탄을 넣어 최종 부피가 100 mL가 되게 한다. 디클로로메탄층 20 mL를 각각 취하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버린다. ★ 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL로 녹인다.
※ 추출은 상기 가) 또는 나) 중 선택하여 사용함.
주1) 용매추출액을 저온에서 정치하면 층 분리가 빨라질 수 있음.
주2) 곡류, 두류, 견과종실류 등 지방성 시료의 경우 ★까지 시험하고 잔류물에 미리
아세토니트릴(또는 메탄올)로 포화시킨 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴(또는 메탄올) 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴(또는 메탄올)층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔류물을 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL(기체크로마토그래프 측정 농약) 및 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL(액체크로마토그래프 측정 농약)에 완전히 녹인다.

2) 정제

가) 기체크로마토그래프 측정 농약
미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출시켜 버린다. 이어서 20% 아세톤 함유 헥산 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모은다. 이를 미리 헥산 5 mL와 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL로 활성화시킨 카본 카트리지에 용출액을 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 추가로 20% 아세톤 함유 헥산 15 mL로 용출시켜 동일 시험관에 모은다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유량으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시 사용한다.)
주3) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.
주4) 기체크로마토그래프 측정 농약을 전처리할 때 항상 감압농축하기 전에 2% 디에틸글리콜(Diethyl glycol) 함유 아세톤 0.2 mL를 첨가한다.

나) 액체크로마토그래프 측정 농약
미리 아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL에 녹인 액을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL를 용출하여 동일 시험관에 합친다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유량으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 아세토니트릴에 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.(단, 카본 카트리지는 색소 등 방해물질 제거에 필요시에 사용한다.).

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) GC-ECD, GC-NPD

(1) 컬럼: DB-5 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1.0 mL/분

(3) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(4) 주입 방법: Split mode(20:1)

(5) 검출기 온도: 280℃

나) GC-FPD

(1) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1.0 mL/분

(3) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 7℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 20분 이상 유지한다.

(4) 주입 방법: Splitless mode

(5) 검출기 온도: 280℃

2) 기체크로마토그래프 분석 대상(206 성분)

1	Acrinathrin(ECD)	2	Aldrin(ECD)	3	Ametryn(NPD)
4	Anilofos(NPD,ECD)	5	Atrazine(NPD)	6	Azaconazole(NPD)
7	Azinphos-ethyl(FPD)	8	Azinphos-methyl(ECD,NPD)*	9	α-BHC(ECD)
10	β-BHC(ECD)	11	γ-BHC(ECD)	12	δ-BHC(ECD)
13	Bifenthrin(ECD)	14	Binapacryl(ECD)	15	Bromacil(ECD)
16	Bromobutide(NPD)	17	Bromophos-methyl(FPD)	18	Bromopropylate(ECD)
19	Bromoxynil(ECD)	20	Bupirimate(NPD)	21	Butafenacil(ECD)
22	Cadusafos(NPD,FPD)	23	Captafol(ECD)*	24	Captan(ECD)*
25	Carbophenothion(ECD,NPD)	26	Chinomethionat(ECD,NPD)	27	Chlordane(ECD)
28	Chlorfenapyr(NPD,FPD)	29	Chloridazon(ECD)	30	Chlorobenzilate(ECD)
31	Chlorothalonil(ECD)	32	Chlorpyrifos(ECD,NPD)	33	Chlorpyrifos-methyl(ECD,NPD)
34	Chlorthal-dimethyl(ECD)	35	Clomeprop(ECD)	36	Cyanazine(ECD)
37	Cyanophos(NPD)	38	Cyflufenamid(ECD)*	39	Cyfluthrin(ECD)*
40	Cyhalothrin(ECD)*	41	Cypermethrin(ECD)*	42	Cyproconazole(NPD)
43	Cyprodinil(NPD)*	44	p,p-DDD(ECD)	45	p,p-DDE(ECD)
46	o,p-DDT(ECD)	47	p,p-DDT(ECD)	48	Deltamethrin(ECD)*
49	Diazinon(ECD,NPD)	50	Dichlofluanid(ECD,NPD)***	51	Dichlorvos(NPD,FPD)*
52	Dicloran(ECD)	53	Dicofol(ECD)	54	Dieldrin(ECD)*
55	Diethofencarb(NPD)	56	Diflufenican(ECD)	57	Dimepiperate(ECD,NPD,FPD)
58	Dimethachlor(ECD)	59	Dimethenamid(NPD,ECD)	60	Dimethoate(ECD,NPD)
61	Dimethylvinphos(NPD,FPD,ECD)	62	Diniconazole(ECD)	63	Diphenamid(NPD)
64	Diphenylamine(NPD)	65	Dithiopyr(ECD)	66	Edifenphos(ECD,NPD)
67	α-Endosulfan(ECD)	68	β-Endosulfan(ECD)	69	Endosulfan-sulfate(ECD)
70	Endrin(ECD)	71	EPN(ECD, NPD)	72	Esprocarb(ECD,NPD)
73	Ethion(ECD,NPD)	74	Ethoprophos(ECD,NPD)	75	Etoxazole(NPD)
76	Etrimfos(ECD,NPD)	77	Fenamidone(ECD,NPD)	78	Fenarimol(ECD,NPD)*
79	Fenazaquin(NPD,FPD)*	80	Fenbuconazole(ECD,NPD)*	81	Fenitrothion(ECD,NPD)
82	Fenobucarb(NPD)	83	Fenothiocarb(NPD)*	84	Fenoxanil(ECD,NPD)
85	Fenoxycarb(NPD)	86	Fenpropathrin(ECD,NPD)**	87	Fenthion(ECD,NPD)*
88	Fenvalerate(ECD)*	89	Fipronil(NPD,FPD,ECD)	90	Flonicamid(ECD)*
91	Fluacrypyrim(ECD)	92	Fludioxonil(NPD)	93	Flufenacet(ECD)
94	Flufenoxuron(NPD)	95	Flumiclorac-pentyl(ECD)	96	Fluquinconazole(ECD)
97	Flusilazole(NPD)	98	Fluthiacet-methyl(ECD)	99	Flutolanil(ECD,NPD)
100	Fluvalinate(ECD)*	101	Folpet(ECD)*	102	Fonofos(NPD)
103	Fosthiazate(NPD,FPD)	104	Fthalide(ECD)	105	Furathiocarb(NPD)
106	Heptachlor(ECD)	107	Heptachlor epoxide(ECD)	108	Hexachlorobenzene(ECD)
109	Hexaflumuron(ECD)	110	Imazalil(ECD)*	111	Imibenconazole(NPD)
112	Indanofan(ECD)	113	Indoxacarb(ECD)	114	Iprobenfos(NPD,FPD)
115	Iprodione(ECD)	116	Iprovalicarb(ECD)	117	Isofenphos(NPD)
118	Isofenphos-methyl(NPD)*	119	Isoprothiolane(ECD)	120	Isoxathion(NPD)
121	Kresoxim-methyl(NPD)	122	Lactofen(ECD)	123	Lufenuron(ECD)
124	Malathion(ECD,NPD)	125	Mecarbam(ECD,NPD)	126	Mefenacet(ECD)
127	Mefenpyr-diethyl(ECD)	128	Mepronil(NPD)	129	Metconazole(NPD)
130	Methabenzthiazuron(NPD)	131	Methidathion(ECD,NPD)	132	Methoxychlor(ECD)
133	Metrafenone(ECD)	134	Molinate(NPD)	135	Myclobutanil(ECD,NPD)*
136	Nitrapyrin(ECD)	137	Nitrothal-isopropyl(ECD)	138	Nonachlor(ECD)
139	Novaluron(ECD)	140	Nuarimol(ECD)*	141	Ofurace(ECD)
142	Oxadixyl(ECD,NPD)	143	Oxydemeton-methyl(FPD)	144	Paclobutrazol(ECD,NPD)*
145	Parathion(ECD,NPD)	146	Parathion-methyl(ECD,NPD)	147	Penconazole(ECD,NPD)
148	Pencycuron(NPD)	149	Pendimethalin(ECD,NPD)	150	Permethrin(ECD)**
151	Phenthoate(ECD,NPD)	152	Phosalone(ECD,NPD)	153	Phosmet(ECD,NPD)
154	Phosphamidone(ECD,NPD)	155	Picolinafen(ECD)	156	Picoxystrobin(ECD)
157	Piperophos(NPD,FPD)	158	Pirimicarb(NPD)	159	Pirimiphos-ethyl(NPD)
160	Pirimiphos-methyl(NPD)	161	Probenazole(ECD)	162	Prochloraz(ECD)
163	Procymidone(ECD,NPD)	164	Profenofos(ECD,NPD)	165	Propazine(NPD)
166	Propisochlor(ECD,NPD)	167	Propoxur(NPD)	168	Propyzamide(ECD)
169	Prothiofos(NPD)	170	Pyraclofos(NPD)	171	Pyrazophos(ECD,NPD)
172	Pyridaben(NPD,ECD)*	173	Pyridalyl(ECD,NPD,FPD)	174	Pyrimethanil(NPD)
175	Pyrimidifen(ECD)	176	Pyriminobac-methyl(NPD)	177	Quinalphos(NPD)
178	Quintozene(ECD)	179	Simeconazole(NPD)	180	Sulprofos(FPD)
181	TCMTB(ECD)	182	Tebuconazole(NPD)*	183	Tebufenpyrad(NPD)*
184	Tebupirimfos(ECD,NPD, FPD)	185	Teflubenzuron(ECD)	186	Tefluthrin(ECD)
187	Terbufos(NPD)*	188	Terbutylazine(ECD,NPD)	189	Tetrachlorvinphos(FPD)
190	Tetradifon(ECD)	191	Thiazopyr(ECD,NPD)	192	Thifluzamide(ECD,NPD)
193	Thiometon(ECD,NPD)	194	Tolclofos-methyl(ECD,NPD)	195	Tolfenpyrad(NPD)
196	Tolylfluanid(ECD,NPD)	197	Tralomethrin(ECD,NPD)	198	Triadimefon(ECD,NPD)
199	Triazophos(NPD)	200	Tribufos(FPD)	201	Triflumizole(ECD,NPD)
202	Triflumuron(ECD)	203	Uniconazole(ECD)	204	Vernolate(ECD)
205	Vinclozoline(ECD,NPD)	206	Zoxamide(ECD,NPD)

3) 액체크로마토그래프 분석조건

가) HPLC-FLD(Post-derivatization 포함)

(1) 컬럼: C18계 컬럼(3.9 mm × 150 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출파장: Excitation 340 nm, Emission 455 nm

(3) 이동상: 물과 메탄올

물:메탄올(7:3, v/v)의 혼합용액에서 물:메탄올(3:7, v/v)의 혼합용액으로 23분간 농도균배한 후 5분 이상 흘려보낸다.

(4) 이동상 유량: 0.8 mL/분

(5) Post Reaction Pump 유량: 0.5 mL/분(NaOH 0.25 mL/분, OPA 0.25 mL/분) 또는 기타 최적조건

나) HPLC-UVD

(1) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 등등한 것

(2) 검출파장: 254 nm

(3) 이동상: 물과 아세토니트릴

- 물:아세토니트릴(80:20, v/v)에서 (20:80, v/v)의 혼합용액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.

- 물:메탄올(65:35, v/v)에서 (10:90, v/v)의 혼합용액으로 40분간 농도균배한 후 10분 이상 흘려보낸다.
※ 이동상의 조건은 상기 두 가지 중 선택하여 사용함

(4) 이동상 유량: 1.0 mL/분

4)

1	Acetamiprid(UVD)*	2	Aldicarb(FLD)	3	Amisulbrom(UVD)
4	Azoxystrobin(UVD)	5	Bendiocarb(FLD)	6	Benzoximate(UVD)*
7	Boscalid(UVD)	8	Bromoxynil(UVD)	9	Butocarboxim(FLD)
10	Carbaryl(FLD)	11	Carbofuran(FLD)	12	Chlorantraniliprole(UVD)
13	Chlorimuron-ethyl(UVD)	14	Chlorobenzuron(UVD)	15	Chlorotoluron(UVD)
16	Chromafenozide(UVD)	17	Cinosulfuron(UVD)	18	Clothianidin(UVD)*
19	Cyazofamid(UVD)	20	Cymoxanil(UVD)	21	Dimethomorph(UVD)
22	Ethaboxam(UVD)	23	Ethametsulfuron-methyl(UVD)	24	Ethiofencarb(FLD)
25	Fenhexamid(UVD)	26	Fenpyroximate(UVD)*	27	Ferimzone(UVD)
28	Fluacrypyrim(UVD)	29	Flubendiamide(UVD)	30	Flufenacet(UVD)
31	Flufenoxuron(UVD)	32	Fluquinconazole(UVD)	33	Flusulfamide(UVD)
34	Forchlorfenuron(UVD)	35	Hexaflumuron(UVD)	36	Imazamox(UVD)
37	Imazapic(UVD)	38	Imazaquin(UVD)	39	Imazethapyr(UVD)
40	Imibenconazole(UVD)	41	Iprovalicarb(UVD)	42	Isoprocarb(FLD)
43	Isoproturon(UVD)	44	Lufenuron(UVD)	45	Mepanipyrim(NPD, UVD)
46	Metamifop(UVD)	47	Methabenzthiazuron(UVD)	48	Methiocarb(FLD)
49	Methomyl(FLD)*	50	Methoxyfenozide(UVD)	51	Metolcarb(FLD)
52	Nitenpyram(UVD)	53	Novaluron(UVD)	54	Oxamyl(FLD)*
55	Oxaziclomefon(UVD)	56	Phenmedipham(UVD)	57	Pirimicarb(FLD)
58	Promecarb(FLD)	59	Propoxur(FLD)	60	Pyraclostrobin(UVD)
61	Pyrazolate(UVD)	62	Pyribenzoxim(UVD)	63	Pyributicarb(UVD)
64	Pyridate(UVD)	65	Pyrimethanil(UVD)	66	Pyriproxyfen(UVD)
67	Pyroquilon(UVD)	68	Quinoclamine(UVD)	69	Rimsulfuron(UVD)
70	Spirodiclofen(UVD)	71	Tebufenozide(UVD)	72	Teflubenzuron(UVD)
73	Thenychlor(UVD)	74	Thiacloprid(UVD)*	75	Thiamethoxam(UVD)*
76	Thiodicarb(FLD)	77	Tiadinil(UVD)	78	Tribenuron-methyl(UVD)
79	Tricyclazole(NPD, UVD)	80	Trifloxystrobin(ECD, UVD)	81	2,3,5-Trimethacarb(FLD)
82	3,4,5-Trimethacarb(FLD)

액체크로마토그래프 분석 대상(82 성분)

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험

1) 위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

2) ‘바. 시험조작’의 분석대상 농약 중 * 표시된 농약의 정량시험은 다음을 따른다.

가) ‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 식품공전 내 다성분 또는 단성분 시험법으로 정량한다.

나) ‘**’ 표시된 농약(Fenpropathrin, Permethrin)이 검출될 경우 7.1.2.4 시험법으로 정량한다.

다) ‘***’ 표시된 농약 Dichlofluanid가 검출된 경우 7.1.3.1 시험법으로 정량한다.

자. 확인시험
GC-MS(MS/MS 포함) 및 LC-MS(MS/MS 포함)상의 표준용액과 시험용액의 머무름시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인한다.

7.1.2.4 바이오레스메트린(Bioresmethrin), 사이퍼메트린(Cypermethrin), 사이플루트린(Cyfluthrin), 사이할로트린(Cyhalothrin), 퍼메트린(Permethrin), 펜발러레이트(Fenvalerate), 펜프로파트린(Fenpropathrin), 플루발리네이트(Fluvalinate)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프 및 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)
단, 바이오레스메트린은 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)만을 사용한다.

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(Florisil catridge): 플로리실(1,000 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 바이오레스메트린, 사이할로트린, 사이플루트린, 사이퍼메트린, 펜발러레이트, 펜프로파트린, 플루발리네이트 및 퍼메트린 표준품을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 1시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2～3분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 30 mL로 씻어 내려 상기 여과액과 합친 후 1 L 분액깔때기로 옮기고 헥산 100 mL, 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 물 450 mL를 가한 후 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 정치하여 층을 분리시킨 후 수용액 층을 버리고 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한다. 이 액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고시킨 후 잔류물을 헥산 10 mL에 녹인 후 4 mL를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 넣어 합친다. 곡류, 두류 및 고추 등 지방성 시료의 경우 상기 건고물을 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 녹이고 250 mL 분액깔때기로 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고시키고 헥산 10 mL에 녹인 후 4 mL 를 취하여 마개가 있는 시험관(15 mL)에 옮긴 후 헥산 6 mL를 넣어 합친다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 ‘1) 추출’에서 얻은 용액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 유출시켜 버린다. 여기에 디클로로메탄:헥산(5:95, v/v) 혼합용액 10 mL로 씻어서 버리고 디클로로메탄:헥산(40:60, v/v) 혼합용액 10 mL로 용출하여 시험관에 받는다. 용출액은 40℃ 이하에서 낮은 유량으로 질소가스를 사용하여 용매를 날려 보낸 후 즉시 이소옥탄(isooctane) 4 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5, DB-17 및 SPB-1701(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 15 mL/분

다) 오븐 온도: 210℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다(DB-5). 230℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다(DB-17). 225℃에서 시험용액을 주입하고 40분간 유지한다(SPB-1701).

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 주입부 온도: 260℃

바) 검출기 온도: 280℃

사) 주입량: 2 μL(직접주입법)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

1: 바이오레스메트린(18.2분), 2: 사이할로트린(9.4분, 10.1분), 3: 사이플루트린(16.9분, 17.8분, 18.2분, 18.6분), 4: 사이퍼메트린(19.1분, 20.1분, 20.5분, 21.0분), 5: 펜발러레이트(25.7분, 29.5분), 6: 펜프로파트린(6.8분), 7: 퍼메트린(13.0분, 13.7분), 8: 플루발리네이트(30.1분, 32.4분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
바이오레스메트린(0.05 mg/kg), 사이할로트린(0.003 mg/kg), 사이플루트린(0.01 mg/kg), 사이퍼메트린(0.01 mg/kg), 펜발러레이트(0.001 mg/kg), 펜프로파트린(0.003 mg/kg), 퍼메트린(0.01 mg/kg), 플루발리네이트(0.01 mg/kg)

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험

기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 분석물질을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 2 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 25℃/분의 비율로 220℃로 상승시키고 5분간 유지하고, 2℃/분의 비율로 280℃까지 상승시킨 후 5분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode(purge time 0.9분)

마) 주입부 온도: 260℃

바) 인터페이스 온도: 300℃

사) 분자량 범위: 100～520 m/z

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
바이오레스메트린 (Bioresmethrin)	18.2	338.4	338.2	1711), 143, 128, 123, 166
사이퍼메트린 (Cypermethrin)	29.6, 29.8, 30.0, 30.8	416.3	415.1	163, 181, 127, 209
사이플루트린 (Cyfluthrin)	27.8, 28.3, 28.5, 28.7	434.3	433.1	163, 206, 226, 127
사이할로트린 (Cyhalothrin)	22.1, 22.7	449.9	449.1	181, 197, 209, 141, 449
퍼메트린 (Permethrin)	25.5, 26.1	391.3	390.1	183, 163, 127, 115
펜발러레이트 (Fenvalerate)	32.8, 33.8	419.9	419.1	125, 167, 152, 181, 225, 419
펜프로파트린 (Fenpropathrin)	20.0	349.4	349.2	181, 265, 125, 141, 208
플루발리네이트 (Fluvalinate)	33.6, 34.0	502.9	502.1	250, 181, 208, 152, 502, 234
1) 정량이온

7.1.2.5 밀베멕틴(Milbemectin), 스피로테트라맷(Spirotetramat), 아바멕틴(Abamectin), 인다지플람(Indaziflam)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE (dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아바멕틴(아버멕틴 B1a), 인다지플람, 밀베멕틴(밀베마이신 A3, 밀베마이신 A4), 스피로테트라맷, 스피로테트라맷-엔올 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 2분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣고 3분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg, C18 25 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 다음 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	85	15
1.0	85	15
4.0	10	90
6.0	10	90
8.0	0	100
9.0	0	100
11.0	85	15
14.0	85	15

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
밀베마이신 A3 (Milbemycin A3)	6.6	528.7	528.3	511	1131)	11
					493	17
					475	13
밀베마이신 A4 (Milbemycin A4)	6.8	542.7	542.3	525	1091)	35
					127	17
					161	33
스피로테트라맷 (Spirotetramat)	5.4	373.4	373.1	374	3301)	21
					302	21
					216	41
스피로테트라맷-엔올 (Spirotetramat-enol)	4.9	301.4	301.1	302	2701)	37
					216	27
					173	33
아버멕틴 B1a (Avermectin B1a)	6.5	873.1	872.4	890	3051)	39
					568	23
					307	29
인다지플람 (Indaziflam)	5.6	301.4	301.1	302	1581)	23
					145	35
					138	37
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 아버멕틴 B1a(6.5분), B: 인다지플람(5.6분), C: 밀베마이신 A3(6.6분),

D: 밀베마이신 A4(6.8분), E: 스피로테트라맷(5.4분), F: 스피로테트라맷-엔올(4.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아버멕틴 B1a, 인다지플람, 밀베마이신 A3, 밀베마이신 A4, 스피로테트라맷, 스피로테트라맷-엔올을 확인한다.

※ 스피로테트라맷의 잔류량 = 스피로테트라맷의 잔류량 + (환산계수* × 스피로테트라맷-엔올의 잔류량

* 환산계수 = 1.24(스피로테트라맷 분자량 373 /스피로테트라맷-엔올 분자량 301)

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.6 디클로르프로프(Dichlorprop), 벤타존(Bentazone), 사-시피에이(4-CPA), 아시플루오르펜(Acifluorfen), 이사-디(2,4-D), 퀸메락(Quinmerac), 퀸클로락(Quinclorac)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 디클로르프로프, 벤타존, 사-시피에이, 아시플루오르펜, 이사-디 표준품은 각각 아세토니트릴에, 퀸메락, 퀸클로락은 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 시료 5 g에 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 1 N 수산화나트륨 1 mL, 아세토니트릴 10 mL를 넣어 강하게 흔든 후 60℃에서 20분간 정치시킨다. 이 후 2 N 염산 1 mL, 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 충분히 흔들어 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 분리된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
7.0	0	100
10.0	0	100
10.1	80	20
12.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode 및 Negative ion mode)

나) Capillary voltage: 3.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측 질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
디클로르프로프(Dichlorprop)	Negative	4.8	235.0	234.0	233	1611)	12
						125	25
벤타존 (Bentazone)	Negative	4.1	240.3	240.1	239	1321)	25
						197	20
사-시피에이 (4-CPA)	Negative	3.7	188.6	186.0	185	1271)	14
						35	20
아시플루오르펜 (Acifluorfen)	Negative	5.7	361.7	361.0	360	3161)	10
						195	30
이사-디 (2,4-D)	Negative	4.3	221.0	222.0	219	1611)	15
						125	30
퀸메락 (Quinmerac)	Positive	2.6	221.6	221.0	222	2041)	21
						141	30
퀸클로락 (Quinclorac)	Positive	3.3	242.1	241.0	242	2241)	14
						161	35
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

A: 디클로르프로프(4.8분), B: 벤타존(4.1분), C: 사-시피에이(3.7분),

D: 아시플루오르펜(5.7분), E: 이사-디(4.3분),

F: 퀸메락(2.6분), G: 퀸클로락(3.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.7 사이헥사틴(Cyhexatin), 아조사이클로틴(Azocyclotin)

가. 시험법 적용범위
서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤과 브롬산으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
주1) 아조사이클로틴의 경우 추출과정 중 사이헥사틴으로 전환됨

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 사이헥사틴 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 넣어 5분간 흔들어 섞어 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 용기를 아세톤 20 mL를 넣어 세척하고 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액을 1,000 mL 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣고 1분간 강하게 흔든 후 정치하여 층을 분리시킨다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 40℃에서 감압 농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm의 컬럼관에 실리카 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충전시키고 아세토니트릴 25 mL를 유출시켜 버린다. 아세토니트릴로 녹인 시료용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 유출시켜 버린다. 컬럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 아세토니트릴:초산(100:0.2, v/v) 혼합용액 30 mL를 넣어 용출하여 받는다. 용출액을 40℃에서 감압 농축하여 잔류물을 5 mM 염화나트륨 함유 아세토니트릴:1 mM 염산(85:15, v/v) 혼합용액 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.9 mm × 150 mm, 4.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 염화나트륨 5 mM 함유 아세토니트릴과 1 mM 염산(85:15, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 214 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

사이헥사틴(9.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험 결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.1.2.8 클레토딤(Clethodim), 프로폭시딤(Profoxydim)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석 대상 성분을 메탄올:물(1:1, v/v) 혼합용액을 넣어 모화합물 및 산화대사산물을 동시에 추출하고 클로로과산화벤조익산(m-CPB)으로 산화반응시킨다. 전환된 설폰(sulfone)을 액-액 분배하여 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 클레토딤 표준품을 아세토니트릴에 녹여 200 mg/L가 되게 한다. 프로폭시딤 또는 리튬염 표준품을 메탄올에 녹여 200 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 클로로과산화벤조익산(m-chloroperoxybenzoic acid, m-CPB) 용액: 디클로로메탄에 1%가 되도록 녹이며 사용 직전 조제한다.

6) 티오황산나트륨(sodium thiosulfate) 용액: 10% 수용액을 조제한다.

7) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 메탄올:물(1:1, v/v) 혼합용액 100 mL를 가한 후 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 곡류 등 건조 시료의 경우 추출 전에 미리 30분간 방치, 습윤화한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 메탄올:물(1:1, v/v) 혼합용액 50 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 내려 앞의 여과액과 합한다. 합한 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 50 mL, 초산 0.5 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 가한 후 1분 이상 흔들어 섞는다. 정치하여 층을 분리시킨 후 하층인 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 50 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합친 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 디클로로메탄 25 mL에 녹인다.

2) 산화반응
위 용액에 1% m-CPB 용액 5 mL를 가한 후 가볍게 흔들어 섞고 30℃에서 2분간 정치하여 층을 분리시켜 반응시킨다. 반응 후 10% 티오황산나트륨 수용액 30 mL를 가한 후 3분간 흔들어 섞어 반응을 종결시킨다. 반응액을 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 잔류물을 재차 디클로로메탄 10 mL로 씻어 옮긴다. 분액깔때기에 10%의 염화나트륨 용액 80 mL와 0.1 N 황산 2 mL를 넣고 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 하층인 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과, 탈수하여 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 재차 디클로로메탄 30 mL를 가한 후 위의 분배 추출과정을 반복한다. 합한 디클로로메탄 추출액을 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.

3) 정제
안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 충전한 후 디클로로메탄 25 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에, ‘2) 산화반응’으로부터 얻은 디클로로메탄 10 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 컬럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤:디클로로메탄(10:90, v/v) 혼합용액 40 mL를 넣어 유출시켜 버리고 재차 60 mL의 메탄올:아세톤(1:99, v/v) 혼합용액으로 용출하여 받는다. 이를 40℃에서 감압 농축, 건고한 후 2 mL의 아세토니트릴에 녹여 기기분석 전에 0.2% 초산 수용액과 1:1(v/v)로 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.0 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 0.1% 초산의 혼합비를 35:65(v/v)로 1분간 유지 후 75:25(v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 256 nm

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
농도별로 아세토니트릴에 조제한 표준혼합용액 일정량을 반응 플라스크에 취하고 질소가스를 사용하여 증발 건고한 직후 위의 m-CPB 산화반응과정을 동일하게 수행한다. 디클로로메탄 추출액을 감압 농축, 건고한 후 아세토니트릴 2 mL에 녹여 0.2% 초산 수용액과 1:1(v/v)로 혼합하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램 상에서 각 대상성분 설폰의 피크 면적 또는 높이를 기준으로 모화합물로 환산하여, 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

가. 산화반응 공시험액,         나. 표준품 첨가 후 산화반응 시험액

1: 클레토딤 설폰(11.9분), 2: 프로폭시딤 설폰(19.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

아. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클레토딤 및 프로폭시딤을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 0.1% 초산의 혼합비를 35:65(v/v)로 1분간 유지 후 75:25(v/v)로 30분간 직선적으로 농도 구배한다.

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) 분자량 범위: 100～500 m/z

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
클레토딤 설폰 (Clethodim sulfone)	16.1	391.9	391.1	392
프로폭시딤 설폰 (Profoxydim sulfone)	26.5	498.0	465.2	498

7.1.2.9 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 염산용액으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 다이쾃(Diquat dibromide monohydrate) 및 패러쾃(Paraquat dichloride hydrate) 표준품을 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 이동상을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 250 mL의 둥근바닥플라스크에 넣은 후 2 M 염산을 50 mL 첨가한다. 이후 마개를 열은 상태에서 1시간 동안 100℃를 유지하면서 교반한 후 서서히 물 60 mL를 첨가한다. 이 용액을 1,600 rpm에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하고 용액을 250 mL의 비커에 넣은 후 다시 잔류물에 2 M 염산 50 mL를 넣고 추출과정을 반복하여 60 mL의 물로 희석하고 원심분리하여 용액을 합한다. 이 용액을 6 M 또는 1 M 수산화나트륨액과 1 M 염산으로 pH를 9～10으로 맞춘 후 원심분리하여 고체물질을 제거한다.

2) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 실리카 4 g을 0.1 N 수산화나트륨 25 mL를 사용하여 충전하고 위의 원심분리액을 컬럼에 넣어 유출시켜 버린다. 다시 컬럼에 물 100 mL, 메탄올 50 mL 그리고 메탄올로 희석한 0.1 N 염산 40 mL를 차례로 유출시켜 버리고 실리카(silica)를 완전히 건조시킨다. 이어서 메탄올:6.5 M 염산(7:3, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출하여 받고 용출액을 90℃에서 1 mL가 남을 때까지 농축시키고 남은 1 mL는 질소가스를 사용하여 건고한 후 잔류물을 이동상 1 mL에 녹이고 잘 흔들어 섞은 후 0.45 μm의 필터로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.2 M 과염소산나트륨(sodium perchlorate) 함유한 수용액(pH 2)

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	98	2
2.0	98	2
6.0	50	50
10.0	98	2
20.0	98	2

다) 이동상 유량: 0.8 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 다이쾃 313 nm, 패러쾃 257 nm

바) 주입량: 10 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.10 벤설탑(Bensultap), 카탑(Cartap), 티오사이클람(Thiocyclam), 티오설탑(Thiosultap)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 벤설탑, 카탑, 티오사이클람 및 티오설탑을 2% 시스테인 용액, 3% 염화니켈 용액 및 28% 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신(Nereistoxin)으로 전환시켜 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 네레이스톡신(Nereistoxin oxalate) 표준품을 메탄올에 녹여 네레이스톡신으로써 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 2% 시스테인(Cysteine) 용액: L-시스테인(L-cysteine) 2 g을 0.05 N 염산 용액에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액: 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 10 mL 첨가 후 30분간 방치) 2% 시스테인 용액 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 혼합한 후, 3% 염화니켈 용액 0.5 mL와 28% 암모니아수 1 mL을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 70℃에서 10분간 반응시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 후 염화나트륨 2 g과 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 흔들어 섞고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: Amide계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
0.5	10	90
4.0	30	70
5.0	40	60
7.0	40	60
7.1	10	90
10.0	10	90

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 500℃

다) Capillary voltage: 3.0 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
네레이스톡신 (Nereistoxin)	3.2	149.3	149.0	150	1051)	16
					61	21
					86	11
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

네레이스톡신(3.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 네레이스톡신을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.11 디티오카바메이트계 농약(Dithiocarbamates)

가. 시험법 적용범위
서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 디티오카바메이트계 농약을 강한 산성 조건에서 100℃ 이상의 열로 가열하고 이로부터 발생되는 이황화탄소 가스를 이황화탄소 트랩에 포집하여 쿨렌(Cullen) 발색시약으로 발색시켜 분광광도법(435 nm)으로 분석한다.

다. 장치

1) 분광광도계(UV-Vis spectrophotometer)

2) 이황화탄소 발생 장치

그림1. 이황화탄소 발생 장치

3) 공기압축기(Air Compressor)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 쿨렌 발색시약: 초산구리(Cupric acetate) 500 mg과 디에탄올아민 100 g을 에탄올에 녹여 100 mL로 조제한 후 냉암소에서 보관하면서 7일마다 다시 제조하여 사용하여야 한다.

4) 40% 염화주석(SnCl2·H2O) 용액: 97% 염화주석 103.1 g을 진한 황산에 녹여 250 mL로 조제한다.

5) 이황화탄소 표준용액: 디티오카바메이트계 농약을 분광광도계를 이용하여 정량분석하고자 할 때 표준검량선 작성 시 사용하는 표준용액으로 HPLC급 이상의 에탄올에 이황화탄소를 녹여 제조한 후 밀봉하여 냉암소에 보관하면서 사용한다. 이황화탄소는 휘발성이 큰 물질이므로 무게를 달 때 주의하며 신속하게 수행하여야 한다.

※ 회수율 시험용 디티오카바메이트계 농약 표준용액: 디티오카바메이트계 농약의 표준품은 10% EDTA(Ethylene diamine tetraacetic acid)에 완전히 녹인 후 2 M 염산을 사용하여 pH를 7로 조절하고 100 mg/mL 농도로 조제하여 즉시 사용해야 한다. 반드시 사용 시마다 표준용액을 조제하여야 하며 보관하여 사용할 수 없다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
디티오카바메이트계 농약은 100℃ 이상에서 이황화탄소로 분해되는데 이 가스를 포집하기 위해 다. 2)의 이황화탄소 발생장치와 같이 장치 A, B와 삼구플라스크를 설치한다. 500 mL 삼구플라스크에 시료 100 g과 물 200 mL, 40% 염화주석 용액 5 mL, 진한 염산 10 mL를 차례로 넣고, 장치 A(황화수소 트랩)에 10% 수산화나트륨액 10 mL와 디클로로메탄 5 mL, 장치 B(이황화탄소 트랩)에 쿨렌 발색시약 15 mL를 넣어 모든 장치를 연결한다. 삼구플라스크의 한쪽 구멍은 마개로 막고 다른 쪽 구멍은 공기 튜브를 연결하여 분당 약 50 mL의 공기를 주입한다. 각 장치들이 새지 않음을 확인한 후 냉각관에 냉각수를 흘려보내고 멘틀로 가열하여 플라스크 내의 시료가 끓은 후 30분간 더 반응시킨다. 반응이 완료되면 약 5분간 방냉한 후 25 mL 용량의 플라스크에 장치 B의 액을 받아 에탄올로 25 mL 표선까지 채운 후 8분간 반응시켜 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 분광광도계 분석조건
435 nm에서 흡광도를 측정한다.

2) 검량선 작성
분광광도계를 미리 켜두고 30분간 안정화시킨다. 쿨렌 발색시약을 15 mL씩 25 mL 매스플라스크 10개에 나누어 담고 에탄올에 녹인 이황화탄소 표준품을 원하는 농도로 희석한 후 희석액 10 mL를 각각의 매스플라스크에 넣어주고, 에탄올을 이용하여 25 mL까지 채운다. 매스플라스크의 마개를 막고 잘 흔들어 섞고 8분 동안 반응시킨 후 435 nm 파장에서 차례대로 흡광도를 측정한다. 측정된 흡광도를 이용하여 표준검량선과 회귀방정식을 작성한다. 에탄올로 채운 후 10분 이내에 모든 측정을 마무리하도록 한다.

3) 정량한계
0.1 mg/kg

사. 정량시험
위 조건으로 측정된 흡광도를 미리 작성한 표준검량선에 대입하여 발생된 이황화탄소 양을 계산하고 이를 통해 시료 중 디티오카바메이트계 농약의 잔류량을 확인한다.

7.1.2.12 엠시피비(MCPB), 트리클로피르(Triclopyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 두류, 과일류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 가수분해, 유도체화 과정을 거쳐 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 엠시피비 및 트리클로피르 표준품을 각각 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 각각의 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 증발건고 시킨 후 ‘ 마. 시험용액의 조제 3) 유도체화’에 따라 실험하고 헥산으로 적절한 농도로 희석하여 사용한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

6) 유도체화 시약: 1 % pentafluorobenzylbromide/acetone 용액

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 이에 6 M 염산 10 mL 및 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출하고 이를 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 잔류물은 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 60 mL로 농축한다. 농축액에 5% 염화나트륨용액 100 mL 및 에틸에테르 100 mL를 넣어 분액깔때기(1)에 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 물층을 분액깔때기(2)에 옮긴다. 다시 물층(분액깔때기 2)에 에테르 100 mL씩으로 위와 같이 2회 되풀이한 후 에테르층을 합하고 이에 헥산 100 mL를 넣고 흔들어 섞어서 씻고 에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮긴다. 이에 헥산포화아세토니트릴용액 30 mL를 가해 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 감압농축기용 플라스크에 옮긴다. 다시 헥산층에 헥산포화아세토니트릴용액 30 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 아세토니트릴층을 위의 플라스크에 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 메탄올 25 mL에 녹인다.

2) 가수분해
위의 메탄올 25 mL에 1 M 수산화나트륨액 25 mL를 넣고 환류냉각관를 부착하여 80℃에서 30분간 가열하여 가수분해시킨 후 5% 염화나트륨용액 100 mL 및 에틸에테르 100 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 물층을 취하여 6 M 염산으로 pH를 1로 조정하여 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸에테르 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수, 여과하여 감압농축기용 플라스크에 넣는다. 다시 물층에 에틸에테르 100 mL씩으로 위와 같이 2회 되풀이한 후 에틸에테르층을 위의 플라스크에 합하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 아세톤 10 mL에 녹인다.

3) 유도체화
위의 아세톤 10 mL에 30% 탄산칼륨용액 0.1 mL 및 1% pentafluorobenzylbromide/ acetone용액 1 mL를 넣어 밀폐시켜 50℃에서 1시간 가열한 후 이에 5% 염화나트륨용액 50 mL 및 헥산 50 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리하고 헥산층을 감압농축기용 플라스크에 옮긴다. 다시 물층에 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 헥산층을 위의 플라스크에 합하고 무수황산나트륨으로 탈수, 여과하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려 버리고 잔류물을 헥산 5 mL에 녹인다.

4) 정제
미리 헥산으로 활성화한 플로리실 카트리지에 위의 액을 넣어 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트:헥산(10:90, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 이어서 에틸아세테이트:헥산(30:70, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 용출하여 받고 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 헥산 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: 안지름 0.53 mm, 길이 50 m의 기체크로마토그래프용 모세관 유리 컬럼에 메틸실리콘을 1.0 μm의 두께로 코팅한 것 또는 이와 동등한 것

나) 주입구 및 검출기 온도: 250℃, 280℃

다) 오븐 온도: 초기온도 60℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 250℃에서 일정시간 유지한다.

라) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것을 적절하게 조절한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.1.2.13 니코설퓨론(Nicosulfuron), 림설퓨론(Rimsulfuron), 메소설퓨론메틸(Mesosulfuron-methyl), 메타조설퓨론(Metazosulfuron), 메트설퓨론메틸(Metsulfuron-methyl), 모노설퓨론(Monosulfuron), 벤설퓨론메틸(Bensulfuron-methyl), 사이클로설파뮤론(Cyclosulfamuron), 설포메튜론메틸(Sulfometuron-methyl), 설포설퓨론(Sulfosulfuron), 시노설퓨론(Cinosulfuron), 아미도설퓨론(Amidosulfuron), 아이오도설퓨론메틸나트륨(Iodosulfuron-methyl-sodium), 아짐설퓨론(Azimsulfuron), 에타메트설퓨론메틸(Ethametsulfuron-methyl), 에톡시설퓨론(Ethoxysulfuron), 오르토설파뮤론(Orthosulfamuron), 옥사설퓨론(Oxasulfuron), 이마조설퓨론(Imazosulfuron), 클로르설퓨론(Chlorsulfuron), 클로리뮤론에틸(Chlorimuron-ethyl), 트리베뉴론메틸(Tribenuron-methyl), 트리아설퓨론(Triasulfuron), 트리토설퓨론(Tritosulfuron), 트리플록시설퓨론(Trifloxysulfuron), 트리플루설퓨론메틸(Triflusulfuron-methyl), 티펜설퓨론메틸(Thifensulfuron-methyl), 포람설퓨론(Foramsulfuron), 프로설퓨론(Prosulfuron), 프로피리설퓨론(Propyrisulfuron), 프리미설퓨론메틸(Primisulfuron-methyl), 플라자설퓨론(Flazasulfuron), 플루세토설퓨론(Flucetosulfuron), 플루피르설퓨론메틸(Flupyrsulfuron-methyl), 피라조설퓨론에틸(Pyrazosulfuron-ethyl), 할로설퓨론메틸(Halosulfuron-methyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 니코설퓨론, 포람설퓨론, 모노설퓨론, 옥사설퓨론, 티펜설퓨론메틸, 메트설퓨론메틸, 시노설퓨론, 설포메튜론메틸, 트리아설퓨론, 림설퓨론, 클로르설퓨론, 아미도설퓨론, 에타메트설퓨론메틸, 오르토설파뮤론, 메소설퓨론메틸, 아짐설퓨론, 트리플록시설퓨론, 설포설퓨론, 플루세토설퓨론, 벤설퓨론메틸, 플라자설퓨론, 이마조설퓨론, 트리베뉴론메틸, 아이오도설퓨론메틸나트륨, 플루피르설퓨론메틸, 프로피리설퓨론, 메타조설퓨론, 프로설퓨론, 피라조설퓨론에틸, 트리토설퓨론, 에톡시설퓨론, 클로리뮤론에틸, 할로설퓨론메틸, 트리플루설퓨론메틸, 프리미설퓨론메틸, 사이클로설파뮤론 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조검체의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
1.0	70	30
5.0	50	50
9.0	10	90
11.0	10	90
11.1	70	30
15.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
니코설퓨론 (Nicosulfuron)	3.8	410.4	410.1	411	1821)	25
					106	53
림설퓨론 (Rimsulfuron)	5.7	431.4	431.0	432	1821)	35
					325	23
메소설퓨론메틸 (Mesosulfuron- methyl)	6.2	503.5	503.0	504	1821)	37
					139	69
메타조설퓨론 (Metazosulfuron)	7.8	475.9	475.0	476	1821)	31
					295	25
메트설퓨론메틸 (Metsulfuron- methyl)	5.1	381.4	381.0	382	1671)	23
					77	81
모노설퓨론 (Monosulfuron)	4.5	337.3	337.0	338	1361)	47
					110	47
벤설퓨론메틸 (Bensulfuron- methyl)	7.1	410.4	410.0	411	1491)	27
					91	77
사이클로설파뮤론 (Cyclosulfamuron)	8.6	421.4	421.1	422	2611)	25
					218	39
설포메튜론메틸 (Sulfometuron- methyl)	5.5	364.4	364.0	365	1501)	23
					107	63
설포설퓨론 (Sulfosulfuron)	6.7	470.5	470.0	471	2111)	21
					261	25
시노설퓨론 (Cinosulfuron)	5.2	413.4	413.1	414	1831)	25
					83	59
아미도설퓨론 (Amidosulfuron)	5.8	369.4	369.0	370	2611)	21
					218	33
아이오도설퓨론메틸나트륨 (Iodosulfuron- methyl-sodium)	7.3	529.2	528.9	508	1671)	23
					69	139
아짐설퓨론 (Azimsulfuron)	6.2	424.4	424.1	425	1821)	21
					156	53
에타메트설퓨론메틸 (Ethametsulfuron-methyl)	6.0	410.4	410.1	411	1961)	23
					168	45
에톡시설퓨론 (Ethoxysulfuron)	8.2	398.4	398.0	399	2611)	23
					218	33
오르토설파뮤론 (Orthosulfamuron)	6.0	424.4	424.1	425	1991)	19
					227	21
옥사설퓨론 (Oxasulfuron)	4.7	406.4	406.0	407	1501)	37
					107	67
이마조설퓨론 (Imazosulfuron)	7.2	412.8	412.0	413	1531)	19
					156	27
클로르설퓨론 (Chlorsulfuron)	5.7	357.8	357.0	358	1411)	25
					167	25
클로리뮤론에틸 (Chlorimuron- ethyl)	8.2	414.8	414.0	415	1861)	23
					185	25
트리베뉴론메틸 (Tribenuron- methyl)	7.3	395.4	395.0	396	1551)	23
					181	29
트리아설퓨론 (Triasulfuron)	5.6	401.8	401.0	402	1671)	25
					141	35
트리토설퓨론 (Tritosulfuron)	8.0	445.3	445.0	446	1451)	57
					195	27
트리플록시설퓨론 (Trifloxysulfuron)	6.3	437.4	437.0	438	1821)	27
					83	67
트리플루설퓨론메틸 (Triflusulfuron- methyl)	8.4	492.4	492.1	493	2641)	31
					96	75
티펜설퓨론메틸 (Thifensulfuron- methyl)	4.8	387.4	387.0	388	1671)	21
					205	39
포람설퓨론 (Foramsulfuron)	4.2	452.4	452.1	453	2721)	19
					182	31
프로설퓨론 (Prosulfuron)	7.9	419.4	419.0	420	1411)	25
					167	25
프로피리설퓨론 (Propyrisulfuron)	7.8	455.9	455.0	456	2611)	23
					196	21
프리미설퓨론메틸 (Primisulfuron- methyl)	8.4	468.3	468.0	469	2541)	29
					199	29
플라자설퓨론 (Flazasulfuron)	7.2	407.3	407.0	408	1821)	27
					83	77
플루세토설퓨론 (Flucetosulfuron)	7.0	487.5	487.1	488	1561)	25
					100	69
플루피르설퓨론메틸 (Flupyrsulfuron- methyl)	7.8	465.4	465.0	466	1821)	35
					139	83
피라조설퓨론에틸 (Pyrazosulfuron- ethyl)	8.0	414.4	414.0	415	1821)	29
					139	65
할로설퓨론메틸 (Halosulfuron- methyl)	8.2	434.8	434.0	435	1821)	27
					83	71
1) 정량이온

3) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.14 글루포시네이트[Glufosinate(ammonium)], 글리포세이트(Glyphosate)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 물로 추출한 후 메틸에스테르화 하고 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 글리포세이트, 글루포시네이트 및 글루포시네이트 대사산물 2종*의 표준품을 각각 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

*글루포시네이트 대사산물: N-아세틸 글루포시네이트(N-acetyl-glufosinate), 3-MPP(3-[hydroxy(methyl)phosphinoyl]propionic acid)

4) 표준용액: 표준원액을 물에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 유도체 시약

가) 50 mM 사붕산나트륨 용액: 사붕산나트륨을 물에 녹여 50 mM이 되게 한다.

나) 4 mM FMOC-Cl 용액: 9-플루오레닐메틸 클로로포메이트(fluorenylmethyl chloroformate)을 아세토니트릴에 녹여 4 mM이 되게 한다(4℃ 냉장보관).

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 유리에 흡착하는 성질이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제
시료 10 g을 정밀히 달아 폴리프로필렌(PP) 튜브에 취하여 물 35 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한 뒤 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액을 다른 폴리프로필렌(PP) 튜브에 옮기고 물을 넣어 최종 부피가 40 mL가 되게 한다. 이 추출액 중 1 mL만 취하여 클로로포름 0.5 mL가 담긴 2 mL 폴리프로필렌 튜브에 옮겨 30초간 강하게 흔든 뒤 15,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액 0.5 mL를 5 mL 폴리프로필렌 튜브에 옮겨 물 0.5 mL를 넣고 50 mM 사붕산나트륨 용액 200 μL와 4 mM FMOC-Cl 용액 400 μL를 차례로 넣은 후 50℃에서 30분간 정치하여 층을 분리하고 유도체화 반응을 실시한다. 반응이 끝나면 상온에서 열을 식히고 포름산 10 μL를 넣어 pH를 낮춰준 후 디클로로메탄 0.5 mL를 넣어 섞고 30초간 강하게 흔든 뒤 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액 1 mL를 취해 시린지 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.1	95	5
5.0	10	90
6.0	10	90
6.5	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode 및 Negative ion mode)

나) Capillary temperature: 400℃

다) Spray voltage: 4,500 V

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Extrac mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
글리포세이트-FMOC (Glyphosate-FMOC)	Negative	4.0	391.3	391.1	390	168	15
						124	26
글루포시네이트-FMOC (Glufosinate-FMOC)	Negative	4.2	403.4	403.1	402	180	12
						206	16
N-아세틸 글루포시네이트 (N-acethyl glufosinate)	Positive	1.2	223.2	223.1	224	118	16
						56	32
3-MPP (3-[hydroxy(methyl) phosphinoyl]propionic acid)	Positive	1.2	152.1	152.1	153	79	22
						135	13

3) 검량선 작성
표준용액을 물에 일정농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 글리포세이트(4.0분), B: 글루포시네이트(4.2분),

C: N-아세틸 글루포시네이트(1.2분), D: 3-MPP(1.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.15 벤퓨라카브(Benfuracarb), 카보설판(Carbosulfan), 카보퓨란(Carbofuran 및 3-Hydroxycarbofuran), 퓨라티오카브(Furathiocarb)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 0.25 N 염산으로 환류 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 카보퓨란 및 3-수산화카보퓨란을 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 카보퓨란 및 3-수산화카보퓨란 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 카보퓨란과 3-수산화카보퓨란 표준원액을 1:2의 농도 비율이 되도록 아세토니트릴에 녹여 표준 혼합용액을 조제하고 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 6시간이상 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 추출용액: 0.25 N 염산

8) 여과 보조제: Hyflo-SuperCel 또는 celite 545를 전처리 과정 없이 그대로 사용한다.

9) 층 분리 보조제: sodium lauryl sulfate 4% 수용액

10) 시료보정(matrix-matched) 표준용액: 카보퓨란, 3-수산화카보퓨란 표준 혼합용액과 시료별 무처리 시료용액을 혼합, 카보퓨란 기준으로 최종 농도 0.005～0.1 mg/L가 되도록 희석한다. 즉, 아세토니트릴:물(20:80, v/v) 혼합용액에 녹인 무처리 시료 2배 농축액, 아세토니트릴에 조제한 최종 농도의 10배 농도에 해당하는 표준 혼합용액, 물을 5:1:4(v/v/v)의 비율로 정확히 혼합하여 시료보정 표준용액을 조제하고 LC-MS 검량용으로 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g(곡류는 10 g, 두류는 5 g)을 정밀히 달아 500 mL 용량의 증류플라스크 넣고, 0.25 N 염산 150 mL를 넣어 가열, 1시간 동안 환류 추출한다. 이 과정에서 벤퓨라카브, 카보설판 및 퓨라티오카브는 카보퓨란으로 정량적으로 전환, 추출된다. 플라스크를 신속히 방냉한 후 여분의 0.25 N 염산 50 mL를 냉각관 입구로부터 플라스크로 흘려 넣어 냉각관 및 플라스크 입구를 세척하여 환류 추출액과 합친다. 아세톤 20 mL를 넣어 잘 혼합하고(곡류 및 두류의 경우 여과보조제 2 g을 추가로 넣고 혼합), 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 플라스크 벽면을 아세톤 5 mL로 씻어 내려 0.25 N 염산 50 mL를 넣어 혼합한 후 흡인 여과, 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 염화나트륨 20 g을 넣고 완만하게 흔들어 완전히 녹인다. 수용액층을 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL로 2회 분배 추출한다(층 분리가 잘 안될 때에는 층 분리 보조제 1～5 mL를 넣고 가볍게 흔든 후 정치하여 층을 분리). 디클로로메탄층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충전한 후 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣고 디클로로메탄 5 mL로 용기 및 컬럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트:디클로로메탄(0.5:99.5, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고 다시 에틸아세테이트:디클로로메탄(30:70, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 아세토니트릴:물(20:80, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 물의 혼합비를 15:85(v/v)에서 60:40(v/v)으로 15분간 직선적으로 농도 구배한 후 10분간 유지한다.

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Cone voltage: 45 V

다) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
3-수산화카보퓨란 (3-Hydroxycarbofuran)	10.7	237.3	237.1	238, 220
카보퓨란 (Carbofuran)	18.6	221.3	221.1	222

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

1: 3-수산화카보퓨란(10.7분), 2: 카보퓨란(18.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 카보퓨란 및 3-수산화카보퓨란을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.16 캡탄(Captan), 캡타폴(Captafol), 폴펫(Folpet)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤 및 3% 인산용액으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 캡탄, 폴펫 및 캡타폴 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL와 3% 인산용액 5 mL를 넣어 2분간 흔들어 섞어 추출한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 수기에 아세톤 10 mL를 넣고 녹여 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL, 디클로로메탄 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL로 녹여 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 넣어 5분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 약 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 약 3 mL/분의 유량으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 디클로로메탄:헥산:아세토니트릴(50:48.5:1.5, v/v/v) 혼합용액 150 mL로 용출하여 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축한 후, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 15 mL/분

다) 주입부 온도: 250℃

라) 오븐 온도: 160℃(Captan, Folpet), 200℃(Captafol)

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입모드: 직접주입

사) 주입량: 2 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

1: 캡탄(13.5분), 2: 폴펫(14.4분), 3: 캡타폴(9.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 캡탄, 폴펫 및 캡타폴을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-1MS(50 m × 0.25 mm, 0.32 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 240℃

마) 주입 방법: Split mode(30:1)

바) 주입량: 1 μL

사) 분자량 범위: 50～400 m/z

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
캡타폴 (Captafol)	12.8	349.1	346.9	79, 151, 347
캡탄 (Captan)	10.2	300.6	298.9	79, 149, 301
폴펫 (Folpet)	10.6	296.6	294.9	76, 104, 260, 295

7.1.2.17 아크리나트린(Acrinathrin), 할펜프록스(Halfenprox)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻어 내려 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 차례로 가한 후 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 40 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리 컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 약 2 cm 높이로 차례로 건식 충전한 후 헥산 25 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 고정상 상단에 넣어 헥산 5 mL로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄:헥산(25:75, v/v) 혼합용액 50 mL로 유출시켜 버리고 다시 디클로로메탄:아세토니트릴:헥산(50:0.35:49.65, v/v/v) 혼합용액 50 mL로 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 10 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 220℃

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입모드: 직접주입

사) 주입량: 2 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

1: 아크리나트린(17.9분), 2: 할펜프록스(24.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
아크리나트린(0.01 mg/kg), 할펜프록스(0.02 mg/kg)

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아크리나트린, 할펜프록스를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 2 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 50℃에서 2분간 유지, 180℃까지 20℃/분 속도로 직선적 승온, 2분간 유지한 후 280℃까지 5℃/분 속도로 직선적 승온한다.

마) 인터페이스 온도: 300℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아크리나트린 (Acrinathrin)	27.0	541.4	541.1	181, 208, 289
할펜프록스 (Halfenprox)	30.0	477.3	476.1	263, 265, 183

7.1.2.18 노나클로르(Nonachlor), 비페닐(Biphenyl), 디클로사이메트(Diclocymet), 클로퀸토셋멕실(Cloquintocet-mexyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 활성탄/아미노프로필 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 비페닐, 클로퀸토셋멕실, 디클로사이메트 및 노나클로르 표준품을 각각 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) C18 카트리지(C18 cartridge): C18(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 활성탄/아미노프로필 카트리지(Amino-propyl cartridge): 활성탄(0.5 g)과 아미노프로필(0.5 g)이 2층으로 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g(차는 10 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류, 견과종실류는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 넣고 2시간 동안 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출하고 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 미리 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮겨 1분간 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴:톨루엔(75:25, v/v) 혼합용액 2 mL에 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세토니트릴:톨루엔(75:25, v/v) 혼합용액 2 mL로 녹인다.

2) 정제
활성탄/아미노프로필 카트리지에 아세토니트릴:톨루엔(75:25, v/v) 혼합용액 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴:톨루엔(75:25, v/v) 혼합용액 2 mL를 고정상 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴:톨루엔(75:25, v/v) 혼합용액 15 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합한다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소 가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한다. 시료별 최종 잔류물을 기체크로마토그래프 분석 대상 농약의 경우 아세톤 10 mL로 녹이고, 액체크로마토그래프 분석 대상 농약은 메탄올 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 2분간 유지하고 280℃까지 10℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 280℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
노나클로르 (Nonachlor)	18.2, 19.3	444.2	439.8	409, 411, 407
디클로사이메트 (Diclocymet)	17.5, 17.8	313.2	312.1	277, 221, 173
비페닐 (Biphenyl)	9.9	154.2	154.1	154, 153

2) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올과 5 mM 아세트산암모늄수용액의 혼합비를 35:65(v/v)로 2분간 유지 후 55:45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도 구배한 후 재차 95:5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도 구배한 후 10분간 유지한다.

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) Cone voltage: 30 V

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
클로퀸토셋멕실 (Cloquintocet-mexyl)	18.9	335.8	335.1	336, 238

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A	B	C

A: 비페닐(9.9분), B: 디클로사이메트(17.5, 17.8분), C: 노나클로르(18.2, 19.3분)

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

클로퀸토셋멕실(18.9분)

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
비페닐, 디클로사이메트, 노나클로르: 0.025 mg/kg
클로퀸토셋멕실: 0.02 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체/액체 크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 비페닐, 클로퀸토셋멕실, 디클로사이메트, 및 노나클로르를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.19 메펜피르(Mefenpyr), 사이클라닐리드(Cyclanilide), 아이소카바미드(Isocarbamid), 아이옥시닐(Ioxynil), 초산나프탈렌(1-Naphthylacetic acid), 클로란슐람메틸(Cloransulam-methyl), 클로메프로프에시드(Clomeprop acid), 클로프로프(Cloprop), 클로퀸토셋(Cloquintocet), 트랄콕시딤(Tralkoxydim), 플로라슐람(Florasulam), 플루멧슐람(Flumetsulam), 플루미클로락(Flumiclorac)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 실리카겔 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 클로메프로프에시드, 클로퀸토셋, 클로란슐람메틸, 사이클라닐리드, 플로라슐람, 플루멧슐람, 플루미클로락, 아이옥시닐, 아이소카바미드, 메펜피르, 초산나프탈렌 및 트랄콕시딤 표준품을 각각 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) C18 카트리지(C18 cartridge): C18(1 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 실리카겔 카트리지(silicagel cartridge): 실리카겔(0.5 g)이 충전되어 있는 1회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g(차는 분말 시료 10 g)을 정밀히 달아 500 mL 용량의 삼각플라스크에 넣고(곡류, 두류, 견과종실류 등 건조 시료는 물 30 mL, 차는 물 40 mL를 넣고 2시간 동안 방치) 0.01 M 염산 20 mL와 아세토니트릴 100 mL를 넣어 20분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 여과지(공극 10 μm 이하)가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여과액 중 수분에 충분히 포화되도록 염화나트륨 50 g이 들어있는 150 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하여 40℃ 이하에서 약 12 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소기류 하에서 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤:트리에틸아민:헥산(20:0.5:80, v/v/v) 혼합용액 2 mL로 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 아세토니트릴층 중 20 mL를 정확히 취하고 40℃ 이하에서 약 10 mL가 남을 때까지 감압 농축하여 다음의 유지 제거과정을 추가로 수행한다. 즉, C18 카트리지에 아세토니트릴 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴 추출액 10 mL를 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세토니트릴 20 mL(클로프로프 및 플루미클로락 분석 시에는 5 mL)를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 잔류물을 아세톤:트리에틸아민:헥산(20:0.5:80, v/v/v) 혼합용액 2 mL로 녹인다.

2) 정제

가) 클로메프로프에시드, 클로프로프 및 플루미클로락
실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린 후 다시 아세톤:트리에틸아민:헥산(20:0.5:80, v/v/v) 혼합용액 10 mL를 유출시켜 버리고 아세톤:메탄올(50:50, v/v) 혼합용액 12 mL를 용출하여 시험관에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 5 mL를 넣어 녹인다.

나) 클로퀸토셋 및 메펜피르
실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 다시 아세톤:트리에틸아민:헥산(20:0.5:80, v/v/v) 혼합용액 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합치고 여기에 아세톤:메탄올(50:50, v/v) 혼합용액 20 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 넣어 녹인다.

다) 클로란슐람메틸 등 나머지 농약
실리카겔 카트리지에 메탄올 5 mL, 아세톤 5 mL 및 헥산 20 mL를 2～3 방울/초의 속도로 순차적으로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 추출액 2 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤:트리에틸아민:헥산(20:0.5:80, v/v/v) 혼합용액 10 mL과 아세톤:메탄올(50:50, v/v) 혼합용액 10 mL를 용출하여 앞의 용출액과 합친다. 이를 40℃ 이하에서 약 1～2 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 서서히 증발, 건고한 후 메탄올 10 mL를 넣어 녹인다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올과 5 mM 아세트산암모늄수용액의 혼합비를 35:65(v/v)에서 2분간 유지한 후 55:45(v/v)로 6분간 직선적으로 농도 구배한 후 재차 95:5(v/v)로 10분간 직선적으로 농도 구배한 후 10분간 유지한다.

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode 및 Negative ion mode)

사) Cone voltage: 30～50 V(이온화 방식 및 농약별로 최적화한 값을 사용한다.)

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
메펜피르 (Mefenpyr)	Positive	17.2	317.1	316.0	327, 329
사이클라닐리드 (Cyclanilide)	Negative	11.3	274.1	273.0	272, 228
아이소카바미드 (Isocarbamid)	Positive	5.2	185.2	185.1	186
아이옥시닐 (Ioxynil)	Negative	9.9	370.9	370.8	370
초산나프탈렌 (1-Naphthylacetic acid)	Negative	4.6	186.2	186.1	141, 185
클로란슐람메틸 (Cloransulam-methyl)	Positive	8.1	429.8	429.0	430, 398
클로메프로프에시드 (Clomeprop acid)	Negative	11.4	248	248.0	247, 175
클로퀸토셋 (Cloquintocet)	Positive	5.4	237.6	237.0	238, 240
클로프로프 (Cloprop)	Negative	5.0	200.6	200.0	127, 129
트랄콕시딤 (Tralkoxydim)	Positive	13.5	329.4	239.2	284, 330
플로라슐람 (Florasulam)	Positive	3.3	359.3	359.0	360
플루멧슐람 (Flumetsulam)	Positive	2.5	325.3	325.0	326
플루미클로락 (Flumiclorac)	Negative	10.1	353.7	353.0	294, 352, 296

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A	B

A: 클로퀸토셋(5.4분), B: 메펜피르(17.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

A	B	C	D	E

A: 플루멧슐람(2.5분), B: 플로라슐람(3.3분), C: 아이소카바미드(5.2분),

D: 클로란슐람메틸(8.2분), E: 트랄콕시딤(13.5분)

그림 2. 표준품의 크로마토그램 예시.

A
B
C

A: 클로프로프(5.0분), B: 플루미클로락(10.1분), C: 클로메프로프에시드(11.4분)

그림 3. 표준품의 크로마토그램 예시.

A	B	C

A: 초산나프탈렌(4.6분), B: 아이옥시닐(9.9분), C: 사이클라닐리드(11.3분)

그림 4. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로메프로프에시드, 클로프로프, 클로퀸토셋, 클로란슐람메틸, 사이클라닐리드, 플로라슐람, 플루멧슐람, 플루미클로락, 아이옥시닐, 아이소카바미드, 메펜피르, 초산나프탈렌 및 트랄콕시딤을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.20 이마자메타벤즈-메틸(Imazamethabenz-methyl), 이마자목스(Imazamox), 이마자피르(Imazapyr), 이마자픽(Imazapic), 이마자퀸(Imazaquin), 이마제타피르(Imazethapyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 이마자피르, 이마자픽, 이마자메타벤즈-메틸, 이마제타피르, 이마자목스 표준품은 각각 아세토니트릴에 녹이고, 이마자퀸, OH-이마제타피르 표준품은 각각 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료는 물 5 mL 넣고 30분 방치) 1% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 가한 뒤 10분간 흔들어 섞은 후 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
0.5	95	5
2.0	75	25
7.0	55	45
8.0	0	100
9.0	0	100
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

	분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	이마자메타벤즈-메틸2) (Imazamethabenz -methyl)	4.7	288.3	288.1	289	1441)	25
						86	19
						229	19
2	이마자목스 (Imazamox)	3.7	305.3	305.1	306	1931)	25
						86	24
						218	26
3	이마자퀸 (Imazaquin)	5.8	311.3	311.1	312	1991)	25
						86	24
						267	20
4	이마자피르 (Imazapyr)	3.2	261.2	261.1	262	1491)	25
						86	25
						69	22
5	이마자픽 (Imazapic)	3.8	275.3	275.1	276	2311)	19
						163	24
						248	15
6	이마제타피르 (Imazethapyr)	4.8	289.3	289.1	290	1591)	33
						230	21
						245	20
	OH-이마제타피르 (OH-imazethapyr)	3.3	305.3	305.1	306	2611)	21
						193	28
						86	27
1) 정량이온 2) 이마자메타벤즈-메틸은 컬럼의 분리능에 따라 피크가 두 개로 분리될 경우 두 피크 면적의 합으로 정량함.

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 이마자피르(3.2분), B: OH-이마제타피르(3.3분), C: 이마자목스(3.7분),

D: 이마자픽(3.8분), E: 이마자메타벤즈-메틸(4.7분),

F: 이마제타피르(4.8분), G: 이마자퀸(5.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 이마자피르, 이마자픽, 이마자메타벤즈-메틸, 이마제타피르, 이마자목스, 이마자퀸 및 OH-이마제타피르를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.21 사이할로포프뷰틸(Cyhalofop-butyl), 피리데이트(Pyridate), 퀴잘로포프에틸(Quizalofop-ethyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: Z-Sep(Zirconium dioxide-based sorbent)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료를 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 20 mL를 넣고(곡류 및 두류의 경우 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL를 넣고 30분간 방치한 후 아세토니트릴 10 mL 넣음) 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨․1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨․2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
Z-Sep 75 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’에서 얻은 상층액 1.5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 상층액과 메탄올을 1:1로 혼합하고 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.0 mm × 150 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
2.0	95	5
4.0	5	95
10.0	5	95
12.0	95	5
15.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.9 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
사이할로포프뷰틸 (Cyhalofop-butyl)	9.6	357.4	357.1	358	2561)	10
					120	26
퀴잘로포프에틸 (Quizalofop-ethyl)	10.3	372.8	372.0	373	2991)	20
					91	32
피리데이트 (Pyridate)	12.8	378.9	378.1	379	2071)	28
					351	10
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

1. 사이할로포프뷰틸(9.6분), 2. 퀴잘로포프에틸(10.3분), 3. 피리데이트(12.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 사이할로포프뷰틸, 피리데이트, 퀴잘로포프에틸을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.22 노발루론(Novaluron), 디메토모르프(Dimethomorph), 이프로디온(Iprodione)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 노발루론, 디메토모르프, 이프로디온 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: Z-Sep(Zirconium dioxide-based sorbent)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 2분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 3분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
Z-Sep 75 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 다음 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 여과액 200 μL에 아세토니트릴 800 μL를 합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	85	15
1.0	85	15
6.0	10	90
8.0	10	90
9.0	0	100
11.0	0	100
13.0	85	15
16.0	85	15

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
노발루론 (Novaluron)	7.7	492.7	492.0	493	1411)	69
					158	37
					113	109
디메토모르프2) (Dimethomorph)	6.7 6.8	387.9	387.1	388	3011)	31
					165	39
					152	89
이프로디온 (Iprodione)	7.2	330.2	329.0	330	2451)	25
					288	17
					174	49
1) 정량이온 2) 디메토모르프는 컬럼의 분리능에 따라 피크가 분리될 경우 두 피크 면적의 합으로 정량함.

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 디메토모르프(6.7, 6.8분), B: 이프로디온(7.2분), C: 노발루론(7.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 디메토모르프, 이프로디온, 노발루론을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.23 딤프로피리다즈(Dimpropyridaz), 사이클로뷰트리플루람(Cyclobutrifluram)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 딤프로피리다즈, 사이클로뷰트리플루람 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
3.0	50	50
7.0	10	90
8.0	10	90
8.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode 및 Negative ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
딤프로피리다즈 (Dimpropyridaz)	Positive	4.4	301.4	301.1	302	1091)	20
						179	15
						206	15
사이클로뷰트리플루람 (Cyclobutrifluram)	Negative	6.4	389.2	388.0	387	2151)	12
						146	18
1) 정량이온

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 딤프로피리다즈(4.4분), B: 사이클로뷰트리플루람(6.4분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 딤프로피리다즈와 사이클로뷰트리플루람을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.2.24 디펜조쾃(Difenzoquat), 메피쾃클로라이드(Mepiquat chloride), 클로르메쾃(Chlormequat)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 50% 메탄올 용액으로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 디펜조쾃, 메피쾃, 클로르메쾃 표준품을 메탄올에 녹여 각각의 양이온*으로써 1,000 mg/L가 되게 한다.

* 상용화된 표준품은 음이온 분자를 포함한 형태이므로 디펜조쾃, 메피쾃, 클로르메쾃 양이온으로써 분자량을 고려하여 표준원액을 조제한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): Divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone Copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 1% 포름산을 함유한 50% 메탄올 용액 10 mL를 넣은 뒤 5분간 강하게 흔들어 섞고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 전량을 취하는 방법으로 2회 반복 추출하여 상층액을 별도의 용기에 합한다. 취한 상층액에 1% 포름산을 함유한 50% 메탄올 용액을 넣어 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 5 mL와 물 5 mL를 차례로 넣고 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 1% 포름산 함유 메탄올 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: HILIC계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 50 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
1.0	10	90
4.0	95	5
7.0	95	5
7.1	10	90
11.0	10	90

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
디펜조쾃 (Difenzoquat)	2.8	249.3	249.1	249	1301)	47
					193	39
					77	69
메피쾃 (Mepiquat)	4.5	114.2	114.1	114	981)	33
					58	33
					99	27
클로르메쾃 (Chlormequat)	3.7	122.6	122.0	122	581)	37
					59	25
				124	58	41
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

(A)디펜조쾃(2.8분), (B)클로르메쾃(3.7분), (C)메피쾃(4.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 디펜조쾃, 메피쾃, 클로르메쾃을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
※ 메피쾃클로라이드의 잔류량 = 메피쾃의 잔류량 × 환산계수*
* 환산계수 = 1.32(메피쾃클로라이드 분자량 150 / 메피쾃 분자량 114)

7.1.3 단성분 시험법(Individual residue methods)

7.1.3.1 디클로플루아니드(Dichlofluanid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(177～250 μm)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 ㎎/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 곡류 및 두류
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 아세톤 100 mL 및 물 40 mL를 넣고 3분간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 2,000 rpm에서 약 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 100 mL를 넣고 동일한 방법으로 3분간 추출하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 물층을 미리 10% 염화나트륨용액 100 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 헥산 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 헥산층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 50 mL씩으로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 헥산을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 잔류물에 헥산 15 mL를 넣어 분액깔때기에 옮기고 이에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 취한다. 헥산층에 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 아세토니트릴층에 합친다. 이를 미리 5% 염화나트륨용액 400 mL 및 헥산 100 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 삼각플라스크에 옮기고 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 30 mL씩으로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 5 mL로 농축한다.

나) 채소류, 과일류, 종실류, 견과류 및 호프
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 아세톤:물(70:30, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 3분간 흔들어 섞어 추출한 후 2,000 rpm에서 약 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤:물(70:30, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣고 동일한 방법으로 3분간 추출하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 날려 보낸다. 물층을 미리 10% 염화나트륨용액 100 mL 및 헥산 50 mL를 넣은 분액깔때기(Ⅰ)에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 분액깔때기(Ⅱ)에 옮긴다. 물층에 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 분액깔때기(Ⅱ)에 합친다. 이에 물 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층은 버린다. 헥산층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 20 mL씩으로 분액깔때기(Ⅱ)를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 5 mL로 농축한다.

2) 정제
안지름 22 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 플로리실 20 g과 무수황산나트륨 8 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 에테르:헥산(6:94, v/v) 혼합용액 200 mL로 유출시켜 버린 후 에테르:헥산(50:50, v/v) 혼합용액 200 mL로 용출하여 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려보낸다. 잔류물을 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 규조토(177～250 μm)를 6 N 염산으로 2시간 환류시켜 씻고 물로 유출액이 중성이 될 때까지 씻은 후 건조하여 메틸실라잔처리[트리메틸클로르실란:피리딘:헥산메틸디실라잔(1:5:3, v/v/v) 혼합용액에 침지하여 10분간 물로 씻고 건조한다]한다.

(2) 고정상액체: 5% 기체크로마토그래프용 실리콘

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 2 m의 유리관

다) 주입부 및 검출기 온도: 210℃

라) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것(약 14분에 유출하는 유량으로 조정한다)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.2 알루미늄포스파이드[Aluminium phosphide(Hydrogen phosphide)]

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 가열하여 얻은 인화수소 가스를 기체크로마토그래프로 확인한다. 검출되는 경우에는 시료 중 분석대상물질을 가열하여 얻은 인화수소를 포화브롬수로 포집하여 몰리브덴산과 반응시켜 분광광도계로 분석한다.

다. 시험방법

1) 정성시험

가) 장치
기체크로마토그래프-질소․인검출기(GC-NPD)

나) 시약 및 시액

(1) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

(2) 표준가스: 알루미늄포스파이드(AlP, 56%) 44.6 mg을 취하여 300 mL 헤드스페이스병에 넣고 10% 황산 50 mL를 넣어 인화수소로써 100 mg/L가 되게 한다. 이를 청정공기로 희석한 후 약 10 ng/mL가 되게 하여 사용한다.

(3) 10% 황산(sulfuric acid) 용액: 물에 진한 황산 10 mL를 조금씩 넣어 100 mL가 되게 한다.

다) 시험가스의 조제
시료 10 g을 정밀히 달아 300 mL 헤드스페이스병에 넣고 시료가 충분히 잠기도록 10% 황산 100 mL를 넣은 후 즉시 밀봉하여 흔들어 섞는다. 헤드스페이스병을 60℃ 오븐에 넣어 50분간 반응시켜 인화수소 가스가 헤드스페이스에 포집되게 한 후 실온에서 방냉한다. 가스타이트시린지로 50 μL를 취하여 시험가스로 한다.

라) 시험조작

(1) 기체크로마토그래프 분석조건

(가) 컬럼: PLOT(Porous Layer Open Tubular) 컬럼(10 m × 0.25 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

(나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

(다) 주입부 온도: 220℃

(라) 오븐 온도: 50℃

(마) 검출기 온도: 300℃

(바) 주입 방법: Split mode(50:1)

(사) 주입량: 50 μL

(2) 표준품 크로마토그램
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준가스 피크의 머무름 시간과 일치할 경우 ‘2) 정량시험'에 따른다.

인화수소(1.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

2) 정량시험

가) 장치

(1) 분광광도계

(2) 분해흡수장치

나) 시약 및 시액

(1) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

(2) 표준원액: 인산이수소칼륨(potassium dihydrogen phosphate)을 물에 녹여 인으로써 100 mg/L가 되게 한다.

(3) 표준용액: 표준원액을 물로 희석하여 1.0 mg/L가 되게 한 후 0.1, 0.2, 0.3, 0.4 및 0.5 mL를 각각 마개가 달린 20 mL 시험관에 취한다.

(4) 포화브롬수(bromine water)

(5) 10% 황산(sulfuric acid) 용액: 물에 진한 황산 10 mL를 조금씩 넣어 100 mL가 되게 한다.

(6) 0.15% 황산하이드라진(hydrazine sulfate) 용액: 황산하이드라진 0.15 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

(7) 2.5% 몰리브덴산암모늄 4수화물(ammonium molybdate tetrahydrate) 용액: 몰리브덴산암모늄 4수화물 2.5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

(8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

다) 시험용액의 조제
시료 500 g을 정밀히 달아 분해흡수장치 증류플라스크에 넣고 10% 황산 2 L를 넣어 즉시 증류장치에 연결한다. 분해흡수 장치 제1, 2 흡수관에 각각 포화브롬수 100 mL를 넣고 외부는 얼음으로 냉각시킨다. 증류플라스크에 질소를 200 mL/분으로 30분간 흘리고 증류플라스크를 2시간 동안 가열한다. 제1, 2 흡수관의 포화브롬수를 500 mL의 비커에 옮기고 각각의 흡수관을 소량의 물로 씻어 앞의 비커에 합쳐 열교반기로 가열하여 브롬을 제거하고 약 10 mL로 농축한다. 이를 유리여과기로 여과하고 물을 넣어 25 mL로 정용하여 시험용액으로 한다.

시험용액 5 mL를 취하여 마개가 달린 20 mL 시험관에 넣고 5 N 황산 2 mL, 0.15% 황산하이드라진용액 0.5 mL 및 2.5% 몰리브덴산암모늄 4수화물 1 mL를 차례로 넣고 물을 넣어 정확히 10 mL가 되도록 한다. 신속히 마개를 닫고 비등 수욕상에서 10분간 가열한 후 실온에서 냉각한다. 이를 셀에 취하고 5 N 황산:0.15% 황산하이드라진 용액:2.5% 몰리브덴산암모늄 4수화물 용액:물(2:0.5:1:6.5, v/v/v/v) 혼합용액을 대조로하여 분광광도계 730 nm에서 흡광도를 측정하고 검량선에 의한 인 농도를 구한다. 이 값에 환산계수(PH3/P) 1.1을 곱하여 인화수소의 양을 구한다.

라) 시험조작

(1) 분광광도계 분석조건
730 nm에서 흡광도를 측정한다.

(2) 검량선 작성
표준용액이 담긴 20 mL 시험관에 5 N 황산 2 mL, 0.15% 황산하이드라진 용액 0.5 mL 및 2.5% 몰리브덴산암모늄 4수화물 용액 1.0 mL를 차례로 넣고 물을 넣어 정확히 10 mL가 되도록 한다. 신속히 마개를 닫고 비등 수욕상에서 10분간 가열한 후 실온에서 냉각한다. 이를 셀에 취하고 5 N 황산:0.15% 황산하이드라진 용액: 2.5% 몰리브덴산암모늄 4수화물 용액:물(2:0.5:1:6.5, v/v/v/v) 혼합용액을 대조로하여 분광광도계 730 nm에서 흡광도를 측정하고 인의 검량선을 작성한다.

(3) 정량한계
0.01 mg/kg

7.1.3.3 아미트라즈(Amitraz)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아미트라즈 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 1 N 수산화나트륨 용액 0.5 mL와 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 추출한다. 4℃, 3,500 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 50 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A:  0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
7.0	0	100
10.0	0	100
11.0	90	10
14.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 3 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아미트라즈 (Amitraz)	7.8	293.4	293.1	294	1631)	20
					122	30
					107	40
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

아미트라즈(7.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아미트라즈를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.4 디캄바(Dicamba)

가. 시험법 적용범위

곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

시료 중 디캄바를 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다. 이에 물을 2% 넣고 잘 혼합한다.

4) 표준원액: 디캄바(Dicamba) 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다. 이하 마. 시험용액의 조제 3) 트리클로로에틸에스텔화에 따라 조작한 후 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보내고 잔류물을 헥산에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

시료 20 g(곡류, 두류는 10 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 아세톤(곡류, 두류는 물 30%를 함유한 아세톤) 100 mL 및 4 N 염산 5 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출하여 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 다시 아세톤(곡류, 두류는 물 30%를 함유한 아세톤) 100 mL를 넣고 동일한 방법으로 5분간 추출하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 날려 보낸다. 이 수용액을 미리 5% 염화나트륨용액 200 mL를 넣은 분액깔때기에 옮겨 pH 1 이하인 것을 확인하고 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸아세테이트층을 취한다. 물층에 다시 에틸아세테이트 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 앞의 에틸아세테이트층에 합친다. 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 에틸아세테이트 약 20 mL로 씻는다. 에틸아세테이트를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다. 잔류물을 헥산 10 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 이에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 취한다. 헥산층에 다시 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 아세토니트릴층을 앞의 분액깔때기에 합쳐 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다.

2) 가수분해 및 정제

위의 잔류물을 메탄올 20 mL로 녹이고 이에 1.5 N 수산화나트륨액 10 mL를 넣어 길이 1 m의 유리관을 달아 80℃의 수욕상에서 30분간 반응시킨 후 40℃ 이하에서 메탄올을 감압 농축하여 거의 날려 보낸다. 잔류물은 유리솜을 깔은 여과지로 여과하여 분액깔때기에 옮기고 다시 여과지를 소량의 물과 아세톤으로 씻는다. 이에 포화염화나트륨용액 50 mL 및 에테르 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에테르층은 버린다. 물층을 다시 4 N 염산으로 pH 1 이하로 하여 에틸아세테이트 50 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이한다. 에틸아세테이트층을 합쳐 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 에틸아세테이트 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려 보낸다.

3) 트리클로로에틸에스텔화

위의 잔류물에 트리클로로에탄올 1 mL, 2% 디사이클로헥실카보디아미드(N, N- dicyclohexylcarbodimide: DCC), 피리딘용액 0.5 mL를 넣고 마개를 하여 60℃의 수욕상에서 60분간 반응시킨다. 식힌 후 소량의 아세톤과 헥산 50 mL로 분액깔때기에 옮기고 이에 2% 탄산수소나트륨용액 50 mL를 넣어 약 30초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층을 즉시 버린다. 헥산층에 0.5 N 염산 50 mL, 다음에 물 50 mL로 5분간 강하게 흔들어 섞는다. 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 무수황산나트륨을 다시 헥산 약 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 약 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축한다.

4) 정제

안지름 15 mm의 컬럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 3 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 30% 벤젠함유헥산 100 mL로 유출시킨 후 50% 벤젠함유헥산 100 mL로 용출하여 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 1 mL가 남을 정도까지 감압 농축하고 다시 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려보낸 후 잔류물을 헥산에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(HP), 크로모솔브 W(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 5% QF-1, 5% SE-30, 5% OV-275, 5% XE-60 및 2% DEGS＋0.5% 인산

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

다) 주입부 온도: 200～250℃

라) 오븐 온도: 180～220℃

마) 검출기 온도: 250～280℃

바) 이동상가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 20～50 mL/분

2) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
표준용액 및 시험용액의 일정량을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간은 일치하여야 한다. 다만, 머무름 시간은 필요에 따라서 컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 기체크로마토그래피를 한 결과에 따른다.

아. 정량시험
정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.5 키노메티오네이트(Chinomethionat)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD: 황용 간섭필터, 파장 394 nm)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica): 실리카를 컬럼크로마토그래피용으로 제조한 것을 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 100 g(곡류는 50 g)을 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 100 mL를 넣고 2시간 방치) 3,000 rpm에서 약 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한 후 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 100 mL를 넣고 동일한 방법으로 3분간 추출하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 물층을 미리 헥산 100 mL 및 포화염화나트륨용액 150 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이에 적당량의 무수황산나트륨을 넣어 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 헥산 50 mL씩으로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 채소류 및 과일류는 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 5 mL로 농축하고 곡류는 아래와 같이 조작한다. 위의 여과액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산을 거의 날려보낸 후 잔류물에 헥산 15 mL를 넣어 분액깔때기에 옮긴다. 이에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 취한다. 헥산층에 헥산포화아세토니트릴 30 mL씩을 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 아세토니트릴층에 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 잔류물을 헥산 5 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 실리카 10 g을 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 녹인 액을 넣고 에틸아세테이트:헥산(1:50, v/v) 혼합용액 150 mL를 넣고 처음의 50 mL는 버리고 다음의 용출액 100 mL를 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 에틸아세테이트 및 헥산을 날려보낸다. 잔류물을 아세톤에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 규조토(177～250 μm)를 6 N 염산으로 2시간 환류시켜 씻고 물로 유출액이 중성이 될 때까지 씻은 후 건조하여 메틸실라잔처리[트리메틸클로르실란:피리딘:헥사메틸디실라잔(1:5:3, v/v/v) 혼합용액에 침지하여 10분간 물로 씻고 건조한다]한다.

(2) 고정상액체: 5% 기체크로마토그래프용 실리콘

나) 컬럼: 안지름 2.6 mm, 길이 2.1 m 유리관

다) 주입부 및 검출기 온도: 230℃

라) 오븐 온도: 210℃

마) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것(키노메티오네이트가 약 4분에서 유출하는 유량으로 조정하고 공기 및 수소의 유량을 최적 조건으로 조정한다.)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.6 비터타놀(Bitertanol)

가. 시험법 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(177～250 μm)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g(곡류 및 두류는 10 g)을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 2시간 방치) 약 5분간(채소류 및 과일류는 2분) 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 50 mL를 넣고 동일한 방법으로 2분간 추출하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 아세톤을 감압 농축한다. 물층을 미리 에틸아세테이트 100 mL 및 포화염화나트륨용액 50 mL(채소류, 과일류는 100 mL)를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸아세테이트층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 에틸아세테이트층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이에 적당량의 무수황산나트륨을 넣어 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 에틸아세테이트 50 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 채소류, 과일류는 위의 잔류물을 헥산 2 mL에 녹이고 곡류 및 두류는 아래와 같은 조작을 거친다. 위의 잔류물에 헥산 15 mL 및 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 분액깔때기에 옮긴다. 헥산층에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 분액깔때기에 합친다. 이에 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 넣고 천천히 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물을 헥산 2 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 300 mm의 컬럼관에 플로리실 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 8 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 녹인 액을 넣고 헥산 50 mL로 유출시킨 후 아세톤:헥산(3:17, v/v) 혼합용액 150 mL, 에테르 80 mL 순으로 용출하여 용출액을 합친다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물을 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: 안지름 0.53 mm, 길이 30 m의 모세관 유리 컬럼에 기체크로마토그래프용 6% 시아노프로필-메틸실리콘을 1.5 μm의 두께로 코팅한 것

나) 주입부 및 검출기 온도: 230℃

다) 오븐 온도: 초기의 온도 50℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 15℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 150℃에서 5분간 유지한 후 다시 8℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 230℃에서 25분간 유지한다.

라) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.7 펜틴(Fentin, Triphenyltin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤과 브롬산으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
주1) 펜틴아세테이트 및 펜틴클로라이드는 분석시 펜틴하이드록사이드로 전환됨

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 펜틴(Fentin hydroxide) 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 10분간 방치) 아세톤 80 mL와 브롬산 5 mL를 차례로 넣어 5분간 흔들어 섞어 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 씻어 위의 여과액과 합한다. 합친 여과액을 1,000 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들고 난 후 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 수용액 층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣어 추출한 후 합친다. 추출액을 40℃에서 감압 농축하고 건고물을 아세토니트릴 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm의 컬럼관에 실리카 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충전 시키고 아세토니트릴 25 mL를 유출시켜 버린다. 아세토니트릴 시료 용액 10 mL를 가한 후 여분의 아세토니트릴 5 mL로 유출시켜 버린다. 컬럼에 다시 아세토니트릴 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고 아세토니트릴:초산(100:0.2, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 용출하여 받는다. 용출액을 40℃에서 감압 농축 하고 건고물을 40 mM 염화나트륨 함유 아세토니트릴:3 mM 염산(45:55, v/v) 혼합용액으로 녹여 시험용액으로 한다(채소류 및 과일류의 경우 10 mL에 녹이고 곡류 및 두류는 4 mL에 녹인다.)

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.9 mm × 150 mm, 4.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 염화나트륨 함유 아세토니트릴과 3 mM 염산(45:55, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 검출파장: 214 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

펜틴하이드록사이드(12.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.8 다미노자이드(Daminozide)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 증류시켜 2-NBH로의 변환한 후 알루미나 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 2-니트로벤즈알데히드(2-NB): 2-NB(2-Nitrobenzaldehyde) 2 g을 메탄올 100 mL에 녹인다.

4) 알루미나(Alumina): 컬럼크로마토그래피용 알루미나(60～80 mesh)를 280℃에서 4시간 활성화한 후 물 1%를 넣어 잘 혼합한다(마개를 하여 14시간 이상 방치한 후 사용한다).

5) 표준품(Benzaldhyde, 2-Nitrodimethylhydrazon:2-NBH)의 합성:1, 1-디메틸하이드라진(unsymmetrical dimethyl hydrazine:UDMH) 9 g, 2-니트로벤즈알데히드 7.5 g 및 무수에탄올 150 mL를 플라스크에 넣고 환류냉각관를 달아 2시간 가열 환류한다. 식힌 후 용액 50 mL를 취하여 40℃ 이하에서 에탄올을 감압 농축한다. 따로 안지름 15 mm의 컬럼관에 알루미나 50 g, 다음에 무수황산나트륨 2 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 5% 에테르함유헥산 250 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하에서 용매를 감압 농축하고 다시 실온에서 용매를 진공펌프로 흡인하여 완전히 날려보낸다. 이 담갈색의 2-NBH를 표준품으로 한다(갈색유리병에 넣어 냉장 보관한다).

6) 표준원액: 2-NBH의 표준품을 벤젠에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

7) 표준용액: 표준원액을 벤젠에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다(사용할 때 만든다.).

8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 가수분해 및 증류
시료 20 g(곡류, 두류는 10g)을 추출 용기에 넣고 필요하면 물을 적당량 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출하고 이를 소량의 물로 씻어 증류플라스크에 넣는다. 이에 아연말 2 g, 50% 수산화나트륨액 160 mL를 넣어 즉시 증류장치에 연결한다. 포집관은 미리 1 M 인산완충용액(pH 6) 5 mL를 넣어 냉각기의 끝이 잠기도록 하고 얼음으로 냉각하면서 가열증류하여 약 20 mL를 받는다.

2) 2-NBH로의 변환
위에서 받은 증류액에 2-NB 용액 5 mL를 넣고 마개를 하여 흔들어 섞은 후 30℃에서 때때로 가볍게 흔들면서 2시간 반응시킨다. 용액을 분액깔때기에 옮기고 용기를 소량의 물로 씻어 앞의 액에 합친다. 이에 벤젠 10 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 벤젠층을 취한다. 물층에 다시 벤젠 10 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 벤젠층에 합친다. 벤젠층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 컬럼을 벤젠 20 mL로 씻은 후 이를 40℃ 이하에서 감압하여 완전히 날려보낸다. 잔류물을 헥산:벤젠(1:1, v/v) 혼합용액 5 mL에 녹인다.

3) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 알루미나 10 g, 다음에 무수황산나트륨 2 g을 각각 헥산:벤젠(1:1, v/v) 혼합용액에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산, 벤젠 혼합액이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 헥산:벤젠(1:1, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출한다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 크로모솔브 W(HP), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 10% SP-1000, 3% OV-17 5% 및 XE-60

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

다) 주입부 온도: 250～280℃

라) 오븐 온도: 150～200℃

마) 검출기 온도: 280～300℃

바) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 30～50 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
표준용액 및 시험용액의 일정량을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간은 일치하여야 한다. 다만, 머무름 시간은 필요에 따라서 컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 기체크로마토그래피를 한 결과에 따른다.

아. 정량시험
정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.9 에디펜포스(Edifenphos)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD: 인용 간섭필터, 파장 536 nm)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 20 g(곡류, 두류 및 견과종실류는 10 g)을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 2시간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 흔들어 섞은 후 3,000 rpm에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 침전물에 아세톤 50 mL를 넣고 2분간 흔들어 섞어 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 원심분리한다. 상층액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 물층을 미리 에틸아세테이트 100 mL 및 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 에틸아세테이트층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 다시 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 에틸아세테이트층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 이에 적당량의 무수황산나트륨을 넣고 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 에틸아세테이트 50 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지상의 잔류물을 씻는 조작을 2회 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축하여 거의 날려보낸다. 채소류와 과일류는 잔류물을 아세톤에 녹여 정확히 5 mL로 하여 시험용액으로 한다. 곡류, 두류 및 견과종실류는 아래와 같은 조작을 따른다. 위의 잔류물에 헥산 15 mL 및 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 아세토니트릴층을 취한다. 헥산층에 헥산포화아세토니트릴 30 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 아세토니트릴층에 합쳐 40℃ 이하에서 날려보낸다. 잔류물을 아세톤에 녹여서 정확히 5 mL로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: 안지름 0.53 mm, 길이 10 m의 모세관 유리 컬럼에 기체크로마토그래프용 메틸실리콘을 1.5 g의 두께로 코팅한 것

나) 주입부 및 검출기 온도: 225～250℃

다) 오븐 온도: 50℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 30℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 170℃에서 1분간 유지하고 다시 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 290℃에서 5분간 유지한다.

라) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 에디펜포스가 약 9분 20초에서 유출하는 유량으로 조정한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.10 플로메토퀸(Flometoquin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플로메토퀸 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 담겨 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.2 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 시험용액을 주입하여 20℃/분의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 300℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) Interface 온도: 280℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로메토퀸 (Flometoquin)	21.6	435.4	435.1	403	3741)	20
				435	376	30
				376	171	30
1) 정량이온

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

플로메토퀸(21.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플로메토퀸을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.11 에톡시퀸(Ethoxyquin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출하고, 탄산나트륨용액으로 pH를 조절한 후 헥산으로 액-액 분배한다. 카본-아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴로 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 카본-아미노프로필 카트리지(carbon amino-propyl cartridge): 카본(500 mg)-아미노프로필(500 mg) 고정상이 상하로 충전 되어있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 10% 탄산나트륨용액 20mL를 넣고 30분 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 흔들어 섞어 추출한다. 추출액을 3,500 rpm에서 약 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 500 mL 용량의 분액깔때기에 포화염화나트륨용액 20 mL와 물 100 mL를 차례로 넣은 후 10% 탄산나트륨용액을 이용하여 pH를 7～9 정도로 조절 한 후, 상부 아세톤 추출액 50 mL를 넣는다. 여기에 헥산 30 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 헥산층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 위 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 헥산층과 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축, 건고하고 잔류물을 메탄올:디클로로메탄(1:99, v/v) 혼합용액 5 mL에 녹인다.

2) 정제
카본-아미노프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 중 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올:디클로로메탄(1:99, v/v) 혼합용액 5 mL를 넣고 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: BHT(buthylatedhydroxytoluene) 50 mg/L 함유한 아세토니트릴과 물(75:25, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1.0 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 여기파장 360 nm, 형광파장 435 nm

바) 주입량: 10 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

에톡시퀸(5.4분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 에톡시퀸을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 물(50:50, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) 분자량 범위: 50～300 m/z

아) Cone voltage: 100 V

자) 분석대상물질 조건

물질명 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
에톡시퀸 (Ethoxyquin)	217.3	217.1	218	160	47
				174	43
				148	29

7.1.3.12 에틸렌디브로마이드(Ethylene dibromide: EDB)

가. 시험법 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 증류시켜 헥산층을 액상분리용 여과지로 여과하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 딘-스타크(Dean-stark) 증류장치

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 50 g을 정밀히 달아 딘-스타크 증류장치의 플라스크에 넣고 이에 물 200 mL, 헥산 10 mL, 실리콘수지 몇 방울 및 비등석 몇 개를 넣어 증류장치에 연결한다. 장치의 환류부에 물 50 mL를 넣고 1시간 가열 환류한다. 식힌 후 환류부의 물을 제거하고 헥산층을 액상분리용 여과지로 여과한다. 다시 환류부 및 각각의 관내벽을 헥산 10 mL로 2회, 다음에 물 10 mL로 2회 씻고 물을 제거한다. 헥산층을 액상분리용 여과지로 여과하고 다시 여과지를 소량의 헥산으로 씻어 앞의 여과액과 합친 후 일정량 으로 하여 시험용액으로 한다.
주) 시료의 전처리 및 시험용액의 측정은 신속하게 한다.

딘-스타크 증류장치

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1.0 mL/분

다) 오븐 온도: 130℃

라) 주입부 온도: 220℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.13 이육-디아이피엔[2,6-DIPN(2,6-Diisopropylnaphthalene)]

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴:에틸아세테이트(50:50, v/v) 혼합용액으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류, 두류 등 건조 건체는 물 10 mL 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴:에틸아세테이트(50:50, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣은 뒤 10분간 흔들어 섞은 후 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 아세토니트릴:에틸아세테이트(50:50, v/v) 혼합용액 5 mL를 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴:에틸아세테이트(50:50, v/v) 혼합용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 1분간 유지한 후 30℃/분의 속도로 180℃까지 승온하고 10℃/분의 속도로 220℃까지 승온하고 다시 40℃/분의 속도로 300℃까지 승온하고 2분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 280℃

마) 인터페이스 온도: 280℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이육-디아이피엔 (2,6-DIPN)	8.3	212.3	212.1	197	1551)	12
				212	155	22
				212	197	18
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

이육-디아이피엔(8.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 이육-디아이피엔을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.14 말릭하이드라자이드(Maleic hydrazide)

7.1.3.14.1 분광광도계를 사용하는 방법

가. 시험법 적용범위
과일류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 하이드라진 증류시켜 증류액을 취하여 분광광도계로 분석한다.

다. 장치

1) 분광광도계

2) 하이드라진 증류장치

A B C D E F G H I	: 수류 : 질소 유입구 : 아스베스토 테이프 : 온도계 : 온도측정관 : 증류플라스크 : 냉각관 : 플라스크 : 유리제냉각조

하이드라진 증류장치

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등 이상인 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 발색시약: p-디메틸 아미노 벤즈알데히드 2 g을 1 N 황산 100 mL에 녹인다.

4) 표준품: 말릭하이드라자이드(특급)를 물로 3회 재결정한다. 사용 시 조제한다.

5) 표준원액: 표준품을 0.1 N 수산화나트륨액에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 5 g을 정밀히 달아 증류플라스크에 넣고 실리콘오일 1 mL, 수산화나트륨 50 g 및 물 40 mL를 넣는다. 온도측정관에 대두유 또는 비점이 높은 기름 1 mL를 넣고 온도계를 넣는다. 상기의 증류플라스크를 가열하여 20초마다 흔들어 주면서 수산화나트륨을 녹인다. 수산화나트륨을 넣은 후 온도가 160℃에 도달할 때까지의 시간이 11～15분이 되도록 가열을 조정하여 온도가 160℃에 도달한 시점에서 가열을 중지하여 방냉한다. 온도가 140℃가 된 시점에서 상기의 증류플라스크의 접합부를 마른 헝겊으로 더러운 곳을 닦아내어 건조시키고 아연 5 g 및 염화제일철 0.5 g을 넣고 즉시 접합부에 그리스를 얇게 발라 하이드라진 증류장치에 부착시킨다. 50 mL 플라스크에 발색시약 4 mL를 넣어 냉각관의 선단을 플라스크의 액 중에 담가 플라스크를 얼음물에서 냉각한다. 질소의 유량을 플라스크에서 매초 3기포가 발생하도록 조정한다. 냉각관도 얼음물을 흘려보낸다. 상기의 증류플라스크를 가열하여 끓기 시작해서 기포가 생길 때 기포는 증류플라스크의 2/3 이상 끓지 않게 가열을 조정한다. 온도가 173℃에 도달한 시점에서 물을 천천히 떨어뜨려 168℃가 된 시점에서 물을 떨어뜨리는 것을 중지한다. 이 조작을 반복하면서 증류하여 증류액 35 mL를 취한다. 염화제일철을 넣으면서 이 조작이 완료될 때까지의 시간이 15～20분이 되도록 조작 및 가열을 조정한다. 증류액이 혼탁할 경우에는 황산을 2 방울 넣어 흔들어 섞는다. 이 증류액에 물을 넣어 정확히 40 mL로 하여 시험용액으로 하고 10분 이내에 사. 정량시험에 따라 정량한다.

바. 시험조작

1) 검량선 작성
말릭하이드라자이드 표준원액을 0.2, 0.4, 0.6, 0.8 및 1 mL를 각각 취해 0.1 N 수산화나트륨액을 넣어 1 mL로 한다. 이를 마. 시험용액의 조제 및 사. 정량시험과 같은 방법으로 조작하여 검량선을 작성한다.

2) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정량시험
발색시약 4 mL에 물을 넣어 40 mL로 한 것을 대조액으로 하여 시험용액에 대하여 파장 430, 460 및 490 nm에 있어서의 흡광도를 측정하여 다음 식에 따라 보정흡광도를 구하여 바. 시험조작의 1) 검량선 작성에 따라 말릭하이드라자이드의 함량을 구한다.

보정흡광도 ＝ B -	A＋C
	2

A: 430 nm에 있어서의 흡광도
B: 460 nm에 있어서의 흡광도
C: 490 nm에 있어서의 흡광도

7.1.3.14.2 액체크로마토그래프를 사용하는 방법

가. 시험법 적용범위
과일류, 채소류, 견과종실류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 물

3) Amberlite XAD-2: 특급 또는 이와 동등한 것

4) 양이온교환수지(200～400메쉬(mesh) Dowex 50W-X8(Bio-Rad)): 12 × 200 mm의 유리관에 0.2 N 수산화나트륨액을 사용하여 양이온교환수지 50%의 현탁용액을 만들어 이 중 6 mL로 충전한다. 여기에 1 N 염산 15 mL를 유출시켜 수지의 형태를 H＋로 만들고 잔류산을 제거하기 위해 충분히 물로 씻어준다. 이 위에 Amberlite XAD-21 g을 충전시키고 물 20 mL로 씻어준다.

5) 음이온 교환수지(50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8): 미리 만든 양이온교환수지 위에 50%의 Dowex 1 현탁액을 4 mL 넣는다.

6) 테트라메틸암모늄 하이드록사이드(TMAH): 특급 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

8) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 50 mg/L가 되게 한다.

9) 표준용액: 표준원액을 이동상에 희석하여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 메탄올 200 mL를 넣어 1분간 흔들어 섞어 추출한 후 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 이 용액을 2～3 mL 정도되게 농축시키고 물로 4 mL로 맞춘다.

2) 정제
이 용액 중 2 mL를 취하여 미리 준비된 교환수지에 옮기고 물로 14 mL되게 용출하여 받는다. 이 용출액을 수산화나트륨으로 pH를 4로 맞추고 전체부피를 15 mL로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: Whatman Partisil SAX 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼: 4.6 mm × 250 mm 또는 이와 동등한 것

다) 이동상: 메탄올과 물(80:20, v/v)의 혼합용액으로서 0.1 M 초산과 TMAH로 pH를 정확히 4.8로 맞춘 것

라) 검출파장: 313 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.15 메토프렌(Methoprene)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴:물(90:10, v/v)의 혼합용액을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 30mL를 넣고 2시간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10～15 g을 넣고 흔들어 섞는다. 정치하여 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨 후 아세토니트닐층을 무수황산나트륨에 통과하여 탈수시킨 후 아세토니트릴을 넣어 100 mL로 정용한다.

2) 정제
‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 8 mL를 취하여 무수황산마그네슘 900 mg과 PSA 150 mg, C18 150 mg이 미리 담겨져 있는 원심분리용 튜브에 넣고 1분간 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 전량 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물을 아세토니트릴로 다시 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 10 mM 인산염 함유한 수용액(90:10, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

바) 검출파장: 265 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

메토프렌

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 메토프렌을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 초산암모늄 및 0.1%(v/v) 포름산 함유 메탄올과 5 mM 초산암모늄 및 0.1%(v/v) 포름산 함유한 수용액(95:5, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) 분자량 범위: 50～400 m/z

아) Cone voltage: 65 V

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
메토프렌 (Methoprene)	310.4	310.2	279	191	13
				237	11
				219	11

7.1.3.16 메틸브로마이드(Methyl bromide)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 에틸렌옥사이드 함유 아세토니트릴 용액으로 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 4% 에틸렌옥사이드 함유 아세토니트릴: 냉각시킨 아세토니트릴 96 mL를 100 mL의 메스플라스크에 넣고 에틸렌옥사이드 가스를 통과시켜 100 mL로 한다.

4) 표준원액: 2-브로모에탄올의 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L(브롬이온으로서)가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 20 g(곡류, 두류는 10 g)을 정밀히 달아 도가니에 넣고 0.2 N 수산화나트륨 용액 5 mL를 넣어 유리봉으로 잘 섞은 후 무수에탄올 10 mL를 천천히 저어가며 넣는다. 이를 hot plate에서 증발 건고하여 탄화시킨 후 마개를 덮어 미리 예열된 회화로에서 회화(500～600℃에서 약 2시간)시킨다. 도가니를 식힌 후 잔류물에 0.6 N 황산 10 mL를 넣고 잘 녹여 100 mL의 메스플라스크에 옮긴다. 다시 도가니를 아세토니트릴 10 mL로 4회 씻고 이 씻은 액은 메스플라스크에 합친다. 이에 4% 에틸렌옥사이드 함유 아세토니트릴 용액 10 mL를 넣고 즉시 마개를 하여 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 15분간 방치한다. 이 액 10 mL를 미리 황산암모늄 2 g을 넣은 25 mL의 실린더에 넣고 15초간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 아세토니트릴층 5 mL를 무수황산나트륨 1 g을 넣은 10 mL의 실린더에 넣고 15초간 강하게 흔들어 섞은 후 하룻밤 방치하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AM-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 20% Ucon oil LB 550X, 10% PEG-20 m, 5% DC-11 및 10% SE-30

나) 컬럼: 안지름 2～4 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

다) 주입부 온도: 220～250℃

라) 오븐 온도: 80～150℃

마) 검출기 온도: 250～300℃

바) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 30～50 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.17 오쏘페닐페놀(Ortho-Phenyl Phenol)

가. 시험법 적용범위
서류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 증류시켜 액-액 분배하고 액상분리용 여과지로 탈수, 여과하고 이를 감압 농축하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-불꽃이온화검출기(GC-FID)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 50 g을 정밀히 달아 500 mL의 둥근바닥플라스크에 넣고 이에 인산 1 mL, 포화염화나트륨용액 120 mL, 실리콘 수지 몇 방울 및 비등석 몇개를 넣어 증류장치에 연결한다(그림). 포집관(200 mL의 분액깔때기)은 미리 헥산 50 mL를 넣어 냉각기의 끝이 잠기도록 하고 40분간 증류한다. 증류 및 분액깔때기를 떼어내고 가볍게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후 물층(하층)은 버린다. 헥산층에 1 N 수산화나트륨액 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 수산화나트륨액층은 다른 분액깔때기에 취한다. 헥산층에 다시 1 N 수산화트륨용액 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 수산화나트륨액층은 앞의 분액깔때기에 합치고 여기에 염화나트륨 15 g 및 인산 10 mL를 넣어 액을 산성으로 하고 헥산 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층은 다른 분액깔때기에 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 헥산층은 앞의 분액깔때기에 합치고 액상분리용 여과지로 탈수, 여과하고 여과지를 소량의 헥산으로 씻은 후 이를 감압 농축하고 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

오쏘페닐페놀 분석용 증류장치

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AM-DMCS) 및 가스크롬 Q 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 기체크로마토그래프용 5% 실리콘 XE-60

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 200～300 cm의 유리관

다) 오븐 온도: 170℃

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 250℃

바) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 20～30 mL/분

사) 수소가스 유량: 20 psi

아) 공기의 유량: 30 psi

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
표준용액 및 시험용액의 일정량을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간은 일치하여야 한다. 다만, 머무름 시간은 필요에 따라서 컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 기체크로마토그래피를 한 결과에 따른다.

아. 정량시험
정성시험 결과 얻어진 크로마토그램상의 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.18 프로파자이트(Propargite)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 프로파자이트 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 3,500 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 50 mg이 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
7.0	0	100
10.0	0	100
11.0	90	10
13.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
프로파자이트 (Propargite)	7.6	350.5	350.1	368	1751)	10
					231	10
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

프로파자이트(7.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 프로파자이트를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.19 피레트린(Pyrethrins)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 피레트린Ⅰ과 Ⅱ, 시네린Ⅰ과 Ⅱ, 자스몰린Ⅰ과 Ⅱ 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 5 g을 정밀히 달아 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣고 시료와 용매가 섞일 수 있도록 수초간 흔든 후, 0.5 N 수산화나트륨을 이용하여 pH를 8.5로 맞춘다. 이후에 진탕기를 이용하여 2분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 6 g, 아세트산나트륨 1.5 g, 세라믹 볼을 넣고 2분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 ×g에서 5분간(두류의 경우 층분리가 충분하지 않으면 원심분리 시간을 늘림) 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 원심분리를 해서 얻은 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 여과액 100 μL에 포름산암모늄 100 mM을 함유한 완충용액(포름산암모늄 100 mM을 함유한 수용액을 조제한 후 포름산 용액을 이용하여 약 pH 4.5로 맞춤) 600 μL와 아세토니트릴 300 μL를 합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	99	1
1.0	99	1
3.0	20	80
4.0	20	80
6.0	0	100
16.0	0	100
16.5	99	1
22.0	99	1

다) 이동상 유량: 0.15 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
시네린Ⅰ (CinerinⅠ)	9.8	316.4	316.2	317	1071)	23
					149	13
시네린Ⅱ (CinerinⅡ)	8.7	360.4	360.2	361	1071)	21
					149	17
자스몰린Ⅰ (JasmolinⅠ)	10.2	330.5	330.2	331	1631)	13
					121	27
자스몰린Ⅱ (JasmolinⅡ)	9.1	374.5	374.2	375	1631)	15
					107	37
피레트린Ⅰ (PyrethrinⅠ)	9.8	328.4	328.2	329	1611)	13
					143	23
피레트린Ⅱ (PyrethrinⅡ)	8.8	372.4	372.2	373	1611)	15
					143	23
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 피레트린Ⅰ(9.8분), B: 피레트린Ⅱ(8.8분), C: 시네린Ⅰ(9.8분),

D: 시네린Ⅱ(8.7분), E: 자스몰린Ⅰ(10.2분), F: 자스몰린Ⅱ(9.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인 시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 피레트린, 시네린, 자스몰린을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.20 펜뷰타틴옥사이드(Fenbutatin Oxide)

가. 시험법 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤:초산 혼합용액으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 삼각플라스크에 넣고 아세톤:초산(100:1, v/v) 혼합용액 80 mL를 넣어 30분간 흔들어 섞어 추출한 후 여과지를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 씻어 위의 여과액과 합한다. 합친 여과액을 1,000 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 400 mL 및 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들고 난 후 정치하여 층을 분리시킨다. 유기용매 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시키고 40℃에서 감압 농축 한다. 건고물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 11 mm의 컬럼관에 실리카 5 g과 무수황산나트륨을 1 cm 높이로 충전 시키고 디클로로메탄 25 mL를 유출시켜 버린다. 디클로로메탄 시료용액 10 mL를 넣은 후 여분의 디클로로메탄 5 mL로 유출시켜 버린다. 컬럼에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 디클로로메탄:초산(100:1, v/v) 혼합용액 60 mL를 넣어 용출하여 받는다. 용출액을 40℃에서 감압 농축하고 건고물은 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴:메탄올:1 mM 염산(50:35:15, v/v/v) 혼합용액 10 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.9 mm × 150 mm, 4.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 염화나트륨이 함유된 아세토니트릴과 메탄올, 1 mM 염산(50:35:15, v/v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1.0 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 검출파장: 214 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

펜뷰타틴옥사이드(12.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.21 트리포린(Triforine)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 등 건조 시료의 경우 물 5 mL를 넣고 20분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞은 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산삼나트륨 · 2수화물 1 g,  구연산이나트륨 · 1.5수화물 0.5 g을 넣고, 1분간 강하게 흔들어 섞고, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 1.5 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
2.0	70	30
4.0	10	90
5.0	10	90
7.0	70	30
10.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) 분자량 범위: 100～500 m/z

다) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Collision energy, eV)
트리포린 (Triforine)	4.1	435.0	434.0	435	390	15
					215	30

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

트리포린(4.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 트리포린을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.22 디메티핀(Dimethipin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류는 물 5 mL, 두류는 물 10 mL를 첨가 후 20분간 방치) 1% 아세트산 함유 아세토니트릴을 10 mL 넣어 1분간 흔들어 섞는다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣고 10분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 450 mg과 PSA 150 mg, C18 150 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 3 mL를 넣고 1분간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.2 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/분의 속도로 300℃까지 승온하고 3분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 280℃

마) 이온원 온도: 230℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
디메티핀 (Dimethipin)	17.1	210.3	210.0	118	581)	10
				124	76	10
				124	59	40
1) 정량이온

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

디메티핀(17.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 디메티핀을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.23 비페녹스(Bifenox)

가. 시험법의 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣은 후 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세톤 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 내려 앞의 여과액과 합한다. 합한 여과액을 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산:디클로로메탄(80:20, v/v) 혼합용액 100 mL를 차례로 넣은 후 5분 이상 흔들어 섞는다. 정치하여 층을 분리시킨 후 유기용매층을 무수황산나트륨층에 통과, 탈수하여 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고한다. 잔류물에 아세토니트릴포화헥산 40 mL를 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴다. 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 분액깔때기에 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨다. 분리된 아세토니트릴층을 125 mL 용량의 감압농축플라스크에 옮기고, 분액깔때기에 남은 헥산 용액에 다시 헥산포화아세토니트릴 40 mL를 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨 2 g을 차례로 충전한 후 헥산 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 헥산 10 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산:디클로로메탄(90:10, v/v) 혼합용액 150 mL과 헥산:디클로로메탄(60:40, v/v) 혼합용액 150 mL를 차례로 넣어 유출시켜 버린다. 계속하여 디클로로메탄:헥산:아세토니트릴(50:49.5:0.5 v/v/v) 혼합용액 150 mL를 넣어 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산 10 mL를 넣어 잘 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-1(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 10 mL/분

다) 주입부 온도: 250℃

라) 오븐 온도: 140℃에서 시험용액을 주입하고 4℃/분의 비율로 온도를 240℃까지 상승시키고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입부: 직접주입법

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

비페녹스(19.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 비페녹스를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-1MS(50 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 2 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 220℃까지 상승시켜 3분간 유지한 후 다시 3℃/분의 비율로 240℃까지 상승시키고 20℃/분의 비율로 280℃까지 상승시켜 15분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 300℃

바) 이온원 온도: 230℃

사) 주입 방법: Split mode(30:1)

아) 주입량: 1 μL

자) 분자량 범위: 100～400 m/z

차) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
비페녹스 (Bifenox)	21.1	342.1	341.0	311, 341, 343

7.1.3.24 피리프록시펜(Pyriproxyfen)

가. 시험법 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴:물(90:10, v/v) 혼합용액에 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 디클로로메탄:헥산(10:90, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 1분 이상 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후, 디클로로메탄:헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 건식 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 헥산 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄:헥산(25:75, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 에틸아세테이트:헥산(5:95, v/v) 혼합용액 150 mL를 넣어 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 아세토니트릴:물(90:10, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 물(85:15, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 검출파장: 230 nm

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

피리프록시펜(8.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 피리프록시펜을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 5 mM 아세트산암모늄 함유 아세토니트릴과 5 mM 아세트산암모늄 함유 물(85:15, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

바) 주입량: 5 μL

사) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
피리프록시펜 (Pyriproxyfen)	5.4	321.4	321.1	322

7.1.3.25 몰리네이트(Molinate)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 디클로로메탄과 헥산의 혼합액으로 액-액 분배하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 내부표준원액: 디메틸엘로우(Dimethyl yellow[4-(dimethoxyamino) azobenzene)]) 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 에틸아세테이트에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석하고 내부표준물질의 농도는 0.4 mg/L가 되도록 혼합하여 에틸아세테이트에 조제한다.

6) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한 후 분액깔때기에 옮기고 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣은 후 디클로로메탄:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 하층 수용액층을 버리고 유기용매층을 취한다. 유기용매층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수하고 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌글리콜 0.5 mL를 넣고 30℃ 이하에서 약 3 mL가 남을 때까지 감압 농축하고 질소가스를 사용하여 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 유리컬럼관에 130℃에서 하룻밤 가열하여 탈수시킨 플로리실 5 g을 충전하고, 그 위에 무수황산나트륨 약 2 g을 건식 충전한 후 헥산 25 mL를 넣어 상단에 소량의 용액만이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 ‘1) 추출’에서 얻은 헥산용액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유량으로 흘려보낸 후 여분의 헥산 5 mL로 용기 및 컬럼 벽면을 씻어 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 아세톤:헥산(2:98, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 용출하고, 용출액에 아세톤에 녹인 1% 디에틸렌글리콜 0.5 mL를 넣은 후 30℃ 이하에서 약 3 mL가 남을 때까지 농축한 후 이어서 질소가스를 사용하여 건고한다. 건고한 잔류물에 내부표준물질인 0.4 mg/L의 디메틸엘로우(dimethyl yellow)가 함유된 에틸아세테이트를 넣어 최종 부피가 5 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 2 mL/분

다) 오븐 온도: 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
농도별로 조제한 검량용 표준용액(내부표준물질 포함)을 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상에서 각 대상성분 피크의 면적 또는 높이의 내부표준물질에 대한 비율을 계산하여 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

A: 몰리네이트(13.8분), B: 디메틸 옐로우(20.8분, 내부표준물질)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 몰리네이트를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 2 mL/분

다) 오븐 온도: 50℃에서 시험용액을 주입한 후 1분간 유지하고 10℃/분의 비율로 온도를 250℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 인터페이스 온도: 290℃

바) 분자량 범위: 100～350 m/z

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
몰리네이트 (Molinate)	13.6	187.3	187.1	126, 187

7.1.3.26 사이로마진(Cyromazine)

가. 시험법 적용범위
서류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 양이온교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 양이온교환수지: 200～400 메쉬(mesh) Dowex 50W-X4(Bio-Rad)

4) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 메탄올을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 달아 500 mL의 둥근바닥플라스크에 넣은 후 메탄올:물(9:1, v/v) 혼합용액 200 mL를 넣는다. 위의 플라스크에 환류냉각관를 부착하고 70℃에서 2시간 동안 환류시킨다. 환류가 끝난 후 용액을 실온으로 냉각시키고 유리깔때기를 통해 잔류물을 여과시킨다. 이 때 여과지를 사용하여서는 안된다(경우에 따라 여과지 제조공정에서 사이로마진의 대사산물인 멜라민(Melamine)이 함유될 수 있음). 여과된 추출액 중 5 mL를 취하여 500 mL 둥근플라스크에 넣고 감압 농축기로 40℃를 유지하면서 수용액만 남을 때까지 농축시킨다. 남은 수용액은 분액깔때기에 옮겨 0.1 N 염산 100 mL와 디클로로메탄 50 mL를 넣고 마개를 막은 후 1분간 강하게 흔들어준다. 정치시켜 층이 완전히 분리되면 하층(디클로로메탄층)을 제거하고 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위의 과정을 반복한다. 디클로로메탄이 제거된 수용액에 헥산 50 mL를 넣고 흔들어 층을 분리시킨 후 하층(수용액층)을 양이온교환수지 2 mL가 충전된 Econo컬럼(폴리프로필렌, 0.7 × 4 cm Bio-Rad #731-1110)에 흘려준다(사용전에 물 10 mL로 세척한다).

2) 정제
Econo 컬럼을 감압장치에 연결한 후 아세토니트릴:물(90:10, v/v) 혼합용액 50 mL, 메탄올:물(90:10, v/v) 혼합용액 50 mL 그리고 메탄올 10 mL를 차례로 흘려주고 감압장치를 제거한다. 위의 컬럼에 수산화암모늄용액:메탄올(1:19, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣어 사이로마진을 용출하여 받아 감압 농축기로 농축, 건조시킨다. 위의 잔류물(residue)을 소량의 메탄올로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 검출파장: 214 nm

나) 컬럼: NH2계 컬럼(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

다) 이동상: 아세토니트릴과 물(90:10, v/v)의 혼합용액

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.27 아닐라진(Anilazine)

가. 시험법 적용범위
곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올성 수산화나트륨액으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD) 또는 질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 물

3) 셀라이트 545(celite 545), 실리카 60(silica 60, 0.2～0.5 μm)

4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

5) 메탄올성 수산화나트륨액: 메탄올을 사용하여 0.5 M 수산화나트륨액으로 조제한다.

6) 표준품(Anilazine): 아닐라진 1 g을 정확히 달아 플라스크에 넣고 이에 메탄올성 수산화나트륨액 50 mL를 넣어 녹인 후 실온에서 약 1시간 동안 저어 섞는다. 이후 용액을 증발시키고 잔류물을 디클로로메탄과 아세톤 혼합용액으로 녹여 물로 2～3회 세척하고 유기층을 분리하여 건조시킨 후 40℃에서 농축하여 결정을 얻어낸다. 이것을 사이클로헥산으로 2회 정도 재결정하여 표준품으로 사용한다(m.p. 102℃).

7) 표준원액: 아닐라진의 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 100 mg/L가 되게한다.

8) 표준용액: 표준원액을 에틸아세테이트를 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 달아 메탄올성 수산화나트륨액 200 mL를 넣고 잘 섞은 후 실온에서 1시간 방치한다. 이후 3분간 강하게 흔들고 여과한 후 잔류물(residue)을 메탄올 100 mL로 세척하여 위의 용액에 혼합한다. 이 용액을 55℃에서 감압 농축기로 증류하여 메탄올을 제거한다. 수용액을 분액깔때기에 옮기고 15% 염화나트륨용액 200 mL를 넣은 후 디클로로메탄:아세톤(4:1, v/v) 혼합용액 150 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 물층에 다시 디클로로메탄:아세톤(4:1, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이 한 후 디클로로메탄:아세톤(4:1, v/v) 혼합용액을 합쳐 추출한다. 추출액을 무수황산나트륨으로 건조시키고 40℃에서 농축, 건고하고 잔류물을 톨루엔 10 mL에 녹인다.

2) 정제
직경 1.5 cm의 컬럼에 실리카 15 g과 무수황산나트륨 5 g을 톨루엔으로 충전시킨 후 ’1)추출’로부터 얻은 톨루엔 10 mL를 충전물질에 흡착시킨다. 이후 플라스크를 10 mL의 사이클로헥산으로 세척하여 컬럼에 흘리고 사이클로헥산 30 mL를 더 흘려준다. 이후 사이클로헥산:에틸아세테이트(85:15, v/v) 혼합용액 50 mL를 유출시켜 버리고 사이클로헥산:에틸아세테이트(70:30, v/v) 혼합용액 100 mL로 디메톡시아닐라진을 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃에서 농축․건조하여 잔류물을 에틸아세테이트 일정량에 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 충전컬럼(packed column)

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMC 및 가스크롬 Q(60～80 메쉬(mesh), 80～100 메쉬(mesh)) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 100% Methyl siloxane, 50% Phenyl 50% Methyl siloxane, 50% Cyanopropylphenyl 50% Methyl siloxanex 2% DEGS(Stabilized)를 3～5%로 입힌 것 또는 이와 동등한 것(7. 식품 중 잔류농약 시험법, 7.1.2.1의 자. 분석 대상 및 상세조건 중 ｢사용이 가능한 동등한 컬럼｣ 참조)

(3) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관

나) 모세관 컬럼(capillary column): 0.2～0.32 또는 0.53 mm의 안지름을 가지는 30 m의 모세관 유리 컬럼에 적합한 고정상액을 화학결합 시키거나 cross-link 코팅한 것

다) 주입부 및 검출기의 온도: 각각 250℃, 300℃

라) 오븐 온도: 처음 100℃에서 시료용액을 주입한 후 2분간 유지하고 20℃/분의 비율로 230℃까지 상승시킨 후 20분간 유지한다.

마) 이동상 가스 및 유량: 디메톡시아닐라진이 약 4분에서 유출하는 속도로 질소(N2)의 유량을 조절한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.28 이미녹타딘(Iminoctadine)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 10% 염산구아니딘 함유 80% 메탄올 용액으로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 이미녹타딘 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): Divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone Copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 이미녹타딘은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험 과정에서 폴리프로필렌 재질의 용기를 사용한다. 또한 멤브레인 필터에 흡착할 가능성이 있으므로 정제 과정에서 필터 사용을 생략한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 10% 염산구아니딘 함유 80% 메탄올 용액 10 mL를 넣은 뒤 15분간 강하게 흔들어 섞고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 전량을 취하는 방법으로 2회 반복 추출하여 상층액을 별도의 용기에 합한다. 취한 상층액에 10% 염산구아니딘 함유 80% 메탄올 용액을 넣어 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 5 mL와 물 5 mL를 차례로 넣고 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 3 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 0.1%(v/v) 포름산 함유 80% 메탄올 용액 3 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 6 mL로 맞춘 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 등등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
4.0	5	95
7.0	5	95
7.5	95	5
11.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이미녹타딘 (Iminoctadine)	3.7	355.6	355.3	179	1001)	19
					170	23
					156	23
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

이미녹타딘(3.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 이미녹타딘을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.29 에테폰(Ethephon)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 에틸아세테이트로 추출한 후 메틸화 반응을 거쳐 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 증발건고 시킨 후 마. 시험용액의 조제 2) 메틸화에 따라 실험하고 아세톤으로 적절한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 1 N 염산 10 mL를 넣어 산성화 시킨 후 무수황산나트륨 70 g을 넣어 탈수하고 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞어 추출한다. 추출액을 부흐너깔때기로 흡인 여과한 후, 에틸아세테이트 20 mL로 용기 및 잔류물을 씻어 앞의 여과액과 합하여 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축 건고물을 아세토니트릴 50 mL에 녹인 후 250 mL 분액깔때기에 옮기고, 헥산 30 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다.

2) 메틸화
농축에 의해 얻어진 건고물은 메탄올 4 mL를 넣어 녹인 후 2 mL를 시험관에 취한다. 여기에 2 N-트리메틸실릴다이아조메탄 용액 1 mL를 넣고 실온에서 30분간 메틸화한다. 메틸화에 의해 얻어진 용액을 100 mL 분액깔때기에 옮기고, 5% 염화나트륨 용액 30 mL 및 헥산 25 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 분리된 수용액층을 취한다. 수용액에 디클로로메탄 25 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞은 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는다. 이 과정을 1회 반복하여 앞서 받은 디클로로메탄층과 합한 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 최종적으로 농축에 의해 얻어진 잔류물은 아세톤 2 mL로 녹여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 5℃/분의 비율로 90℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지하고 10℃/분의 비율로 150℃까지 온도를 상승시켜 10분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

에테폰(12.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 에테폰을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 시험용액을 주입하고 10℃/분의 비율로 온도를 180℃로 상승시켜 1분간 유지하고 30℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 2분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 인터페이스 온도: 250℃

바) 분자량 범위: 50～650 m/z

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
에테폰 (Ethephon)	8.4	144.5	145.0	109, 113

7.1.3.30 이산화황(Sulfur dioxide)
식품공전 제8. 일반시험법 3.5 아황산, 차아황산 및 그 염류에 따른다.

7.1.3.31 디아펜티우론(Diafenthiuron)

가. 시험법 적용범위
과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴 및 탄산칼륨용액으로 추출한 후 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 40 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 아세토니트릴 70 mL 및 0.8% 탄산칼륨용액 25 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞어 추출 후 여과지 및 여과보조제(celite 545)를 깔은 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 다음 여과액에 아세토니트릴을 넣어 150 mL가 되도록 한다. 이중에서 30 mL를 125 mL 분액깔때기에 옮겨 이에 포화염화나트륨용액 4 mL, 물 36 mL 및 헥산 20 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞고 정치하여 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 헥산층을 앞의 헥산에 합쳐 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 무수황산나트륨을 헥산 약 20 mL로 씻은 후 이에 0.2% mercapto ethanol 1 mL 및 아세토니트릴 1 mL를 넣어 35℃ 이하에서 감압 농축하여 약 1 mL로 농축한다. 이에 헥산:t-butyl methylether(1:1, v/v) 혼합용액 2 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
미리 아미노프로필 카트리지에 헥산:t-butyl methylether(9:1, v/v) 혼합용액 10 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 헥산:t-butyl methylether(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 용출하여 받고, 이 용출액에 아세토니트릴 3 mL를 넣어 35℃ 이하에서 감압 농축한다. 여기에 아세토니트릴 5 mL로 녹여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: 컬럼크로마토그래피용 ODS(C18) 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼: 안지름 4.6 mm, 길이 250 mm의 스테인리스관

다) 검출파장: 256 nm

라) 이동상: 메탄올과 물(85:15, v/v)의 혼합용액

마) 이동상 유량: 디아펜티우론이 약 6～8분에서 유출하는 유량으로 조정한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.32 디티아논(Dithianon)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 4% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 4% 아세트산 함유 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 4 N 염산(곡류 및 두류는 10 mL 넣은 후 20분간 방치하고 서류, 과일류 및 채소류는 1 mL 넣는다)을 넣는다. 여기에 4% 아세트산 함유 아세토니트릴을 25 mL 넣어 10분간 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들어 섞는다. 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
C18 500 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 원심분리 상층액 중 5 mL와 4% 아세트산 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.4%(v/v) 아세트산(acetic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.4%(v/v) 아세트산(acetic acid)과 40% 이소프로판올 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
4.0	70	30
7.0	10	90
10.5	10	90
10.6	80	20
13.5	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

나) Capillary voltage: 2.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
디티아논 (Dithianon)	7.5	296.3	295.9	296	2641)	22
					164	28
					238	23
1) 정량이온

3) 표준품 크로마토그램

디티아논(7.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 디티아논을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.33 피메트로진(Pymetrozine)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리

시료 중 피메트로진을 2% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE (dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 피메트로진 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 검량선용액: 표준용액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

6) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 2% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 분리된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 함유한 수용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
0.5	90	10
2.0	60	40
5.0	10	90
7.0	10	90
7.1	90	10
10.0	90	10

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 함유한 메탄올

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 1 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

1) 정량이온

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피메트로진 (Pymetrozine)	3.2	217.2	217.1	218	1051)	22
					78	36
					51	36

3) 검량선 작성

표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품의 크로마토그램

피메트로진(3.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 피메트로진을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.34 플루오로이미드(Fluoroimide)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 2% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 2% 아세트산이 함유된 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: C18(octadecyl bonded silica), GCB(Graphitized Carbon Black)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 4 N 염산(곡류 및 두류는 10 mL를 가한 후 10분간 방치하고 서류, 과일류 및 채소류는 2 mL를 넣는다)을 넣는다. 여기에 2% 아세트산 함유 아세토니트릴을 20 mL 넣어 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 흔들어 섞은 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들어 섞는다. 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
새로운 15 mL 용량 원심분리관에 C18 500 mg, GCB 40 mg을 넣고 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 원심분리 상층액 중 5 mL와 2% 아세트산 함유 아세토니트릴 5 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C8계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.5	90	10
3.0	10	90
5.0	10	90
5.1	90	10
8.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루오로이미드 (Fluoroimide)	4.2	260.1	258.9	260	1101)	31
					83	43
					168	24
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 정량이온의 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

플루오로이미드(4.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플루오로이미드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.35 할록시포프(Haloxyfop)

가. 시험법 적용범위
서류, 두류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 메틸화하고 플로리실 카트리지로 정제하여 기체 크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD) 및 질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(florisil cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 실리카 카트리지(silica cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액: 할록시포프와 할록시포프-메틸 표준품을 각각 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 유도체시약: 14% Borontrifluoride(BF3) 함유 메탄올 용액

8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 0.2 N 황산 20 mL를 넣어 10분간 방치한 다음 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과보조제가 깔린 부흐너깔때기로 감압 여과한 후 잔류물과 용기를 아세톤으로 씻고 여과하여 위의 여과액과 합한 다음 40℃ 이하에서 아세톤이 없어질 때까지 감압 농축한다. 농축액을 250 mL 분액깔때기에 옮기고 물 10 mL, 6 N 황산 3 mL, 포화염화나트륨 용액 10 mL와 디클로로메탄 50 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 다음 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 취한다. 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 반복한 후 디클로로메탄층을 합한다. 디클로로메탄층에 1 N 수산화나트륨 용액 10 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 디클로 로메탄층(할록시포프-메틸 시험용)과 수산화나트륨 용액층(할록시포프 시험용)을 분리하고다시 1 N 수산화나트륨 용액 5 mL를 넣어 반복한 다음 디클로로메탄층과 수산화나트륨층을 각각 합한다. 디클로로메탄층은 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려보낸 다음 일정량의 헥산에 녹여 시험용액으로 한다. 수산화나트륨 용액층은 분액깔때기로 옮긴 후 6 N 황산 5 mL를 넣어 잘 혼합하고 에틸에테르 10 mL로 2회 추출한 다음 에틸에테르층을 취하여 탈수, 여과하고 메탄올 1 mL에 녹여 메틸화(methylation)한다.

2) 메틸화 조작
할록시포프 분석을 위하여 상기의 용액이 들어있는 플라스크에 14% BF3 함유 메탄올 용액 1 mL를 가한 다음 마개를 막고 80℃에서 5분간 반응시킨 후 방치하여 냉각시킨다. 이어서 5% 황산나트륨 용액 10 mL와 물 5 mL를 가한 후 헥산 20 mL로 2회 추출하여 무수황산나트륨으로 탈수시킨 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 일정량의 아세톤:헥산(1:9, v/v) 혼합용액에 녹인다.

3) 정제
미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL와 에틸아세테이트:헥산(6:94, v/v) 혼합용액 5 mL로 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 위의 녹인 액을 넣고 1～2 방울/초의 속도로 에틸아세테이트:헥산(6:94, v/v) 혼합용액 20 mL로 용출하여 받아 질소가스 또는 공기를 사용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물은 일정량의 헥산에 녹여 시험용액으로 한다. 황화합물을 함유하는 시료일 경우 미리 실리카 카트리지에 헥산 5 mL와 헥산:에틸아세테이트(7:3, v/v) 혼합용액 5 mL로 활성화한 후 위의 녹인 액을 넣고 헥산:에틸아세테이트(7:3, v/v) 혼합용액 20 mL로 용출하여 받아 질소가스 또는 공기를 사용하여 용매를 날려보낸다. 잔류물은 일정량의 아세톤:헥산(1:9, v/v) 혼합용액으로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 컬럼(30 m × 0.2～0.53 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 260℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.36 메탐-소듐(Metam-sodium)

가. 시험법 적용범위
채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 EDTA(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid) 완충용액으로 추출한 후 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 마. 시험용액의 조제에 따라 실험하고 디이소프로필에테르(diisopropyl ether)로 혼합, 희석하여 사용한다.

4) 유도체시약: 메틸브로모아세테이트(methylbromoacetate)는 특급 또는 이와 동등한 것

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 20 g을 용기에 정밀히 달아 0.05 M EDTA 완충용액(pH 7) 170 mL와 메틸브로모아세테이트 1 mL를 넣어 20초간 빠르게 흔들어 섞고 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액을 500 mL 비커에 옮겨 자석교반기에서 5분간 교반한 다음 2 M 염산으로 pH 4가 되도록 맞춘 후 실온에서 90분간 교반시킨다. 이를 분액깔때기에 옮겨 디이소프로필에테르 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 후 디이소프로필에테르층을 취한다. 다시 물층에 디이소프로필에테르 100 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 위의 디이소프로필에테르층에 합한 다음 무수황산나트륨으로 탈수시킨다. 여기에 5% 에틸렌글리콜 함유 아세톤 1 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 날려버리고 디이소프로필에테르로 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-17 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 280℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.37 비스피리박소듐(Bispyribac sodium)

가. 시험법 적용범위
곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 유도체화하고 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려버린 후 마. 시험용액의 조제 2) 유도체화에 따라 실험하고 벤젠으로 적절한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

6) 유도체시약: 트리메틸실릴디아조메탄(trimethylsilyl diazomethane)은 특급 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 용기에 취하고 아세토니트릴:물(8:2, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액은 분액깔때기에 옮겨 물 400 mL, 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 헥산 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 후 헥산층을 버린다. 다시 물층에 헥산 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 제거한다. 물층에 1 N 염산 1 mL와 디클로로메탄 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 취하고, 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 디클로로메탄층을 합한다. 디클로로메탄층은 무수황산나트륨으로 탈수하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 모두 날려버린다. 잔류물은 에틸아세테이트 2 mL에 녹인다.

2) 유도체화
위의 녹인 액에 에틸에테르:메탄올(8:2, v/v) 혼합용액 1 mL와 트리메틸실릴디아조메탄 0.5 mL를 넣고 마개로 밀봉한 후 실온에서 1시간 방치한다. 반응이 완료된 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물은 벤젠 10 mL로 녹인다.

3) 정제
미리 20 mL의 벤젠으로 활성화한 플로리실 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 벤젠 20 mL로 유출시켜 버린다. 카트리지를 벤젠:에틸아세테이트(8:2, v/v) 혼합용액 30 mL로 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물은 질소가스를 사용하여 완전히 건조시킨 후 벤젠에 녹여서 일정량으로 한 다음 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 280℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.38 아시벤졸라-에스-메틸(Acibenzolar-S-methyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출하고 염산을 이용하여 디클로르메탄으로 산-염기 분배, 추출한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아시벤졸라-산 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(곡류는 20 g, 채소류 및 과일류 25 g)를 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣은 후 혼합하여 2시간 방치), 물 16 mL와 1 N 수산화나트륨 용액 4 mL를 넣어 60℃에서 1시간 동안 반응하여 공기 중에서 상온까지 식힌 후 메탄올 100 mL, 염화칼슘 2 g을 넣어 1시간 동안 강하게 흔들어 섞는다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 20 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합치고 메탄올을 이용하여 150 mL로 맞춘다. 이 중 60 mL를 취하여 분액깔때기에 옮겨 포화염화나트륨 용액 50 mL, 디클로르메탄 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로르메탄층을 버리는 과정을 2회 반복한다. 수용액 층에 1 N 염산 20 mL, 디클로르메탄 100 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물에 아세토니트릴 2 mL를 넣어 녹인 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 아세토니트릴과 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 수용액(20:80, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 235 nm

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

아시벤졸라-산(9.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아시벤졸라-산을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴과 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액(20:80, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) 분자량 범위: 50～500 m/z

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아시벤졸라-산 (Acibenzolar-acid)	3.8	180.2	179.9	181

7.1.3.39 테클로프탈람(Tecloftalam)

가. 시험법 적용범위
곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 실리카 카트리지(silica cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 용기에 취하고 아세톤 100 mL를 넣어 추출한 후 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 잔류물은 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 후 분액깔때기로 옮겨 5% 염화나트륨용액 200 mL, 에틸아세테이트 100 mL를 넣고 5분간 흔들어 섞은 다음 에틸아세테이트층을 취한다. 물층에 다시 에틸아세테이트 100 mL를 넣고 위와 같이 추출하여 에틸아세테이트층을 합한 후 무수황산나트륨으로 탈수하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 옮기고, 다시 헥산포화아세토니트릴 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 다음 위의 아세토니트릴층에 합한다. 여기에 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 후 아세토니트릴층을 취한 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 에틸아세테이트 1 mL에 녹이고 여기에 무수초산 1 mL를 넣은 후 유리마개를 하여 50℃에서 1시간 가열한다. 가열이 끝난 후 5% 염화나트륨 용액 50 mL와 헥산 50 mL를 이용하여 분액깔때기로 옮기고 5분간 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 헥산층과 합한다. 헥산층은 무수황산나트륨으로 탈수하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버리고 잔류물은 헥산 1 mL에 녹인다.

2) 정제
미리 헥산 10 mL로 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 벤젠:헥산(1:1, v/v) 혼합용액 12 mL로 용출하여 받아 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산에 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.2～0.53 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1～10 mL/분

다) 오븐 온도: 200℃에서 5분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 6분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.40 포세틸-알루미늄(Fosetyl-aluminium)

가. 시험법 적용범위
서류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 물로 추출한 후 옥타데실 카트리지로 정제하고 유도체화 반응을 거쳐 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 옥타데실 카트리지(octadecyl cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 플라스크에 넣고 마. 시험용액의 조제 3) 유도체화에 따라 실험하고 이소프로판올로 적절한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

6) 유도체시약: 트리메틸실릴디아조메탄(Trimethylsilyl diazomethane)은 특급 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 물 70 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액에 물을 넣어 100 mL로 맞춘 후 이 가운데 10 mL(시료 5 g 상당)를 정밀하게 취해 40℃ 이하에서 감압 농축하여 2 mL 정도가 남을 때까지 날려버린다.

2) 정제
미리 이소프로판올:물(1:9, v/v) 혼합용액 10 mL와 물 10 mL로 활성화한 옥타데실 카트리지에 위의 농축액을 넣고 물 10 mL로 용출하여 받는다. 용출액은 40℃ 이하에서 감압 농축하여 약 2 mL 정도가 남을 때까지 날려버린다.

3) 유도체화
위의 잔류물을 이소프로판올:1% 황산용액(90:10, v/v) 혼합용액 5 mL로 녹여 질소가스를 불어넣으면서 트리메틸실릴디아조메탄 5 mL를 첨가해 실온에서 5분간 반응시킨다. 반응액은 40℃ 이하에서 감압 농축하여 모두 날려버리고 잔류물은 이소프로판올로 녹여서 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: HP-INNOWAX(10 m × 0.53 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 270℃

마) 검출기 온도: 270℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.41 프로파퀴자포프(Propaquizafop)

가. 시험법 적용범위
서류, 두류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil) 및 실리카 카트리지(silica cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세톤을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(두류는 20 g을 달아 물 40 mL를 넣어 2시간 방치) 50 g을 달아 용기에 취하고 아세톤:물(8:2, v/v) 혼합용액 150 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한 후 잔류물은 다시 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 다음 분액깔때기에 옮긴다. 여기에 물 350 mL, 포화염화나트륨 용액 20 mL, 헥산 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 헥산층을 위의 헥산층에 합한 후 무수황산나트륨으로 탈수하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매가 약 50 mL 정도 남을 때까지 날려버린다. 잔류용매는 분액깔때기로 옮겨 헥산포화아세토니트릴 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 아세토니트릴층을 다른 분액깔때기에 취한 다음 헥산층에 다시 헥산포화아세토니트릴 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 아세토니트릴층을 위의 아세토니트릴층에 합한다. 이 아세토니트릴층에 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 헥산층은 버리고 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산 2 mL로 녹인다.

2) 정제

가) 미리 헥산 10 mL로 활성화한 플로리실 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 헥산:에틸아세테이트(95:5, v/v) 혼합용액 5 mL로 유출하여 버린 후 다시 헥산:에틸아세테이트(90:10, v/v) 혼합용액 12 mL로 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산에 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

나) 미리 헥산 10 mL로 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 헥산:에틸아세테이트(85:15, v/v) 혼합용액 12 mL로 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산에 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.
* 주: 황화합물이 다량 함유된 시료인 경우 가)와 나)의 방법을 모두 사용한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-1 캐필러리 컬럼(30 m × 0.2～0.32 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1～10 mL/분

다) 오븐 온도: 250℃에서 8분간 유지한 후 5℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 6분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.42 하이멕사졸(Hymexazol)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g(곡류는 10 g에 물 40 mL를 넣고 2시간 방치)을 달아 용기에 취한 후 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 추출한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액에 25% 탄산칼륨용액 1 방울을 넣고 30℃ 이하에서 감압 농축하여 약 20 mL가 남을 때까지 용매를 날려버린다. 잔류물에 물 20 mL, 염화나트륨 7 g, 탄산수소나트륨 1 g을 넣고 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 다음 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 버린다. 물층에 다시 디클로로메탄 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 디클로로메탄층을 제거한다. 물층에 다시 에틸에테르 100 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 디클로로메탄층을 버린다. 물층에 2 M 염산을 넣어 pH를 2～3이 되도록 조정하고 에틸에테르 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 에틸에테르층을 취하고 다시 물층에 에틸에테르 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 위의 에틸에테르층에 합한다. 에틸에테르층은 무수황산나트륨으로 탈수시키고 2% 에틸렌글리콜 함유 아세톤 1 mL를 넣어 30℃ 이하에서 감압 농축하여 모두 날려버리고 잔류물은 아세톤에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-WAX 캐필러리 컬럼(10 m × 0.53 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 150℃에서 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 180℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 270℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.43 다조멧(Dazomet)

가. 시험법 적용범위
과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 증류시켜 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

2) 딘-스타크(Dean-stark) 증류장치

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 메틸이소티오시아네이트(MITC; methyl isothiocyanate) 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 표준원액을 에틸아세테이트에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

4) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

딘-스타크 증류장치

마. 시험용액의 조제
시료 50 g을 딘-스타크 증류플라스크에 정밀히 달아 넣고 물 200 mL와 에틸아세테이트(또는 헥산) 10 mL, 실리콘수지 몇 방울 및 비등석을 넣어 증류장치에 연결하여 1시간 동안 가열환류한다. 장치를 식힌 후 에틸아세테이트(또는 헥산)층을 분리하여 취한다. 분리한 에틸아세테이트에 염화나트륨 3 g을 넣어 2분간 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 에틸아세테이트층을 취하고 무수황산나트륨으로 탈수하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-1 캐필러리 컬럼(15 m × 0.53 mm)이나 HP-20 m 캐필러리 컬럼(50 m × 0.25 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 60～140℃

라) 주입부 온도: 220～250℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량하고 다조멧의 최종 잔류량은 MITC의 잔류량에 환산계수 2.22를 곱하여 정량한다. 다만, 검출한계는 0.04 mg/kg 이하로 한다.

7.1.3.44 비페나제이트(Bifenazate)

가. 시험법 적용범위
서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카 카트리지(silica cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준품 및 시료 제조용 혼합용액: 아세토니트릴, 물, 초산 및 아스코르브산(500 mL:500 mL:5 mL:1 g) 혼합용액

5) 표준원액: 표준품을 4) 표준품 및 시료 제조용 혼합용액에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 4) 표준품 및 시료 제조용 혼합액을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 용기에 넣고 아세톤 100 mL 및 물 10 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 여과액은 35℃ 이하에서 감압 농축하여 물만 남을 때까지 용매를 모두 날려버린다. 이를 분액깔때기에 옮겨 10% 염화나트륨 용액 50 mL와 디클로로메탄 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취하고 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 앞의 디클로로메탄층과 합한다. 디클로로메탄층은 무수 황산나트륨을 이용하여 탈수, 여과한 후 35℃ 이하에서 농축보호액(keeper solution, ethylene glycol 5 mL + 아세토니트릴 95 mL) 1 mL를 넣어 감압 농축하여 용매를 모두 날려버리고 헥산:아세톤(9:1, v/v) 혼합용액 3 mL에 녹인다.

2) 정제
미리 헥산:아세톤(9:1, v/v) 혼합용액 10 mL로 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 헥산:아세톤(9:1, v/v) 혼합용액 20 mL로 용출하여 받는다. 용출액은 35℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려 버리고 표준품 및 시료제조용 혼합액에 녹여서 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장: 254 nm

다) 이동상: 아세토니트릴과 물(65:35, v/v) 혼합용액

라) 이동상 유량: 1 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.45 아세퀴노실(Acequinocyl)

가. 시험법 적용범위
두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤과 초산으로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카 카트리지(silica cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 용기에 취하고 아세톤 100 mL와 초산 0.5 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 다음 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과한다. 잔류물 및 용기는 아세톤 20 mL로 씻어 여과한 후 위의 여과액과 합하고 이를 분액깔때기에 옮겨 포화염화나트륨 용액 50 mL 및 물 450 mL, 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣고 강하게 흔들어 섞은 다음 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 후 디클로로메탄층을 합하고 무수황산나트륨으로 탈수, 여과한 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 헥산 5 mL에 녹인다.

2) 정제
미리 헥산 10 mL로 활성화한 실리카 카트리지에 위의 녹인 액을 넣고 헥산:에틸에테르(9:1, v/v, 초산 0.2% 함유) 혼합용액 10 mL로 유출시켜 버린 다음 헥산:에틸에테르(8:2, v/v, 초산 0.2% 함유) 혼합용액 15 mL로 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 아세토니트릴에 녹여서 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.9 mm × 300 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장: 270 또는 280 nm

다) 이동상: 아세토니트릴, 물, 인산(880:120:1, v/v/v)의 혼합용액

라) 이동상 유량: 0.8 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.46 카펜트라존에틸(Carfentrazone-ethyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 유도체화하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

2) 속슬렛(Soxhlet)추출장치

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 에틸아세테이트에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소가스를 사용하여 용매를 완전히 날려버린 다음 물 20 mL를 넣고 마. 시험용액의 조제 1) 추출 가) 이후의 방법에 따라 실험한 후 에틸아세테이트로 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 유도체화 시약: 14%의 보론트리플루오라이드(boron trifluoride, BF3) 메탄올용액

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 시료 50 g(곡류는 20 g)을 정밀히 달아 용기에 취하고 아세토니트릴:물(8:2, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 다음 여과지 및 여과보조제를 깔은 부흐너깔때기로 감압 여과하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 물만 남을 때까지 용매를 날려버린다.

나) 잔류 수용액에 진한 염산 5 mL를 첨가한 후 속슬렛추출장치에 연결하여 1시간 동안 환류반응을 시키고 이 용액을 분액깔때기로 옮겨 디클로로메탄 100 mL를 넣어 5분간 흔들어 섞은 다음 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 다시 물층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 후 위의 디클로로메탄층에 합하고 무수황산나트륨을 넣어 탈수시킨 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매가 2 mL 정도 남을 때까지 모두 날려버린다.

2) 유도체화
잔류물에 14%의 보론트리플루오라이드(boron trifluoride) 메탄올용액 2 mL를 넣고 밀봉하여 60℃에서 30분간 반응시킨다. 여기에 2%의 황산나트륨 수용액 2 mL를 넣어 반응을 끝내고 분액깔때기로 옮긴 후 헥산 20 mL를 넣어 강하게 흔들어 섞은 다음 정치하여 층을 분리시킨 다음 헥산층을 취한다. 물층에 다시 헥산 10 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 후 위의 헥산층과 합하고 무수황산나트륨을 이용하여 탈수, 여과한 다음 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린다. 잔류물은 에틸아세테이트에 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-1 캐필러리 컬럼(10 m × 0.53 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 10 mL/분

다) 오븐 온도: 215～235℃

라) 주입부 온도: 250～270℃

마) 검출기 온도: 280～300℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.47 트리넥사팍에틸(Trinexapac-ethyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 70% 메탄올로 추출하고 pH를 약 2.5로 맞추어 디클로로메탄으로 액-액 분배한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 트리넥사팍에틸 및 트리넥사팍 표준품을 각각 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고 70% 메탄올 20 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞는다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압 여과하고 메탄올 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액에 물 30 mL를 더하고 1 N 염산을 가해 pH를 약 2.5로 맞춘다. 이를 250 mL 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 5 g 및 디클로로메탄 30 mL를 차례로 넣은 후 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 메탄올을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 건조물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
3.0	95	5
10.0	5	95
13.0	95	5
15.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 600℃

다) Spray voltage: 3.0 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리넥사팍 (Trinexapac)	8.9	224.2	224.0	225	691)	15
					111	19
					165	17
트리넥사팍에틸 (Trinexapac-ethyl)	10.0	252.3	252.1	253	691)	21
					185	11
					207	11
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 메탄올에 일정농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 트리넥사팍에틸(10.0분), B: 트리넥사팍(8.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로  트리넥사팍에틸, 트리넥사팍을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.48 플루록시피르(Fluroxypyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올 용액으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 적당한 농도가 되도록 메탄올에 혼합, 희석하여 각 1 mL씩을 취하고 2% 황산의 부탄올용액 1 mL와 혼합한 후 heating block(100℃)에서 30분간 반응시킨 다음 헥산 5 mL로 분배추출하여 플루록시피르-부틸에스테르를 생성시켜 이를 표준용액으로 한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 20% 수산화나트륨 용액 25 mL와 메탄올 225 mL가 혼합된 용액 50 mL를 넣고 1시간 동안 흔들어 섞은 다음 실온에서 8시간 이상을 방치한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 감압 여과하고 잔류물 및 용기는 위의 혼합 용액 20 mL를 이용하여 씻고 위의 여과액에 합한다. 여과액은 분액깔때기에 옮겨 2 N 황산 50 mL와 pH가 3인 물 100 mL를 넣은 후 디클로로메탄 50 mL를 넣고 5분 동안 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 2회 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄층과 합한다. 디클로로메탄층은 다른 분액깔때기에 넣어 0.5 M 탄산수소나트륨 용액 50 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 정치한 후 2 N 황산 50 mL와 pH가 1인 물 50 mL를 넣어 1분 동안 가볍게 흔든다. 여기에 디클로로메탄 20 mL를 넣어 5분 동안 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 디클로로메탄층을 취하고 다시 물층에 디클로로메탄 20 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄층에 합한다. 디클로로메탄은 무수황산나트륨으로 탈수하고 40℃ 이하에서 감압 농축하여 모두 날려버린 후 2% 황산의 부탄올용액 1 mL에 녹인다. 이를 마개달린 시험관에 옮겨 heating block에서 100℃로 30분간 반응시키고 물 27 mL와 헥산 5 mL를 넣어 5분 동안 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시킨 다음 헥산층을 분리한다.

2) 정제
미리 헥산 10 mL로 활성화한 플로리실 카트리지에 위의 녹인 액 일정량을 넣고 디클로로메탄:헥산(15:85, v/v) 혼합용액 5 mL로 유출시켜 버리고 아세토니트릴:디클로로메탄:헥산(1:49:50, v/v/v) 혼합용액 10 mL로 용출하여 받아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 다음 잔류물은 헥산에 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 캐필러리 컬럼(30 m × 0.2～0.53 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1～10 mL/분

다) 오븐 온도: 220℃

라) 주입부 온도: 240℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.1.3.49 알라니카브(Alanycarb)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 1/15 M 인산완충용액(pH 8): 1/15 M 인산수소이나트륨 용액에 1/15 M 인산이수소칼륨 용액을 넣어 pH 8으로 조정한 것

가) 1/15 M 인산수소이나트륨(Na2HPO4) 용액: 인산수소이나트륨 23.8 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

나) 1/15 M 인산이수소칼륨(KH2PO4) 용액: 인산이수소칼륨 9.08 g을 물에 녹여 1 L로 한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 취하여 1/15 M 인산완충용액 50 mL와 흔들어 섞고 그 중 50 g을 달아 추출 용기에 넣고 여기에 아세톤 100 mL 및 여과보조제(celite 545) 5 g을 넣고 약 3분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지를 깔은 부흐너깔때기를 사용하여 감압 여과한다. 잔류물은 아세톤 20 mL로 잘 씻고 이 씻은 액은 앞의 여과액에 합하여 분액깔때기에 옮긴다. 여기에 물 450 mL 및 포화염화나트륨 용액 50 mL를 넣어 잘 흔들어 섞은 후 디클로로메탄 50 mL씩으로 3회 약 2분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 합하여 무수황산나트륨으로 탈수한 후 이에 1% 에틸렌글리콜을 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 디클로로메탄 5 mL로 녹인다.

2) 정제
직경 10 mm의 컬럼에 5% 함수 실리카 5 g을 헥산 50 mL를 사용하여 습식충전하고 그 위에 무수황산나트륨 1 cm 충전하여 컬럼상의 용매를 무수황산나트륨층까지 유출시켜 버리고 이어서 위의 잔류물을 녹인 디클로로메탄 5 mL를 넣고 무수황산나트륨층까지 유출시켜 버린 후 이어서 헥산:디클로로메탄:아세토니트릴(48.5:50:1.5, v/v/v) 혼합용액 100 mL와 헥산:디클로로메탄:아세토니트릴(45:50:5, v/v/v) 혼합용액 20 mL를 차례로 용출하여 받은 후 이에 1% 에틸렌글리콜 함유 아세톤 0.1 mL를 넣고 40℃ 이하에서 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 헥산 5 mL에 녹인다. 다시 직경 10 mm의 컬럼에 활성화한 플로리실 5 g을 넣고 그 위에 무수황산나트륨 1 cm 충전한 후, 헥산 50 mL로 씻는다. 여기에 위의 잔류물을 녹인 헥산 5 mL를 넣어 무수황산나트륨층까지 유출시켜 버리고 다시 50% 에틸아세테이트함유 헥산 50 mL를 유출시켜 버린다. 이어서 80% 에틸아세테이트 함유 헥산 60 mL로 용출하여 받아 이에 1% 에틸렌글리콜 함유 아세톤 0.1 mL를 넣어 40℃ 이하에서 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 아세토니트릴 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 물과 아세토니트릴(15:85, v/v)의 혼합용액

다) 검출파장: 230 nm

라) 이동상 유량: 0.5 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크는 표준용액의 피크의 무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 하여 피크높이법 또는 피크면적법에 따라서 정량한다.

7.1.3.50 메코프로프-피(Mecoprop-P)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올:물:초산 혼합액으로 추출한 후 액-액 분배하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 메탄올에 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 30 g을 달아 추출용기에 넣고 여기에 메탄올:물:초산(49:49:2, v/v/v) 혼합용액 100 mL를 넣고 약 3분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지를 깔은 부흐너깔때기를 사용하여 감압 여과한다. 잔류물은 추출용매 소량으로 잘 씻고 이 씻은 액은 앞의 여과액과 합하여 분액깔때기에 옮긴다. 진한 염산으로 pH를 1～2로 하고 여기에 디클로로메탄 100 mL 및 50 mL씩으로 2회 약 2분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 합하여 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려 버리고 잔류물을 메탄올 적당량으로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 메탄올과 pH 2.5의 0.05 M 인산 함유한 수용액(20:80, v/v) 혼합용액

다) 검출파장: 229 nm

라) 이동상 유량: 1 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 각 피크는 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간이 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 하여 피크높이법 또는 피크 면적법에 따라서 정량한다.

7.1.3.51 피리달릴(Pyridalyl)

가. 시험법 적용범위
두류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 및 이와 동등한 것

3) 표준원액: 피리달릴 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 4 N 염산 10 mL 넣은 후 30분간 방치한 후 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 50 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	40	60
0.5	40	60
1.0	0	100
7.0	0	100
7.1	40	60
11.0	40	60

다) 이동상 유량: 0.25 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피리달릴 (Pyridalyl)	4.6	491.1	491.0	492	1091)	59
					183	23
					164	49
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

피리달릴(4.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 피리달릴을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.52 시안화 수소(Hydrogen cyanide)

가. 시험법 적용범위
과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 증류시켜 시안가스를 발생시킨 후 포집하여 적정한다.

다. 장치

1) 증류장치

2) 10 mL 마이크로 뷰렛: 최소 눈금 0.02 mL

라. 시약 및 시액

1) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 시안화칼륨 2.51 g을 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 표준원액을 물에 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

4) 주석산 용액: 주석산 5 g을 물에 녹여 50 mL로 한다.

5) 수산화나트륨 용액: 수산화나트륨 1.25 g을 물에 녹여 50 mL로 한다.

6) 탄산나트륨 초산납 혼합용액: 탄산나트륨 200 g과 초산납 20 g을 각각 물에 녹인 후 이들을 혼합해서 1,000 mL로 희석한다. 사용시에 잘 흔들어 혼합시켜 사용한다.

7) 0.1 N 질산은 용액: 특급(부피분석용)

8) 요오드화칼륨 용액: 요오드화칼륨 2 g을 물에 녹여 100 mL로 한다.

9) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
시료 100 g, 물 250 mL 및 주석산 용액 50 mL를 2 L 증류플라스크에 넣는다. 냉각기를 증류플라스크를 냉각기와 연결하고 2.5% 수산화나트륨 용액 100 mL가 담긴 1 L의 비커에 넣어 냉각기의 하단이 용액에 잠기도록 한다. 증류플라스크를 가열하여 유출액이 300～350 mL될 때까지 4～7 mL/분의 유출속도로 증류한다. 여기에 잘 흔들어 혼합된 탄산나트륨 초산납 혼합용액을 1 mL를 가해 침전이 생기지 않을 경우는 그대로 이것을 시험용액으로 한다. 침전이 생기거나 백탁이 있을 때는 여과지를 이용하여 여과해서 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 시험용액에 암모니아수 10 mL와 요오드화칼륨 용액 10 mL를 가한 후 10 mL의 마이크로뷰렛을 이용하여 0.02 N 질산은 용액으로 적정한다.

2) 정량한계
0.2 mg/kg

사. 정량시험
시료에 주석산을 가한 후 증류하여 발생한 시안화수소를 알카리수에 포집하고 질산은용액으로 적정하여 시안의 양을 구한다.

1) 계산방법

시료 중 시안의 양(mg/kg)	=	(A-B)×N×54×f×106
		시료무게(g)×1,000

A: 시료의 질산은용액 적정값(mL)
B: 공시험에 있어서의 질산은용액 적정값(mL)
N: 질산은 용액의 농도
f: 질산은 용액의 보정계수
주: 1) 이 실험의 검출한계는 0.2 mg/kg임.

7.1.3.53 메소트리온(Mesotrione)

가. 시험법 적용범위
곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 추출 용기에 정밀히 달아 넣고 0.2 M 염화암모늄(NH4Cl) 수용액(pH 2) 20 mL를 넣어 10분간 습윤화 하고 아세토니트릴 100 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세토니트릴 40 mL로 씻어 위의 여과액에 합한다. 합친 여과액을 40℃에서 감압 농축하고 건고물에 2% 인산이칼륨(K2HPO4)용액 40 mL를 넣은 후 1 M의 염산으로 pH를 6±0.2로 맞춘다. pH 조절액을 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 50 mL 헥산을 넣어 분배 후 헥산층을 유출시켜 버린다. 수용액 층은 100 mL 용량의 비커에 받아서 6 M 염산과 1 M의 염산을 이용하여 pH를 2±0.2로 맞추고 여분의 분액깔때기로 옮긴다. 분액깔때기에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수하고 다시 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 다음 위의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버리고 건고물은 아세톤 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 컬럼관에 실리카 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 아세톤 25 mL를 넣어 상단에 소량의 아세톤이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세톤에 녹인 용액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유량으로 유출시켜버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 메탄올:아세톤(7:93, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 메탄올:아세톤(20:80, v/v) 혼합용액 50 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 건고물은 아세토니트릴:50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4)(30:70, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 50 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 함유한 수용액(30:70, v/v) 혼합용액, pH 2～5

다) 검출파장: 258 nm

라) 이동상 유량: 1 mL/분

마) 컬럼온도: 40℃

바) 주입량: 50 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

메소트리온(11.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 메소트리온을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴, 물, 포름산(25:75:0.1, v/v/v) 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

바) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

사) 분자량 범위: 100～400 m/z

아) Capillary temperature: 330℃

자) Tube lens offset: -31 V

차) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
메소트리온 (Mesotrione)	12.0	339.3	339.0	338

7.1.3.54 메트알데하이드(Metaldehyde)

가. 시험법의 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 디클로로메탄으로 1차 추출한 후 유도체화시켜 디클로로메탄으로 2차 추출한다. 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용 실리카(70～230 mesh)를 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

3) 표준원액: 표준품을 디클로로메탄에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 클로로포름에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 2,4-디니트로페닐하이드라진(2,4-Dinitrophenylhydrazine, 2,4-DNPH): 6 N 염산 200 mL에 2,4-DNPH 0.5 g을 녹여 조제한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출(1차)
시료 25 g을 추출 용기에 정밀히 달아 넣고 디클로로메탄 100 mL를 넣고 2분간 강하게 흔들어 추출 한다. 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물을 디클로로메탄 40 mL로 씻어 내려 위의 여과액과 합친 후 1 L 분액깔때기로 옮기고 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨 후 수용액 층은 버리고 다시 디클로로메탄층에 2% Na2S2O5 수용액 100 mL를 넣어 앞서의 과정을 되풀이 한다. 디클로로메탄층에 추가로 물 100 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞고 층이 완전히 분리된 후 수용액 층은 버린다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 40℃에서 감압 농축한다.

2) 유도체화
위의 잔류물에 디클로로메탄 10 mL를 넣어 잔류물을 녹이고 2,4-디니트로페닐하이드라진 염산 10 mL를 넣어 40℃에서 20분간 교반하여 유도체 반응을 거친다.

3) 추출(2차)
20분이 경과한 반응액을 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮긴 후 디클로로메탄 20 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 10 g에 통과시켜 탈수한다. 다시 수용액 층에 디클로로메탄 20 mL를 넣어 위와 같이 되풀이한 다음 앞서의 디클로로메탄과 합한다. 합친 용액을 40℃에서 감압 농축하여 건고물은 헥산 10 mL로 녹인다.

4) 정제
안지름 15 mm, 길이 40 cm의 컬럼관에 실리카 10 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 유출하여 버린다. 상기 용해액 10 mL를 넣은 후 약 3 mL/분의 유량으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 에틸아세테이트:헥산(10:90, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고물은 아세토니트릴:물(50:50, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

※ 주: 실험용기 세척시 주로 사용되는 아세톤은 일부의 아세트알데하이드를 포함하고 있어 분석에 방해가 됨으로 상기시험법 이용시 사용되는 용기는 디클로로메탄으로 세척 후 사용하여야 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장: 360 nm

다) 이동상: 아세토니트릴과 물(50:50, v/v)의 혼합용액

라) 이동상 유량: 1 mL/분

마) 컬럼온도: 40℃

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

아세트알데하이드-2,4-DNPH(9.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아세트알데하이드-2,4-DNPH을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 물과 아세토니트릴(50:50, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: APCI(Negative ion mode)

사) 분자량 범위: 100～300 m/z

아) Capillary temperature: 275℃

자) Cone voltage: -55 V

차) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아세트알데하이드-2,4-DNPH (Acetaldehyde-2,4-DNPH)	9.3	224.2	224.0	223

7.1.3.55 디비이디시(DBEDC)

가. 시험법 적용범위
채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올 및 수산화나트륨 용액으로 추출한 후 흡인 여과하고 황산으로 pH를 맞춘 다음 감압 농축한다. 클로로포름으로 분배한 후 유기용매층을 탈수, 감압 농축하고 플로리실 컬럼크로마토그래피(메탄올:아세톤(50:50, v/v) 혼합용액)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-형광검출기(HPLC-FLD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(florisil): 컬럼크로마토그래피용(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 각각 메탄올:0.1%(v/v) 포름산 수용액(60:40, v/v) 혼합용액에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 추출 용기에 달아 넣고 메탄올 100 mL와 10% 수산화나트륨 용액 5 mL를 넣고 3분간 강하게 흔들어 추출한다. Celite 545가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 메탄올로 씻어 위의 여과액과 합한다. 여과액은 1 N 황산을 이용하여 pH를 7로 맞추고 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 분액깔때기에 옮기고 메틸렌블루 40 mL를 첨가한 다음 클로로포름 50 mL를 넣고 흔들어 정치하여 층을 분리시킨다. 클로로포름층을 취한 후 다시 수용액층에 클로로포름 50 mL를 넣고 분배과정을 되풀이하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 건고물은 클로로포름 5 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 컬럼관에 플로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 클로로포름 50 mL를 넣어 상단에 소량의 클로로포름이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 클로로포름에 녹인 용액을 가한 후 약 3 mL/분의 유량으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 아세톤:클로로포름(50:50, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 메탄올:아세톤(50:50, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 건고물을 메탄올 3 mL에 녹인 다음 0.1% 포름산 수용액 2 mL를 넣어 잘 혼합하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 메탄올과 0.1%(v/v) 포름산 함유한 수용액(60:40, v/v) 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 20 μL

바) 검출파장: Ex 225 nm, Em 295 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

디비이디시(8.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 디비이디시의 성분을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 메탄올과 0.1%(v/v) 포름산 함유한 수용액(60:40, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

바) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

사) 분자량 범위: 100～500 m/z

아) Capillary temperature: 350℃

자) Cone voltage: -100 V

차) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
디비이디시 (DBEDC)	5.4	834.7	834.0	325

7.1.3.56 옥솔린산(Oxolinic acid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 옥솔린산 표준품을 0.25 M 수산화나트륨:메탄올(10:90, v/v) 혼합용액에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 2% 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 2% 인산일수소칼륨(K2HPO4) 용액 10 mL와 5% 포름산을 함유한 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과  PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 등등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	60	40
6.0	40	60
7.0	10	90
10.0	10	90
11.0	95	5
13.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
옥솔린산 (Oxolinic acid)	5.1	261.2	261.3	262	2441)	20
					216	30
					160	40
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

옥솔린산(5.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 옥솔린산을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.57 엠시피에이(MCPA)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 염산과 아세톤으로 추출한 후 흡인 여과한다. 여과액을 감압 농축하여 용매를 제거한 후 수용액을 분액깔때기에 옮겨 헥산으로 세정한 후 벤젠으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압 농축하고 유도체화한 다음 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한 후 감압 농축하고 유도체화시약을 이용하여 유도체화한다. 헥산으로 분배한 후 용매를 감압 농축하고 건고물을 헥산으로 녹인다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 용기에 정밀히 달아 1 N 염산 100 mL와 아세톤 100 mL를 가해 30분간 흔들어 섞어 추출 후 celite 545가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세톤 50 mL로 용기 및 잔류물을 씻어 앞의 여과액과 합한 후 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축액을 분액깔때기로 옮기고 헥산 50 mL를 넣어 약하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨 후 수용액층은 다른 분액깔때기로 옮기고 헥산층은 버린다. 분액깔때기에 벤젠 50 mL를 넣고 흔들어 정치하여 층을 분리시킨 후 유기용매층은 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고, 수용액층에는 다시 벤젠 50 mL를 넣어 흔들어 정치하고 재차 무수황산나트륨에 통과시켜 앞서의 여과액과 합친다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버린다.

2) 유도체화
건고물에 클로로에틸화 유도체시약(10% BF3/2-chloroethanol 용액)을 2 mL 넣어 70℃에서 20분간 유도체화한 뒤 냉각 후 5% 염화나트륨 용액 50 mL를 넣고 분액깔때기로 옮겨 헥산 50 mL로 2회 추출하여 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하고 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하여 날려버리고 헥산 5 mL로 녹인다.

3) 정제
미리 플로리실 카트리지에 헥산 10 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 여기에 2) 유도체화 후 헥산용액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 전개 시킨 후 에틸에테르:헥산(5:95, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 유출시켜 버리고 에틸에테르:헥산(10:90, v/v) 혼합용액 10 mL로 용출하여 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 질소가스를 낮은 유량으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 건고물을 헥산 5 mL로 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-17 컬럼(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 15 mL/분

다) 오븐 온도: 190℃

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 280℃

바) 주입량: 2 μL(직접주입법)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

엠시피에이 에스테르 유도체(7.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 기체크로마토그래프-질량분석기상의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 농약의 성분을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 45℃에서 시료를 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승시킨 후 2분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 주입부 온도: 250℃

바) 인터페이스 온도: 280℃

사) 분자량 범위: 100～250 m/z

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량* (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
엠시피에이 (MCPA)	13.9	200.6	200.0	141, 143

* MCPA ester 유도체

7.1.3.58 프로헥사디온-칼슘(Prohexadione-calcium)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 5 N 황산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 음이온 교환 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매 및 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 0.2%(v/v) 포름산:아세토니트릴(70:30, v/v) 혼합용액으로 희석하여 0.02, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L가 되도록 하여 검량선 작성을 위한 표준용액으로 한다.

5) 0.02 M 초산암모늄(ammonium acetate) 용액:초산암모늄 0.16 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

6) 5% 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) 용액: 인산수소이나트륨 5 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 1% 포름산(formic acid) 용액: 포름산 1 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

8) 0.2% 포름산(formic acid) 용액: 포름산 0.2 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

9) 음이온 교환 카트리지: 음이온 교환 수지(500mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(6 mL) 또는 이와 동등한 것

10) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고, 5 N 황산 1 mL와 아세토니트릴 100 mL를 넣어 3분간 강하게 흔들어 추출한다. 부흐너깔때기로 흡입 여과하고 아세토니트릴 40 mL로 잔류물 및 용기를 씻어 상기 여과액과 합하여 40℃ 이하에서 10 mL 정도 남을 때까지 감압 농축한 후 5% 인산수소이나트륨 용액 100 mL를 넣어 녹인다. 이를 분액깔때기에 옮기고 헥산 50 mL를 넣어 강하게 흔들어 10분간 정치하여 층을 분리시킨 후 물층을 취하여 10 N 인산 용액을 넣어 pH 3으로 맞춘다. 물층에 포화염화나트륨 용액 30 mL와 디클로로메탄 50 mL를 넣어 강하게 흔든 후 10분간 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 감압농축플라스크에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 50 mL를 넣어 강하게 흔들어 10분간 정치하여 층을 분리시킨 후 디클로로메탄층을 탈수하여 상기 감압농축플라스크에 합한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물에 0.02 M 초산암모늄 용액 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
음이온 교환 카트리지에 메탄올 5 mL를 넣고 고정상 상단에 소량의 메탄올이 남을 정도까지 유출시켜 버리고 다시 0.02 M 초산암모늄 용액 5 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 10 mL를 고정상에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 물 5 mL와 0.02 M 초산 암모늄:메탄올(80:20, v/v) 혼합용액 5 mL를 각각 넣어 유출시켜 버리고 다시 1% 포름산 용액 9 mL로 용출시켜 10 mL 메스플라스크에 받는다. 이 플라스크에 아세토니트릴을 넣어 최종부피를 10 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 0.2%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액과 아세토니트릴(70:30, v/v) 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 검출파장: 275 nm

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.02, 0.05, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0 mg/L를 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

프로헥사디온(10.0분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 프로헥사디온을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 0.2%(v/v) 포름산(formic aicd) 함유한 수용액과 아세토니트릴(70:30, v/v) 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.5 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

바) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

사) 콘 볼테이지: 25 V

아) 분자량 범위: 100～300 m/z

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
프로헥사디온 (Prohexadione)	17.7	212.2	212.0	211

7.1.3.59 테트라메트린(Tetramethrin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤으로 희석하여 0.04, 0.08, 0.5, 1.0 2.0, 5.0 mg/L가 되도록 하여  표준용액으로 한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(1 g, 6 mL) 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고, 물 30 mL를 넣어 2시간 방치한다. 아세토니트릴 100 mL를 넣고 3분간 강하게 흔들어 추출한 후 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 이 여과액을 염화나트륨 15 g이 들어있는 분액깔때기에 옮긴 후 강하게 흔들어 1시간 정치한다. 상층액 20 mL를 감압농축플라스크에 취하여 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세톤:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 2 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 헥산 50 mL를 넣고 고정상에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버리고 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 2 mL를 고정상에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤:헥산(20:80, v/v) 혼합용액 5 mL로 유출시켜 15 mL 시험관에 받는다. 이 유출액을 40℃ 이하에서 질소 농축한 후 잔류물에 아세톤:헥산(20:80, v/v) 혼합용액을 넣어 최종부피를 1 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승하여 15분간 유지한다.

마) 검출기 온도: 280℃

바) 주입 방법: Split mode(10:1)

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.04, 0.08, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0 mg/L를 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 테트라메트린 피크 1과 2를 합한 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

테트라메트린 1(21.6분), 테트라메트린 2(21.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 테트라메트린 피크 1과 2를 합한 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 테트라메트린을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입한 후 2분간 유지하고 10℃/분의 비율로 280℃까지 상승하여 15분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 250℃

바) 이온원 온도: 200℃

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분자량 범위: 50～350 m/z

차) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
테트라메트린 (Tetramethrin)	21.1, 21.2	331.4	331.1	164, 123, 81

7.1.3.60 아이소카보포스(Isocarbofos)

가. 시험법 적용범위
곡류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 흡인 여과 한다. 여과액을 분액깔때기에 옮겨 포화염화나트륨용액과 물을 넣고 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압 농축한 후 헥산/아세토니트릴 분배를 거쳐 비극성 불순물을 제거하고 플로리실 컬럼크로마토그래피로 추가 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-불꽃광도검출기(GC-FPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 잔류농약분석용(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

4) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 각각 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g(곡류의 경우 20 g에 물 20 mL를 첨가)을 추출 용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 잔류물은 아세톤 40 mL로 씻어 위의 여과액과 합한다. 여과액은 분액깔때기에 옮겨 물 450 mL와 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣고 디클로로메탄 50 mL를 넣어 2분간 강하게 흔든 후 정치하여 층을 분리시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨 20 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 넣고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합한다. 합친 용액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 아세톤:헥산(6:94, v/v) 혼합용액 4 mL로 녹인다.

※ 곡류 등의 지방성 시료의 경우 위의 용매를 날려버린 잔류물에 미리 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL를 넣어 녹인 후 250 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출하여 지방을 제거한다. 2회 추출된 아세토니트릴층을 합친 후 40℃에서 감압 농축하고 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 1.5 cm, 길이 40 cm의 유리컬럼관에 플로리실 10 g, 무수황산나트륨 약 2 g을 충전한 후 헥산 50 mL를 넣어 상단에 소량의 헥산이 남을 정도로 유출시킨다. 여기에 1) 추출로부터 얻은 용액 4 mL(또는 지방성 시료의 경우 10 mL)를 가한 후 약 3 mL/분의 유량으로 유출시켜 버린다. 충전제 표면이 노출되기 직전 디클로로메탄 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고, 에틸아세테이트:클로로메탄(4:96, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압농축하고 건고물을 아세톤 4 mL에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 15 mL/분

다) 오븐 온도: 180℃

라) 주입구 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 250℃

바) 주입량: 2 μL(직접주입법)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

아이소카보포스(5.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 아이소카보포스를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: HP-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 컬럼온도: 200℃

라) 주입구 온도: 250℃

마) 주입 방법: Split mode(5:1)

바) 인터페이스 온도: 280℃

사) 분자량 범위: 100～400 m/z

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
아이소카보포스 (Isocarbofos)	6.0	289.3	289.0	121, 136, 230, 289

7.1.3.61 클로로피크린(Chloropicrin)

가. 시험법 적용범위
곡류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 에틸아세테이트로 추출하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 표준원액을 에틸아세테이트로 희석하여 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 mg/L가 되도록 한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 무수황산나트륨 2 g이 들어있는 20 mL 헤드스페이스 병에 넣고 에틸아세테이트 10 mL를 넣은 후 마개로 밀봉한다. 헤드스페이스 병을 10분간 강하게 흔들고 5분간 정치하여 층을 분리시킨 다음 주사기로 상층액 약 3 mL를 취한다. 이 추출액을 멤브레인 필터로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 200℃

라) 오븐 온도: 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/분의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

마) 검출기 온도: 280℃

바) 주입 방법: Split mode(10:1)

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액 0.005, 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.5 mg/L를 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

클로로피크린(7.4분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 피크 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 클로로피크린을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 200℃

라) 오븐 온도: 40℃에서 시험용액을 주입한 후 10분간 유지하고 20℃/분의 비율로 200℃까지 승온하여 2분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 280℃

바) 이온원 온도: 230℃

사) 사중극자(quadrupole) 온도: 150℃

아) 주입 방법: Splitless mode

자) 주입량: 1 μL

차) 분자량 범위: 50～200 m/z

카) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
클로로피크린 (Chloropicrin)	4.5	164.4	162.8	117, 121, 82

7.1.3.62 프로클로라즈(Prochloraz)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 pyridine hydrochloride를 넣어 2,4,6-TCP(trichlorophenol)로 전환하여 디클로르메탄으로 분배, 추출한 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 30 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고((곡류 및 두류의 경우 시료 20 g을 정밀히 달아 물 20 mL를 넣은 후 2시간 방치), 아세토니트릴 100 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세토니트릴 50 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합치고 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물을 물 100 mL와 디클로르메탄 50 mL으로 녹여 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치한 후 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고 디클로르메탄 50 mL에 녹인 용액 중 1 mL를 취하여 40 mL의 용기에 담아 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 질소건고한다. 여기에 pridine hydrochloride 5 g을 넣고 밀봉한 다음 220℃에서 1시간 동안 가열한 후 실온으로 냉각시키고 0.2 M 염산 20 mL를 넣어 녹인 후 분액깔때기에 옮겨 물 100 mL, 디클로르메탄 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 층이 분리될 때까지 정치한다. 디클로르메탄층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수하여 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 여기에 아세톤에 녹인 2% 디에틸렌글리콜용액 0.2 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 아세톤 5 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 300℃

라) 오븐 온도: 110℃

마) 검출기 온도: 300℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 2 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

2,4,6-티시피(트리클로로페놀)(8.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 2,4,6-TCP(trichlorophenol)를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 250℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 5분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 3분 이상 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 270℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

아) 분자량 범위: 80～500 m/z

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
2,4,6-티시피(트리클로로페놀) (2,4,6-TCP(trichlorophenol))	11.9	197.4	195.9	196

7.1.3.63 디디티(DDT)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 디디티(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE, p,p'-TDE(DDD)) 표준품을 각각 헥산에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 25 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세톤 100 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과지가 깔려 있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 아세톤 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL, 물 450 mL 및 헥산 100 mL를 넣어 1분 이상 강하게 흔들고 정치하여 층을 분리시킨 후, 헥산층을 20 g의 무수황산나트륨층에 통과시켜 탈수하고 250 mL 용량의 감압농축플라스크에 받는다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 헥산 20 mL에 녹여 125 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 40 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 헥산 10 mL로 녹인다.

2) 정제
안지름 15 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 10 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이 차례로 건식 충전한 후 헥산 100 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 디클로로메탄:아세토니트릴:헥산(50:0.3:49.7, v/v/v) 혼합용액 150 mL를 넣어 용출하여 감압농축플라스크에 취한다. 이 용출액을 40℃ 이하 수욕상에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 220℃까지 10℃/분 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/분의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

마) 검출기 온도: 320℃

바) 주입 방법: Split mode(20:1)

사) 주입량: 1 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량을 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

p,p'-디디이(18.6분), p,p'-디디디(20.2분), o,p'-디디티(20.4분), p,p'-디디티(21.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 p,p'-디디이, p,p'-디디디, o,p'-디디티, p,p'-디디티를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 0.9 mL/분

다) 주입부 온도: 260℃

라) 오븐 온도: 80℃에서 220℃까지 10℃/분 비율로 온도를 상승시켜 3분간 유지한 후, 240℃까지 3℃/분의 비율로 온도를 상승, 280℃까지 20℃/분의 비율로 온도를 상승시켜 15분간 유지한다.

마) 인터페이스 온도: 300℃

바) 주입 방법: Splitless mode

사) 주입량: 1 μL

아) 분자량 범위: 50～500 m/z

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
p,p'-디디디 (p,p'-TDE(DDD))	20.2	320.0	317.9	237, 235, 165
p,p'-디디이 (p,p'-DDE)	18.6	318.0	315.9	318, 246
o,p'-디디티 (o,p'-DDT)	20.4	354.5	351.9	237, 235, 165
p,p'-디디티 (p,p'-DDT)	21.9	354.5	351.9	237, 235, 165

7.1.3.64 설퍼릴플루오라이드(Sulfuryl fluoride)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 공기밀폐형 용기를 이용해 물과 함께 추출한 후 헤드스페이스(Head space)에 있는 기체를 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

3) 공기밀폐형 용기(Air-tight bottle): 밀봉이 되며, 주사기를 이용해 가스를 빼고 넣을 수 있는 실리콘 격막(Septum)이 있는 마개가 있어야 함.

4) 가스밀폐형 주사기(Gas-tight syringe): 가스 상태의 시료를 직접 주입해야 하므로 기밀성이 뛰어나야 함.

라. 시약 및 시액

1) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

2) 표준가스: 공기(Air) 중 설퍼릴플루오라이드 5 mg/L를 공기로 각각 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험가스의 조제

1) 추출
시료 50 g을 정밀히 달아 공기밀폐형 용기에 마그네틱바와 함께 물 250 mL를 넣은 후 마개를 닫는다(600 mL의 용기를 이용하는 경우 물과 시료를 넣으면 300 mL의 헤드스페이스 부피가 남게 된다). 5분간 낮은 속도로 혼합한 후 5분간 정치한다. 가스밀폐형 주사기를 이용해 용기의 헤드스페이스에 있는 가스 0.5 mL를 뽑아 시험가스로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: HP-PLOT Q(30 m × 0.53 mm, 40 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 4.5 mL/분

다) 주입부 온도: 125℃

라) 오븐 온도: 70℃

마) 주입 방법: Splitless mode

바) 검출기 온도: 270℃

사) 주입량: 0.5 mL

2) 검량선 작성
둥근 플라스크에 물 일정량[50 mL 용량의 둥근 플라스크의 경우 실제 플라스크의 총 부피는 약 75 mL이므로 25 mL의 물을 채우고 남은 플라스크의 헤드스페이스 50 mL를 이용해 설퍼릴플루오라이드를 희석한다.(플라스크마다 부피 차이가 있으므로 반드시 총 부피를 재고 실험한다.)]을 채우고 실리콘 격막(septum)을 씌운다. 표준가스를 각 농도별로 희석한 후 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.
(* 둥근 플라스크의 총 부피와 물의 양에 따라 플라스크 안의 헤드스페이스 부피가 달라지므로 주의해야 한다.
* 표준가스를 희석할 때 넣고자 하는 부피만큼 플라스크 안의 공기를 빼내고 해당 부피의 표준가스를 플라스크에 넣는다.)

3) 표준품 크로마토그램

설퍼릴플루오라이드(5.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.04 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준가스 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 설퍼릴플루오라이드를 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: PoraBOND Q(25 m × 0.25 mm, 0.3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 주입부 온도: 125℃

라) 오븐 온도: 50℃

마) 주입 방법: Splitless mode

바) 인터페이스 온도: 280℃

사) 분자량 범위: 50〜500 m/z

아) 주입량: 100 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
설퍼릴플루오라이드 (Sulfuryl fluoride)	2.0	102.1	102.0	83, 67

7.1.3.65 테퓨릴트리온(Tefuryltrione)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산을 포함한 아세토니트릴로 추출한 후 에틸아세테이트:디클로로메탄 혼합용매로 액-액 분배하고 플로리실 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실 카트리지(Florisil cartridge): 플로리실 고정상(1 g)이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(건조 시료의 경우 물 10 mL를 가한 후 30분 방치) 아세토니트릴 30 mL, 물 10 mL 및 포름산 0.4 mL를 넣고 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지와 여과보조제가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 아세토니트릴 30 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친다. 여과액을 500 mL 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 20 mL와 물 40 mL를 차례로 가한 후 에틸아세테이트:디클로로메탄(70:30, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣어 2분간 강하게 흔들어 섞고 층이 완전히 분리될 때까지 정치하여 층을 분리시킨다. 상층의 에틸아세테이트:디클로로메탄 층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 에틸아세테이트:디클로로메탄(70:30, v/v) 혼합용액 20 mL를 추가로 넣고 상층의 에틸아세테이트:디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 3회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물을 아세톤:디클로로메탄(50:50, v/v) 혼합용액 10 mL로 녹인다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 아세톤:디클로로메탄(50:50, v/v) 혼합용액 5 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출하여 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 중 1 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시키고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤:디클로로메탄(50:50, v/v) 혼합용액  5 mL를 유출시켜 버린 후 4% 포름산이 포함된 아세톤:디클로로메탄(60:40, v/v) 혼합용액 8 mL를 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버리고 플라스크를 상온으로 냉각한 후, 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 2 mL가 되게 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.1	50	50
3.0	20	80
4.0	20	80
5.5	50	50
15.0	50	50

다) 이동상 유량: 0.25 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 300℃

다) Spray voltage: 3.5 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Extract mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
테퓨릴트리온 (Tefuryltrione)	4.3	442.9	442.0	443	261	30
					3051)	20
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 아세토니트릴에 일정농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

테퓨릴트리온(4.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.03 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 테퓨릴트리온을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.66 브로플라닐라이드(Broflanilide)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE:  무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 10 mL 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 가한 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg, C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
3.0	80	20
3.5	10	90
7.0	10	90
8.0	80	20
10.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
브로플라닐라이드 (Broflanilide)	5.3	663.3	662.0	665	6451)	50
					625	45
					256	48
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

브로플라닐라이드(5.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 브로플라닐라이드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.67 아이소페타미드(Isofetamid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아이소페타미드 및 대사산물(GPTC)*표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.
*N-{1-[4-(D-glucopyranosyloxy)-2-methylphenyl]-2-methyl-1-oxopropan-2-yl} -3-methylthiophene-2-carboxamide

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
4.0	15	85
6.0	5	95
9.0	5	95
10.0	80	20
12.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이소페타미드 (Isofetamid)	5.7	359.5	359.2	360	1251)	41
					210	13
					182	21
GPTC	4.3	479.5	479.2	480	1251)	55
					210	17
					182	29
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 아이소페타미드(5.7분), B: GPTC(4.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아이소페타미드 및 GPTC를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

※ 아이소페타미드의 잔류량 = 아이소페타미드의 잔류량 + (환산계수* × GPTC의 잔류량)
* 환산계수 = 0.75(아이소페타미드 분자량 360 / GPTC 분자량 480)

7.1.3.68 아이속사플루톨(Isoxaflutole)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 물과 아세토니트릴 혼합용액으로 추출한 후, 디클로로메탄으로 액-액 분배하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아이속사플루톨 및 아이속사플루톨 디케토니트릴 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조 시료의 경우 0.1% 아세트산 수용액 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 0.1% 아세트산 함유 물:아세토니트릴(20:80, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣고 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합한다. 합친 여과액에 물 100 mL를 넣고 pH 미터기를 이용해 1 N HCl를 천천히 가해 pH 2가 되도록 한다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 15 g 및 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣은 후 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 모두 날려버린 후, 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 헥산 30 mL를 건고물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 아세토니트릴 30 mL로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터를 이용해 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
4.0	90	10
9.0	10	90
10.0	10	90
12.0	90	10
16.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 350℃

다) Spray voltage: 4.5 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이속사플루톨 (Isoxaflutole)	9.4	359.3	359.0	360	220	30
					251	20
아이속사플루톨 디케토니트릴 (Isoxaflutole diketo-nitrile)	8.8	359.3	359.0	360	69	10
					251	20

3) 검량선 작성
표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 이온의 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 아이속사플루톨(9.4분), B: 아이속사플루톨 디케토니트릴(8.8 분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아이속사플루톨, 아이속사플루톨 디케토니트릴을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.69 벤조빈디플루피르(Benzovindiflupyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하여 실리카 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 실리카 카트리지(silica cartridge): 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 이를 여과보조제(celite 545) 10 g이 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 후 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친 뒤 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물에 물 100 mL를 넣어 녹인 후 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 20 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣고 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨다. 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산:아세톤(90:10, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 미리 아세토니트릴포화헥산 30 mL를 잔류물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산포화아세토니트릴 30 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물에 헥산:아세톤(90:10, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 중 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 헥산:아세톤(90:10, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 유출시켜 버리고 헥산:아세톤(80:20, v/v) 혼합용액 15 mL로 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
6.0	20	80
8.0	20	80
10.0	80	20
13.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 0.91 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) Cone voltage: 54 V

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
벤조빈디플루피르 (Benzovindiflupyr)	7.1	398.2	397.0	398	3421)	18
					378	14
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

벤조빈디플루피르(7.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 벤조빈디플루피르를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.70 페녹사설폰(Fenoxasulfone)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출하여 아미노프로필 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge): 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 50 mL를 가한 후 30분간 방치) 아세톤 150 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 아세톤 30 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친다. 이를 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 물 150 mL, 포화염화나트륨용액 50 mL를 더한 뒤 디클로로메탄 50 mL를 차례로 넣고 강하게 흔들어 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액 층에 디클로로메탄 50 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 헥산 5 mL를 넣어 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 미리 아세토니트릴포화헥산 50 mL를 잔류물에 넣어 녹인 후 250 mL 분량의 분액깔때기에 옮기고 미리 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배하여 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 5 mL를 넣어 녹인다.

2) 정제
아미노프로필 카트리지에 헥산 10 mL를 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 고정상 상단이 노출되기 전에 아세톤:헥산(2.5:97.5, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣고 유출시켜 버린다. 그 다음 아세톤:헥산(10:90, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣고 용출하여 받은 시험액을 감압농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 1 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 아세토니트릴과 물(63:37, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1.0 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 20 μL

바) 검출파장: 240 nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

페녹사설폰(6.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.03 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 페녹사설폰을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 10 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
4.0	20	80
8.0	20	80
10.0	80	20
12.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar)

라) Cone voltage: 30 V

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
페녹사설폰 (Fenoxasulfone)	366.3	365.0	383	2031)	14
				175	34
				366	8
1) 정량이온

7.1.3.71 티아페나실(Tiafenacil)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴:물:아세트산 혼합용액으로 추출하여 HLB 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 티아페나실, 티아페나실 M36 및 티아페나실 M56 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): Divinylbenzene–N-vinylpyrrolidone Copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 20 mL를 넣은 후 30분간 방치) 아세토니트릴:물:아세트산(80:20:1, v/v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지(Whatman, No. 2)가 깔려있는 부흐너깔때기에 통과시켜 흡인 여과하고 여과액을 감압플라스크에 받는다. 여과지 상의 추출 잔류물을 다시 수거, 아세토니트릴:물:아세트산(80:20:1, v/v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 재차 10분간 흔들어 섞는다. 추출물을 재차 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞서의 여과액과 합친 뒤 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물에 물 100 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 포화염화나트륨용액 50 mL를 가한 후 1 N 염산 1.0～1.5 mL를 넣어 pH 1.5～1.8로 맞춘다. 수용액에 에틸아세테이트 100 mL를 넣어 강하게 흔든 후 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고, 에틸아세테이트층을 무수황산나트륨에 통과시켜 농축플라스크에 받는다. 수용액층에 에틸아세테이트 100 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복하고 합친 분배 추출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 다음 잔류물에 1% 아세트산 함유 물 5 mL에 녹인다.

※ 지방성 시료의 경우 잔류물에 아세토니트릴로 포화시킨 헥산 30 mL에 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산으로 포화시킨 아세토니트릴 30 mL씩으로 2회 분배 추출한다. 합친 아세토니트릴층을 40℃에서 감압 농축, 용매를 완전 증발시킨 후 잔류물에 1% 아세트산 함유 물 5 mL에 녹인다.

2) 정제
HLB 카트리지에 2～3 방울/초의 속도로 메탄올 10 mL와 물 10 mL를 순차적으로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 넣어 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고 재차 메탄올:물(20:80, v/v) 혼합용액 5 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 메탄올 15 mL를 넣고 용출액을 증류 플라스크에 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전 증발시킨다. 잔류물을 아세토니트릴:물(50:50, v/v) 혼합용액 5 mL에 녹인 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
3.0	95	5
4.0	0	100
6.0	0	100
8.0	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.25 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) Cone voltage

(1) 티아페나실: 40 V

(2) 티아페나실 M36 및 티아페나실 M56: 16 V

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
티아페나실 (Tiafenacil)	6.1	511.9	511.0	512	3811)	28
					480	26
티아페나실 M36 (Tiafenacil M36)	5.9	442.8	442.0	443	2181)	36
					369	20
티아페나실 M56 (Tiafenacil M56)	5.8	428.7	427.9	429	2181)	34
					355	20
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 티아페나실(6.1분), B: 티아페나실 M36(5.9분), C: 티아페나실 M56(5.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 티아페나실, 티아페나실 M36 및 티아페나실 M56을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻은 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.72 비사이클로피론(Bicyclopyrone)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 모화합물과 SYN503780기 및 CSCD686480기를 함유하는 대사산물들을 아세토니트릴로 모두 추출한 후 산화반응으로 모화합물은 SYN503780으로 변환하고, SYN503780기 및 CSCD686480기를 함유하는 대사산물들은 각각 SYN503780 및 CSCD686480으로 전환한다. 산화 반응액을 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: SYN503780 및 CSCD686480 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): Divinylbenzene–N-vinyl pyrrolidone Copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친 뒤 이를 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 농축물에 30% 과산화수소수 1 mL와 0.05 M 수산화나트륨 1 mL를 넣고 초음파세척기 상에서 추출한 후 상온에서 3시간 동안 방치하여 산화반응시킨다. 산화반응물에 1 N 염산을 넣어 pH 2～3으로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 산화반응액에 물 3 mL를 넣고, 혼합하여 전량을 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 아세토니트릴:물(5:95, v/v) 혼합용액 5 mL를 유출시켜 버리고, 재차 아세토니트릴:물(30:70, v/v) 혼합용액 10 mL를 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 플라스크에 받는다. 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물에 아세토니트릴 10 mL를 넣어 녹인 후 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
3.0	80	20
4.0	50	50
5.5	50	50
6.5	55	45
7.0	70	30
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 1 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) Cone voltage: 14 V(SYN503780), 30 V(CSCD686480)

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
SYN503780	5.4	279.2	279.0	280	2041)	19
					59	16
CSCD686480	4.9	265.2	265.0	266	2041)	16
					128	34
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: SYN503780(5.4분), B: CSCD686480(4.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
SYN503780: 0.005 mg/kg, CSCD686480: 0.005 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 SYN503780 및 CSCD686480을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 각 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한 후 각각의 환산계수를 곱하여 비사이클로피론으로 정량한다.
* 비사이클로피론 환산계수
① SYN503780에 대한 비사이클로피론 환산계수 = 1.43(비사이클로피론 분자량     399/SYN503780 분자량 279)
② CSCD686480에 대한 비사이클로피론 환산계수 = 1.51(비사이클로피론 분자량 399/CSCD686480 분자량 265)

7.1.3.73 클로피랄리드(Clopyralid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 C18과 알루미나를 이용하여 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣은 후 30분간 방치) 50 mL 원심분리관에 넣고 5% 포름산을 포함한 아세토니트릴 용액 20 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 원심분리관에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산나트륨2수화물 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g을 넣고 1분간 강하게 흔든 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
C18(55～105 μm) 350 mg과 알루미나(activated, neutral, 46～279 μm) 0.1 g이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 10 mL를 취하여 넣은 후, 1분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리하여 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
0.5	95	5
3.0	5	95
5.0	5	95
7.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 0.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
클로피랄리드 (Clopyralid)	3.9	192.0	190.9	192	1461)	17
					174	10
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

클로피랄리드(3.9분)
그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 클로피랄리드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.74 아세토클로르(Acetochlor)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아세토클로르, EMA 및 HEMA 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), GCB(Graphitized Carbon Black), C18(octadecy bonded silica), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치). 여기에 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 5분간 강하게 흔든 후, 무수황산마그네슘 6 g, 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 5분간 강하게 흔들고, 4℃, 4,500 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg과 GCB 45 mg, PSA 400 mg, C18 400 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴층 전량을 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
3.0	100	0
3.1	50	50
4.5	50	50
4.6	20	80
6.5	20	80
8.0	100	0
10.0	100	0

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아세토클로르 (Acetochlor)	6.1	269.8	269.1	270	2241)	12
					148	22
					133	33
에이치이엠에이 (HEMA)	4.5	151.2	151.0	152	1191)	24
					134	14
					91	35
이엠에이 (EMA)	5.2	135.2	135.1	136	911)	24
					117	23
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 아세토클로르(6.1분), B: 이엠에이(5.2분), C: 에이치이엠에이(4.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로  아세토클로르 및 대사산물 EMA, HEMA를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.75 플로르피록시펜벤질(Florpyrauxifen-benzyl)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 C18 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플로르피록시펜벤질 및 XDE-848 acid 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) C18 카트리지: C18(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 20 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 50 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물을 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기에 통과시켜 흡인 여과하고 아세토니트릴 20 mL로 잔류물 및 용기를 씻어내려 앞의 여과액과 합친 뒤 40℃ 이하에서 감압 농축한다. 잔류물에 물 100 mL를 넣어 흔들어 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 디클로로메탄 30 mL를 차례로 넣어 강하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치하고, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 농축플라스크에 받고, 남아있는 수용액층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복한다. 이 후 남아있는 수용액층에 1 N 염산을 천천히 가해 pH 3으로 조절하여 디클로로메탄 30 mL를 차례로 넣고 강하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 농축플라스크에 받는다. 수용액 층에 디클로로메탄 30 mL를 추가로 넣어 위의 과정을 반복하고 합친 분배 추출액을 40℃ 이하에서 감압 농축, 용매를 완전 증발시킨다. 잔류물을 메탄올:디클로로메탄(40:60, v/v) 혼합용액 10 mL에 녹인다.

2) 정제
C18 카트리지에 1～2 방울/초의 속도로 디클로로메탄 5 mL를 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 직전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 감압농축플라스크에 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올:디클로로메탄(10:90, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣고 용출액을 농축플라스크에 받은 후 40℃ 이하에서 감압 농축, 용매를 완전 증발시킨다. 잔류물을 아세토니트릴 5 mL에 녹인 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 사용한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
4.0	20	80
9.0	20	80
12.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로르피록시펜벤질 (Florpyrauxifen-benzyl)	5.8	439.2	438.0	439	911)	22
					393	27
XDE-848 acid	4.3	349.1	347.9	349	3031)	22
					268	30
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 플로르피록시펜벤질(5.8분), B: XDE-848 acid(4.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플로르피록시펜벤질 및 대사산물 XDE-848 acid를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.76 트리데모르프(Tridemorph)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 아미노 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge): 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 20 g을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 40 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물은 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 500 mL 용량의 분액깔때기에 옮기고 염화나트륨 10 g을 넣고 강하게 흔든다. 층이 완전히 분리될 때까지 정치시킨 후 아세토니트릴층을 무수황산나트륨에 통과시켜 100 mL 메스플라스크에 받고, 아세토니트릴을 이용하여 100 mL로 정용한 후, 20 mL를 농축플라스크에 취한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 후, 메탄올:디클로로메탄(1:99, v/v) 혼합용액 5 mL로 녹인다.

2) 정제
아미노 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 감압농축플라스크에 받으며, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올:디클로로메탄(1:99, v/v) 혼합용액 7 mL를 추가로 용출하여 합한다. 합친 용출액을 40℃ 이하에서 감압농축 후 잔류물에 아세토니트릴을 넣어 최종부피 5 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
3.0	70	30
4.0	30	70
6.0	30	70
10.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리데모르프 (Tridemorph)	5.5	297.5	297.3	298	1301)	26
					98	29
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

트리데모르프(5.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 트리데모르프를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.77 스트렙토마이신(Streptomycin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출하고 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품(streptomycin sulfate)을 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 스트렙토마이신은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정에서 폴리프로필렌 재질의 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류의 경우 물 5 mL, 두류의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 메탄올 20 mL를 넣어 강하게 흔들고 포름산을 넣어 추출용액의 pH를 3으로 맞춘다. 추출물에 염화나트륨 2 g을 넣어 강하게 흔들고 15분간 강하게 흔들어 섞은 후, 4℃, 7,500 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 전량을 취한다(두류의 경우 원심분리관을 4℃, 7,500 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 한 번 더 원심분리하여 상층액 전량을 취하고 앞의 상층액과 합함). 새 원심분리관에 취하여진 상층액은 메탄올을 이용하여 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: Amide계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 150 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액(포름산을 이용하여 pH를 4.5로 조절)

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	5	95
2.0	5	95
6.0	100	0
7.0	100	0
7.1	5	95
10.0	5	95

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.3 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스트렙토마이신 (Streptomycin)	5.2	581.6	581.2	582	2631)	30
					221	36
					246	38
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

스트렙토마이신(5.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 스트렙토마이신을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.78 발리다마이신-에이(Validamycin-A)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올과 물 혼합용액으로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 발리다마이신-에이는 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정에서 폴리프로필렌 재질의 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 폴리프로필렌 용기에 넣고 메탄올:물(50:50, v/v) 혼합용액을 10 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한 후 4℃, 4,500 ×g, 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심 분리한다. 상층액을 모두 옮긴 후 메탄올:물(50:50, v/v) 혼합용액을 10 mL를 넣어 위 과정을 반복한다(2회). 앞의 여과액과 합친 후 물을 이용하여 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출액 5 mL를 카트리지에 넣고 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 받고 고정상 상단이 노출되기 전에 물 5 mL를 용출하여 받는다. 이 과정을 통해 얻은 용액 10 mL를 멤브레인 필터(PVDF, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: Amide계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	0	100
2.5	0	100
2.6	90	10
7.0	90	10
8.0	0	100
10.0	0	100

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
발리다마이신-에이 (Validamycin A)	4.5	497.5	497.2	498	1781)	23
					336	26
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

발리다마이신-에이(4.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 발리다마이신에이를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.79 톨피라레이트(Tolpyralate)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류 및 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica), GCB(Graphitized Carbon Black)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 50 mg, C18 50 mg, GCB 7.5 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 50 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
2.0	80	20
2.5	20	80
5.0	20	80
5.5	80	20
7.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 30℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
톨피라레이트 (Tolpyralate)	3.5	484.5	484.1	485	1391)	31
					325	20
					383	14
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

톨피라레이트(3.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 톨피라레이트를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.80 펜퀴노트리온(Fenquinotrione)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 2% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene–N-vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 2% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 4 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
HLB 카트리지에 아세토니트릴 5 mL를 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 추가로 넣어 용출하고 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
3.0	80	20
3.5	0	100
7.0	0	100
8.0	80	20
10.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 1 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
펜퀴노트리온 (Fenquinotrione)	5.1	424.8	424.0	425	2851)	30
					257	36
					313	22
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

펜퀴노트리온(5.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 펜퀴노트리온을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.81 메타자클로르(Metazachlor)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 479M04, 479M08, 479M16 표준품을 각각 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 10분간 방치) 아세토니트릴 25 mL를 가한 뒤(곡류와 두류의 경우 염화나트륨 4 g을 넣는다.) 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 포름산을 이용하여 추출액의 pH를 3으로 맞춘다. 10분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 둥근바닥플라스크에 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 25 mL를 재차 넣어 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 40℃이하에서 감압 농축한 후 건고물을 메탄올 12.5 mL에 녹인다.

2) 정제
HLB 카트리지에 아세토니트릴 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 추가로 넣어 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(PVDF, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
3.0	90	10
5.0	10	90
7.0	10	90
7.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
479M04	4.9	273.3	273.1	274	1341)	18
					162	7
					206	11
479M08	5.0	323.4	323.0	324	1341)	26
					105	42
					256	11
479M16	4.9	379.4	379.1	380	1341)	20
					179	15
					312	9
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

479M04(4.9분), 479M08(5.0분), 479M16(4.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 479M04, 479M08 및 479M16을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량하고, 479M04의 잔류량에 환산계수 1.02[(메타자클로르의 분자량(277.8)/479M04의 분자량(273.3)], 479M08의 잔류량에 환산계수 0.86[(메타자클로르의 분자량(277.8)/479M08의 분자량(323.4)], 479M16의 잔류량에 환산계수 0.73[(메타자클로르의 분자량(277.8)/479M16의 분자량(379.4)]을 곱하여 그 합을 메타자클로르로 한다.

7.1.3.82 트리플루메조피림(Triflumezopyrim)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), GCB(Graphitized Carbon Black)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 15 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들고 포름산을 넣어 추출용액의 pH를 5로 맞춘다. 추출물에 무수황산마그네슘 3 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 750 mg과 C18 250 mg, GCB 30 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 5 mL를 넣어 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리하다. 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
1.1	70	30
4.0	70	30
4.1	30	70
7.0	30	70
7.1	70	30
8.0	70	30
8.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리플루메조피림 (Triflumezopyrim)	5.3	398.3	398.0	399	2781)	28
					121	30
					306	26
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

트리플루메조피림(5.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 트리플루메조피림을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다

7.1.3.83 아미노피랄리드(Aminopyralid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 가수분해한 분석대상물질을 염산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 가수분해 및 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 10분간 방치) 아세토니트릴 20 mL와 5 N 수산화나트륨 용액 1 mL를 넣어 40℃에서 20분간 추출 및 가수분해한다. 가수분해 후 추출물에 6 N 염산 2 mL를 넣어 15분간 흔들어 섞고, 무수황산마그네슘 6 g과 염화나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 흔든 뒤 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액 5 mL를 취하여 40℃에서 질소 농축한 후 건고물을 메탄올 5 mL에 녹인다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 추가로 넣어 1～2 방울/초의 속도로 용출하여 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 40℃에서 질소 농축한 뒤 0.5% 포름산 함유 아세토니트릴로 부피를 5 mL로 맞추고 멤브레인 필터(PVDF, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.5%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
3.0	0	100
6.0	0	100
6.1	80	20
12.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아미노피랄리드 (Aminopyralid)	6.3	207.0	205.9	207	1611)	29
					134	41
					189	17
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

아미노피랄리드(6.3분)
그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아미노피랄리드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.84 피녹사덴(Pinoxaden)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1 N 염산으로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 피녹사덴 대사산물(M4)을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 200 mL 둥근바닥플라스크에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 5g에 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 1 N 염산 100 mL를 가한 뒤 환류냉각기를 부착하여 2시간 가열한다. 상온에서 냉각시킨 후 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한 뒤 원심분리관에 10 mL를 넣고 3% 암모니아수를 이용하여 pH 4～5로 맞춘다.

※ 지방성 시료(곡류, 두류 등)의 경우 미리 아세토니트릴포화헥산 20 mL를 넣고 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 수용액 층을 취하고 이를 2회 반복한다.

2) 정제
HLB 카트리지를 메탄올 5 mL와 물 5 mL를 차례로 넣어 2～3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 추출물 전량을 카트리지 상단에 넣어 1～2 방울/초의 속도로 유출시켜 버리고, 10% 메탄올 5 mL로 유출시켜 버린 후, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 넣고 용출하여 받는다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
3.0	90	10
5.0	60	40
5.1	10	90
7.0	10	90
7.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
피녹사덴 M4 (Pinoxaden M4)	5.3	332.4	332.1	333	3031)	13
					101	26
					315	12
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

피녹사덴 M4(5.3분)
그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 피녹사덴 대사산물(M4)을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량하고, 피녹사덴 M4의 잔류량에 환산계수 1.20[(피녹사덴의 분자량(400.5)/피녹사덴 M4의 분자량(332.4)]을 곱하여 피녹사덴으로 한다.

7.1.3.85 옥시테트라사이클린(Oxytetracycline)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품(Oxytetracycline hydrochloride)을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica), GCB(Graphitized Carbon Black)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 메탄올 15 mL를 가한 뒤 1분간 강하게 흔들고 포름산을 넣어 추출용액의 pH를 4로 맞춘다. 추출물에 염화나트륨 1 g을 넣고 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg과 PSA 400 mg, C18 400 mg, GCB 45 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 넣은 후 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 50 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
4.0	95	5
4.1	5	95
5.6	5	95
5.7	95	5
6.0	100	0
8.0	100	0
8.1	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
옥시테트라사이클린 (Oxytetracycline)	5.5	460.4	460.1	461	4261)	21
					201	35
					443	15
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

옥시테트라사이클린(5.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 옥시테트라사이클린을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.86 아사이노나피르(Acynonapyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 아사이노나피르 및 대사산물(AP) 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 대사산물(AP)은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 1 N 수산화나트륨 용액으로 추출용액의 pH를 10으로 조절한 뒤 10분간 흔들어 섞는다. 추출물에 염화나트륨 4 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 아세토니트릴 상층액 1 mL를 넣은 후 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(3.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
2.0	50	50
4.0	20	80
8.0	0	100
9.0	0	100
9.1	50	50
12.0	50	50

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아사이노나피르 (Acynonapyr)	7.5	504.5	504.1	505	3421)	10
					96	26
					122	32
대사산물 (AP)	3.9	343.4	343.1	344	821)	32
					96	32
					124	24
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 아사이노나피르(7.5분), B: AP(3.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아사이노나피르 및 대사산물(AP)을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

※ 아사이노나피르의 잔류량 = 아사이노나피르의 잔류량 ＋ (환산계수* × 대사산물(AP)의 잔류량)
* 환산계수 = 1.47(아사이노나피르 분자량 505/AP 분자량 343)

7.1.3.87 아피도피로펜(Afidopyropen)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 0.1%(v/v) 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg, C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
6.0	10	90
8.0	10	90
8.1	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아피도피로펜(Afidopyropen)	5.0	593.7	593.2	594	1481)	43
					202	45
					106	45
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

아피도피로펜(5.0분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아피도피로펜을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.88 가스가마이신(Kasugamycin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 HLB 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품(Kasugamycin hydrochloride)을 물에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) HLB 카트리지(Hydrophilic-lipophilic balance cartridge): Divinylbenzene-N- vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

7) 특이사항: 가스가마이신은 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정은 폴리프로필렌으로 된 용기를 사용하며, 시험용액은 조제 후 즉시 분석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 메탄올 10 mL를 넣은 뒤 1분간 흔들고 1 N 수산화나트륨 용액을 넣어 추출용액의 pH를 13으로 맞춘다. pH 조절 후 10분간 강하게 흔들어 섞고 4℃, 7,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 전량을 취하는 방법으로 2회 반복 추출한다. 취하여진 상층액에 메탄올을 넣어 부피를 25 mL로 맞춘다.

2) 정제
HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 넣고 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 받고, 고정상 상단이 노출되기 전에 메탄올 5 mL를 카트리지 상단에 넣고 1∼2 방울/초의 속도로 용출시켜 앞서 받은 액과 합쳐 부피를 10 mL로 맞춘다. 정제된 용액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: HILIC(아마이드계) 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	10	90
2.0	10	90
2.1	30	70
7.0	90	10
7.5	90	10
8.0	10	90
10.0	10	90

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
가스가마이신 (Kasugamycin)	3.7	379.4	379.1	380	1121)	21
					156	14
					200	15
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

가스가마이신(3.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 가스가마이신을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.89 펜피콕사미드(Fenpicoxamid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣는다(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 5 mL 넣은 후 30분간 방치). 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 섞고 4,000 ×g에서 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액 전량을 취한 후 아세토니트릴 20 mL를 재차 넣어 위 과정을 반복한다. 앞의 상층액과 합하여 부피를 50 mL로 맞춘 후 상층액 8 mL를 취한다.

2) 정제
PSA 400 mg 및 C18 400 mg이 미리 담겨져 있는 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 넣고 30초간 흔들어 섞고 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 4 mL 취하여 질소 농축한 후 아세토니트릴 2 mL로 녹이고, 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
3.0	80	20
3.5	10	90
5.0	0	100
7.0	0	100
8.0	80	20
10.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
펜피콕사미드 (Fenpicoxamid)	4.8	614.6	614.2	615	2391)	37
					515	20
					585	16
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

펜피콕사미드(4.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 펜피콕사미드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.90 프로티오코나졸(Prothioconazole)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 프로티오코나졸-데스티오 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 후 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
2.0	70	30
5.0	10	90
6.0	0	100
8.0	0	100
8.5	70	30
10.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 칼럼 온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
프로티오코나졸 -데스티오 (Prothioconazole -desthio)	4.7	312.2	311.0	312	701)	20
					125	34
					189	18
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

프로티오코나졸-데스티오(4.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 프로티오코나졸-데스티오를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.91 에티프롤(Ethiprole)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등의 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류의 경우 물 5 mL 및 두류의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PVDF, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
2.0	95	5
4.0	20	80
6.0	10	90
7.0	10	90
7.5	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
에티프롤 (Ethiprole)	4.7	397.2	395.9	397	2551)	34
					228	46
					351	16
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

에티프롤(4.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 에티프롤을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.92 디클로벤티아족스(Dichlobentiazox)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴:물(90:10, v/v) 혼합용액에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
1.0	50	50
2.0	30	70
7.0	0	100
8.0	0	100
8.1	50	50
10.0	50	50

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
디클로벤티아족스 (Dichlobentiazox)	3.4	349.2	347.9	349	1661)	22
					196	12
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

디클로벤티아족스(3.4분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 디클로벤티아족스를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.93 니트라피린(Nitrapyrin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 2% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction) 및 HLB 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 니트라피린 및 대사산물(6-CPA) 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) HLB 카트리지(Hydrophilic-Lipophilic Balance cartridge): Divinylbenzene-N -vinylpyrrolidone copolymer(500 mg) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류 등 건조시료의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 2% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 니트라피린 분석에는 상층액 1 mL을 취하고, 대사산물 분석에는 상층액 3 mL를 취하여 전량 질소 농축한 후 물을 이용하여 3 mL로 맞춘다.

2) 정제

가) 니트라피린
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

나) 대사산물(6-CPA)
HLB 카트리지에 메탄올 3 mL와 물 3 mL를 차례로 가하여 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 활성화한 후 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 용액 3 mL를 카트리지 상단에 가하여 1∼2 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이어서 물 3mL로 씻어 버린 후, 고정상 상단이 노출되기 전에 아세토니트릴:물(50:50, v/v) 혼합용액 3 mL를 가하고 용출하여 받는다. 고정상 상단이 노출되기 전 아세토니트릴:물(50:50, v/v) 혼합용액 3 mL를 추가로 가하여 앞서 받은 액과 합한다. 용출액은 3 mL까지 질소 농축하여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨 또는 이와 동등한 것, 1.2 mL/분

다) 오븐 온도: 90℃에서 3분간 유지한 후 45℃/분의 속도로 180℃까지 승온하고 5℃/분의 속도로 200℃까지 승온하고 다시 100℃/분의 속도로 300℃까지 승온하고 5분간 유지

라) 주입부 온도: 280℃

마) Interface 온도: 280℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
니트라피린 (Nitrapyrin)	6.6	230.9	228.9	194	1331)	16
					158	18
				196	135	16
1) 정량이온

2) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
2.0	95	5
7.0	10	90
8.0	10	90
8.5	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

3) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
6-CPA	4.3	157.6	156.9	158	1121)	25
					140	15
1) 정량이온

4) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

5) 표준품 크로마토그램

니트라피린(6.6분)

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

6-chloropyridine-2-carboxylic acid(4.3분)

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

6) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래피-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 니트라피린 및 대사체를 확인한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이 또는 면적에 따라 정량한다.
※ 니트라피린의 잔류량 = 니트라피린의 잔류량 + (환산계수* × 6-CPA의 잔류량)
* 환산계수 = 1.47(니트라피린 분자량 231 / 6-CPA 분자량 157)

7.1.3.94 멥틸디노캅(Meptyldinocap)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 수산화나트륨을 이용하여 대사산물 2,4-DNOP(2,4-dinitro-6-(1-methylheptyl)phenol)로 가수분해하고, d-SPE(dispersive -Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 2,4-DNOP 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 염화나트륨 3 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액 5 mL를 취한다. 5 N 수산화나트륨 0.5 mL를 첨가하여 60℃ 수욕상에서 30분간 가수분해한 후 5 N 염산 0.5 mL를 첨가하여 중화시키고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
2.0	70	30
3.0	15	85
6.0	5	95
8.0	5	95
8.1	70	30
10.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
2,4-DNOP	5.1	364.4	296.1	295	1931)	28
					134	52
					163	40
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

2,4-DNOP(5.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 2,4-DNOP를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
* 멥틸디노캅 환산계수
대사산물(2,4-DNOP)에 대한 멥틸디노캅 환산계수 = 1.23(멥틸디노캅 분자량 364/2,4-DNOP      분자량 296)

7.1.3.95 플로릴피콕사미드(Florylpicoxamid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플로릴피콕사미드와 X12485649 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
1.0	80	20
3.0	50	50
7.0	0	100
8.0	0	100
8.5	80	20
10.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로릴피콕사미드 (Florylpicoxamid)	6.1	512.5	512.1	513	2311)	21
					241	17
					471	15
X12485649	6.0	470.5	470.1	471	2311)	15
					109	22
					241	16
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 플로릴피콕사미드(6.1분), B: X12485649(6.0분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플로릴피콕사미드와 X12485649를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.96 이프플루페노퀸(Ipflufenoquin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	80	20
2.0	80	20
5.0	0	100
8.0	0	100
8.1	80	20
10.0	80	20

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이프플루페노퀸 (Ipflufenoquin)	4.9	347.3	347.1	348	3301)	19
					166	38
				180	27	16
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

이프플루페노퀸(4.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 이프플루페노퀸을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.97 아이소사이클로세람(Isocycloseram)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 0.1% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 흔들고, 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
0.5	90	10
4.0	5	95
8.0	5	95
8.1	90	10
12.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 2.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
아이소사이클로세람 (Isocycloseram)	4.7	548.3	547.1	548	4181)	21
					160	43
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

아이소사이클로세람(4.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 아이소사이클로세람을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.98 스피로피디온(Spiropidion)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 스피로피디온, 스피로피디온-엔올(SYN547305) 표준품을 각각 아세토니트릴:물(50:50, v/v) 혼합용액에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), GCB(Graphitized Carbon Black)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 10 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg, GCB 2.5 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
2.0	90	10
2.5	70	30
4.0	50	50
8.0	10	90
9.0	0	100
10.0	0	100
10.5	90	10
12.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피로피디온 (Spiropidion)	8.7	422.9	422.1	423	2881)	26
					264	34
					351	16
스피로피디온-엔올 (Spiropidion-enol, SYN547305)	6.5	350.9	350.1	351	2881)	22
					264	28
					319	14
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A

B

A: 스피로피디온(8.7분), B: 스피로피디온-엔올(SYN547305)(6.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 스피로피디온, 스피로피디온-엔올(SYN547305)을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
※ 스피로피디온의 잔류량 = 스피로피디온의 잔류량 + (환산계수*×스피로피디온-엔올의 잔류량)
* 환산계수 = 1.2(스피로피디온 분자량 423 / 스피로피디온-엔올 분자량 351)

7.1.3.99 플루피리민(Flupyrimin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플루피리민 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 2% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 흔들고, 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	100	0
2.0	100	0
4.0	50	50
6.0	10	90
8.0	10	90
8.1	100	0
12.0	100	0

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루피리민(Flupyrimin)	6.7	315.7	315.0	316	1261)	20
					99	45
					90	20
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

플루피리민(6.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플루피리민을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.100 플루인다피르(Fluindapyr)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 플루인다피르 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	70	30
2.0	70	30
4.0	60	40
5.0	20	80
7.0	0	100
8.0	0	100
8.5	70	30
10.0	70	30

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루인다피르 (Fluindapyr)	6.0	351.4	351.1	352	2561)	25
					276	24
					312	25
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

플루인다피르(6.0분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플루인다피르를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.101 플루옥사스트로빈(Fluoxastrobin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: (E)-플루옥사스트로빈 및 (Z)-플루옥사스트로빈 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	50	50
1.0	50	50
5.0	40	60
7.0	0	100
8.0	0	100
8.5	50	50
10.0	50	50

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
(E)-플루옥사스트로빈 ((E)-Fluoxastrobin)	5.3	458.8	458.1	459	4271)	15
					188	33
					102	57
(Z)-플루옥사스트로빈 ((Z)-Fluoxastrobin)	6.3	458.8	458.1	459	4271)	15
					188	33
					102	57
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: (E)-플루옥사스트로빈(5.3분), B: (Z)-플루옥사스트로빈(6.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 (E)-플루옥사스트로빈 및 (Z)-플루옥사스트로빈을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.102 트리플루디목사진(Trifludimoxazin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 트리플루디목사진 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
3.0	40	60
7.0	10	90
8.0	10	90
8.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 1.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
트리플루디목사진(Trifludimoxazin)	6.7	412.3	412.0	413	1341)	52
					189	34
					141	44
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

트리플루디목사진(6.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 트리플루디목사진을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.103 클로로탈로닐(Chlorothalonil)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE (dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 1% 포름산을 함유한 수용액 10 mL 넣은 후 30분간 방치) 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg, C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.45 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.5 mL/분

다) 오븐 온도: 90℃에서 시험용액을 주입하여 1분간 유지한 후 30℃/분의 비율로 180℃까지 상승시키고 20℃/분의 비율로 300℃까지 상승시켜 3분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 주입부 온도: 250℃

바) 인터페이스 온도: 280℃

사) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)		생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
클로로탈로닐 (Chlorothalonil)	6.9	265.9	263.9	266	1331)		45
					170		30
				264	168		30
1) 정량이온

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

클로로탈로닐(6.9분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 클로로탈로닐을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.104 페톡사미드(Pethoxamid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 20 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
3.0	30	70
7.0	10	90
8.0	10	90
8.1	90	10
10.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
페톡사미드 (Pethoxamid)	4.3	295.8	295.1	296	1311)	20
					91	33
					250	12
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

페톡사미드(4.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 페톡사미드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.105 베플루부타미드(Beflubutamid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
7.0	0	100
8.0	0	100
8.1	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
베플루부타미드 (Beflubutamid)	6.6	355.3	355.1	356	911)	20
					177	17
					221	20
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

베플루부타미드(6.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 베플루부타미드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.106 레피멕틴(Lepimectin)

가. 시험법의 적용범위
곡류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 레피멕틴(A3 및 A4) 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 500 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세토니트릴에 녹여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다.

5) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh) 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관하여 사용한다.

6) 아미노프로필 카트리지(Amino-propyl cartridge): 아민(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 30 g(곡류, 두류는 20 g)을 정밀히 달아 추출 용기에 넣고(곡류, 두류 등 건조 시료는 물 20 mL를 넣고 2시간 방치) 메탄올 100 mL를 넣어 2～3분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과하고, 잔류물을 메탄올 40 mL로 씻어 내려 앞의 여과액과 합친다. 합친 여과액을 1 L 용량의 분액깔때기에 옮기고 디클로로메탄 50 mL, 포화염화나트륨용액 50 mL 및 물 450 mL를 넣고 강하게 흔들어 정치하여 층을 분리시킨 후, 디클로로메탄층을 무수황산나트륨에 통과시켜 감압농축플라스크에 받는 과정을 2회 반복한다. 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하고, 잔류물을 디클로로메탄 10 mL로 녹인다. ※ 곡류 및 두류 등 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.
※ 곡류 및 두류 등 지방성 시료의 경우 상기 잔류물을 아세토니트릴포화헥산 50 mL로 녹여 분액깔때기에 옮기고 헥산포화아세토니트릴 50 mL로 2회 분배 추출하여 아세토니트릴층을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 디클로로메탄 10 mL에 녹인다.

2) 정제

가) 플로리실 정제: 안지름 11 mm, 길이 400 mm의 유리컬럼에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨을 2 cm 높이로 차례로 충전한 후 디클로로메탄 50 mL를 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 ‘1) 추출’로부터 얻은 디클로로메탄 용액 10 mL를 고정상 상단에 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 에틸아세테이트:디클로로메탄(10:90, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 유출시켜 버리고 다시 메탄올:에틸아세테이트(0.5:99.5, v/v) 혼합용액 50 mL를 넣어 용출하여 감압농축플라스크에 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 헥산 10 mL로 녹인다.

나) 아민 카트리지 정제: 미리 헥산 10 mL로 활성화한 아민 카트리지에 상기 헥산 용액을 넣어 유출시켜 버린다. 고정상 상단이 노출되기 전에 톨루엔 5 mL를 넣어 유출시켜 버리고 디클로로메탄 10 mL와 아세톤:디클로로메탄(20:80, v/v) 혼합용액 5 mL로 2회 용출하여 받는다. 이 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 잔류물에 물:아세토니트릴(30:70, v/v) 혼합용액을 넣어 최종부피 2 mL가 되게 한 후 갈색 바이알(Vial)에 담아 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 물과 아세토니트릴(30:70, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 1 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 검출파장: 245 nm

바) 주입량: 20 μL

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

1: 레피멕틴 A3(19.7분), 2: 레피멕틴 A4(25.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
레피멕틴 A3(0.02 mg/kg), 레피멕틴 A4(0.02 mg/kg)

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

자. 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 레피멕틴을 확인한다.

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 150 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: A 및 B의 이동상(40:60, v/v)의 혼합용액

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 아세토니트릴과 물(90:10, v/v)의 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positve ion mode)

사) 분자량 범위: 300～800 m/z

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
레피멕틴 A3 (Lepimectin A3)	6.0	705.8	705.3	728
레피멕틴 A4 (Lepimectin A4)	6.5	719.9	719.3	743

7.1.3.107 톨릴플루아니드(Tolylfluanid)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE (dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 1% 포름산을 함유한 수용액 10 mL 넣은 후 30분간 방치) 1% 포름산을 함유한 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	30	70
6.0	5	95
9.0	5	95
9.5	95	5
12.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 2.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상성분의 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
톨릴플루아니드 (Tolylfluanid)	5.1	347.3	346.0	347	1371)	25
					238	10
					110	40
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

톨릴플루아니드(5.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 톨릴플루아니드를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.108 플루아자인돌리진(Fluazaindolizine)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
7.0	0	100
8.0	0	100
8.1	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

나) Capillary voltage: 3.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루아자인돌리진 (Fluazaindolizine)	5.7	468.2	466.9	466	1571)	27
					142	36
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

플루아자인돌리진(5.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플루아자인돌리진을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.109 인피르플룩삼(Inpyrfluxam)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL를 넣고 30분간 방치) 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g, 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g, 구연산삼나트륨·2수화물 1 g을 넣은 후 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg, PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
15.0	0	100
16.0	0	100
16.1	95	5
18.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 350℃

다) Capillary voltage: 4.5 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
인피르플룩삼 (Inpyrfluxam)	8.8	333.4	333.2	334	2581)	20
					294	18
					314	16
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

인피르플룩삼(8.8분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 인피르플룩삼을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.1.3.110 플루옥사피프롤린(Fluoxapiprolin)

가. 시험법 적용범위
곡류, 서류, 두류, 과일류, 채소류 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(곡류 및 두류의 경우, 시료 5 g을 정밀히 달아 물 5 mL 첨가 후 30분간 방치) 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 추출물에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 추가하여 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 PSA 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 가하고 30초간 강하게 흔들어 섞은 다음 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
7.0	0	100
8.0	0	100
8.1	95	5
10.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 450℃

다) Capillary voltage: 3.0 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플루옥사피프롤린(Fluoxapiprolin)	4.7	650.1	649.0	650	6101)	22
					157	46
					193	38
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

플루옥사피프롤린(4.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플루옥사피프롤린을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.2 인삼 중 잔류농약 시험법

7.2.1 다성분 시험법(multi-residue method)

7.2.1.1 비에이치시(BHC), 린단(Lindane, γ-BHC), 디디티(DDT), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 캡탄(Captan), 엔도설판(Endosulfan), 퀸토젠(Quintozene), 다이아지논(Diazinon), 파라티온(Parathion)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD) 및 질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에 보관하여 사용한다.

4) 여과보조제: 셀라이트 545(celite 545) 또는 하이플로슈퍼셀(Hyflo Super Cel) 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액: 비에이치시(α, β 및 δ-BHC), 린단(Lindane, γ-BHC), 디디티(p,p'-DDT, o,p'-DDT, p,p'-DDE 및 p,p'-TDE(DDD)), 알드린(Aldrin), 디엘드린(Dieldrin), 엔드린(Endrin), 캡탄(Captan), 엔도설판(α-endosulfan, β-endosulfan 및 Endosulfan sulfate), 퀸토젠(Quintozene), 다이아지논(Diazinon), 파라티온(Parathion)을 각각 헥산 등에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 각각 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 100 g을 정밀히 달고, 건조삼은 10～20 g을 정밀히 달아 이에 물 100 mL를 넣고 약 1시간 방치한다. 인삼농축액은 10～20 g을 정밀히 달아 물 100 mL 및 셀라이트 545 약 10 g을 넣는다.)를 추출 용기에 넣고 이에 아세토니트릴(또는 아세톤) 200 mL를 넣어 5분간 추출한 후 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 여과한다. 수삼 및 건삼의 잔류물은 다시 추출 용기에 넣고 아세토니트릴(또는 아세톤) 100 mL를 넣고 5분간 추출한 후 위와 같이 여과하고 합친 여과액에 아세토니트릴(또는 아세톤)을 넣어 일정량으로 하고 양을 기록한다. 인삼농축액은 부흐너깔때기 위의 잔류물을 아세토니트릴(또는 아세톤) 소량으로 씻고 씻은 액은 여과액에 합쳐 아세토니트릴(또는 아세톤)을 넣어 일정량으로 하고 여과액의 양을 기록한다. 여과액 중 시료에 따라 5～10 g에 해당하는 양을 취하여 1,000 mL의 분액깔때기에 넣고 석유에테르 100 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 이에 포화염화나트륨용액 10 mL 및 물 600 mL를 넣어 다시 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시키고 석유에테르층을 다른 분액깔때기에 취한다. 물층에 다시 석유에테르 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 석유에테르층을 위의 분액깔때기에 합쳐 물 100 mL 씩으로 2회 가볍게 흔들어 섞어 씻는다. 석유에테르층을 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하여 약 5 mL로 농축한다.

2) 정제
안지름 22 mm의 컬럼관에 플로리실 20 g과 무수황산나트륨 10 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 15% 에테르 함유 헥산 150 mL로 용출하고 이어서 50% 에테르함유헥산 200 mL로 하여 용출액을 40℃ 이하에서 감압 농축하고 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80 mesh 또는 80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 기체크로마토그래프용 5% DC-11, 2% OV-17, 2% DEGS+0.5% 인산, 2% QF-1, 2% PEGA, 2% DC-200+0.2% 에폭시수지 1009, 5% OV-17, 5% DC-200, 1.5% SE-30+1.5% QF-1, 5% XE-60, 0.5% XE-60 및 3% OV-17+4% QF-1(1:4)

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관 또는 캐필러리컬럼(HP-1, HP-5, HP-608 또는 이와 동등한 것)

다) 주입부 및 검출기의 온도: 250～300℃

라) 컬럼온도: 항온 또는 승온조건

(1) 항온조건의 예: 180～220℃

(2) 승온조건의 예: 120℃에서 시험용액을 주입하고 4분간 유지 후 8℃/분의 비율로 260℃까지 온도를 상승시켜 5분간 유지한다.

마) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1(캐필러리컬럼) 또는 30～50 mL/분(유리관)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성시험
컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 표준용액 및 시험용액을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간이 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래프를 하여 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라서 정량한다.
주1) BHC, 린단, DDT, 알드린, 디엘드린, 엔드린, 엔도설판, 퀸토젠, 다아아지논, 파라티온은 이 방법에 따라 정성 및 정량할 수 있으며, 캡탄은 검출 시 ‘7.2.2.1 캡탄’ 시험법에 따라 정량한다.
주2) 다이아지논, 파라티온의 측정은 ECD, NPD 모두 사용가능 하나 가능하면 질소․인검출기(NPD)를 사용하는 것이 좋다.
주3) 이 실험방법에 따라 실험할 때 기기측정시 크로마토그램의 상태가 좋지 않으면 컬럼 정제 전에 아세토니트릴분배를 병행하면 좋은 효과를 얻을 수 있다.

7.2.1.2 델타메트린(Deltamethrin), 디에토펜카브(Diethofencarb), 사이퍼메트린(Cypermethrin), 아족시스트로빈(Azoxystrobin), 톨릴플루아니드(Tolylfluanid), 톨클로포스메틸(Tolclofos-methyl), 피리메타닐(Pyrimethanil), 펜헥사미드(Fenhexamid)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 홍삼농축액, 인삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 GC 측정 농약은 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 측정하고 LC 측정 농약은 아미노프로필 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD), 질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD), 질량분석기(GC-MSD)

2) 액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 플로리실(Florisil) 및 아미노프로필 카트리지(amino-propyl cartridge): 플로리실(500 mg) 및 아미노프로필(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL) 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 각각 유기용매에 녹여 표준원액으로 사용한다.

4) 표준용액: 표준원액을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(건조삼 10 g, 수삼 40 g, 인삼농축액 5 g)를 정밀히 달아 추출용기에 넣고[건조삼은 물 30 mL를 넣고 2시간 방치, 인삼농축액은 물 30 mL 및 여과보조제(celite 545) 10 g을 넣고] 아세토니트릴 100 mL를 넣은 후 2～3분간 추출한다. 이를 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여과액을 염화나트륨 10～15 g이 들어있는 150 mL의 분액깔때기에 담고 마개(Teflon-lined)를 막은 후 1분간 강하게 흔들어 섞는다. 이를 약 1시간 정치하여 층을 분리시키고 아세토니트릴층과 물층을 분리시킨다.
주1) 용매 추출액을 저온에서 정치하면 층 분리가 빨라질 수 있음.

2) 농축

가) GC 측정 농약
1)의 상층액(아세토니트릴층) 20 mL를 50 mL의 비커에 취하여 40℃ 이하에서 공기 또는 질소가스를 통과시키면서 용매가 소량 남을 때까지 날려 보낸다. 다시 20% 아세톤 함유 헥산 2 mL를 넣고 교반하여 벽면의 잔류물을 완전히 녹인다.

나) 액체크로마토그래프 측정농약
1)의 상층액(아세토니트릴층) 20 mL를 50 mL의 비커에 취하여 40℃ 이하에서 공기 또는 질소가스를 통과시키면서 용매가 소량 남을 때까지 날려 보낸다. 다시 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 4 mL를 넣고 교반하여 벽면의 잔류물을 완전히 녹인다.

3) 정제

가) GC 측정 농약
미리 플로리실 카트리지에 헥산 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 위와 같은 방법으로 유출시켜 버린다. 이어서 2) 농축 가) GC 측정농약 항의 녹인 액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 20% 아세톤 함유 헥산 5 mL를 용출하여 동일 시험관에 모으고 내부표준물질을 넣는다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유량으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 20% 아세톤 함유 헥산에 녹여서 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.
주2) 정제과정 중에는 모든 카트리지의 충전제가 마르지 않도록 주의한다.

나) 액체크로마토그래프 측정 농약
미리 아미노-프로필 카트리지에 디클로로메탄 5 mL를 2～3 방울/초 정도의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 2) 농축 나) 액체크로마토그래프 측정농약 항의 녹인 액을 카트리지에 넣고 1～2 방울/초 정도의 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 다시 카트리지가 용매에 젖어 있는 상태에서 1% 메탄올 함유 디클로로메탄 7 mL로 용출하여 동일 시험관에 모으고 내부 표준물질을 넣는다. 용출액은 40℃ 이하에서 질소 또는 공기를 낮은 유량으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 메탄올(액체크로마토그래프 대상농약은 아세토니트릴)에 녹여 일정량으로 한 후 멤브레인 필터(PTFE, 0.45 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) GC-ECD

(1) 컬럼: DB-5 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17 컬럼(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

(3) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃(DB-17의 경우 270℃)까지 온도를 상승시켜 10분 이상(DB-17의 경우 15분 이상) 유지한다.

(4) 주입부 온도: 260℃

(5) 주입 방법: Split mode(50:1)

(6) 검출기 온도: 280℃

나) GC-NPD

(1) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

(3) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃(DB-17의 경우 270℃)까지 온도를 상승시켜 10분 이상(DB-17의 경우 15분 이상) 유지한다.

(4) 주입부 온도: 260℃

(5) 주입 방법: Splitless mode

(6) 검출기 온도: 280℃

다) GC-FPD

(1) 컬럼: DB-5(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 DB-17(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

(3) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 250℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

(4) 주입부 온도: 250℃

(4) 주입 방법: Splitless mode

(5) 검출기 온도: 220℃

라) GC-MSD

(1) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

(2) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 0.9 mL/분

(3) 오븐 온도: 100℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 15분 이상 유지한다.

(4) 주입부 온도: 260℃

(5) 주입 방법: Split mode(10:1)

(6) 인터페이스 온도: 280℃

2) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 액체크로마토그래프

(1) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

(2) 검출파장: 254 nm

(3) 이동상: 아세토니트릴과 물(70:30, v/v)의 혼합용액

(4) 이동상 유량: 1 mL/분

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

사. 정성 및 확인시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.
주3) GC-MSD상의 머무름 시간 및 질량 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.2.2 단성분 시험법(Individual residue method)

7.2.2.1 캡탄(Captan)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 홍삼농축액, 인삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에 보관하여 사용한다.

4) 여과보조제: 셀라이트 545(celite 545) 또는 하이플로슈퍼셀(Hyflo Super Cel) 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 100 g, 건조삼은 10～20 g을 정밀히 달아 이에 물 100 mL를 넣고 약 1시간 방치한다. 인삼농축액은 10～20 g을 정밀히 달아 이에 물 100 mL 및 셀라이트 545 약 10 g을 넣는다)를 추출용기에 넣고 이에 아세톤 200 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지위에 셀라이트 545를 1 cm 깔은 흡인여과기로 여과한다. 수삼 및 건조삼의 잔류물은 다시 추출용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 여과한다. 이 여과액에 아세톤을 넣어 일정량으로 하고 양을 기록한다. 인삼농축액은 흡인여과기 위의 잔류물을 아세톤 소량으로 흡인여과기 위의 여과지를 씻고, 씻은 액은 여과액과 합쳐 아세톤을 넣어 일정량으로 하고 양을 기록한다.
여과액 중 시료에 따라 5～10 g에 해당하는 양을 취하여 1,000 mL의 분액깔때기에 넣고 석유에테르 100 mL 및 디클로로메탄 100 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하고 이에 포화염화나트륨용액 10 mL 및 물 600 mL를 넣어 다시 1분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리시키고 층을 분리시키고 용매층을 다른 분액깔때기에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 100 mL 씩으로 2회 넣고 위와 같이 되풀이하여 용매층을 합쳐 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 아세톤 10 mL에 녹인다. 이를 다시 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 아세톤 10 mL에 녹인다. 이를 또 다시 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 석유에테르 10 mL에 녹인다.

2) 정제
안지름 22 mm의 컬럼관에 플로리실 20 g과 무수황산나트륨 10 g을 각각 헥산에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 헥산이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 50% 에테르 함유 헥산 200 mL로 용출하여 40℃ 이하에서 감압 농축하고 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80 mesh 또는 80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 기체크로마토그래프용 5% DC-11, 2% OV-17, 2% DEGS+0.5% 인산, 2% QF-1, 2% PEGA, 2% DC-200+0.2% 에폭시수지 1009, 5% OV-17, 5% DC-200, 1.5% SE-30+1.5% QF-1, 5% XE-60, 0.5% XE-60 및 3% OV-17+4% QF-1(1:4)

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관 또는 캐필러리컬럼(HP-1, HP-5, HP-608 또는 이와 동등한 것)

다) 주입부 및 검출기의 온도: 250～300℃

라) 컬럼온도: 항온 또는 승온조건

(1) 항온조건의 예: 180～220℃

(2) 승온조건의 예: 120℃에서 시험용액 주입하고 4분간 유지한 후, 8℃/분의 비율로 260℃까지 상승시킨 후 5분간 유지한다.

마) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1(캐필러리컬럼) 또는 30～50 mL/분(유리관)

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램 상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 동일한 조건에서 얻어진 시험 결과에 의해 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.

7.2.2.2 메탈락실(Metalaxyl)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체(또는 기체)크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD) 또는 기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에 보관하여 사용한다.

4) 여과보조제: 셀라이트 545(celite 545) 또는 하이플로슈퍼셀(Hyflo Super Cel) 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액: 표준품을 헥산에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 헥산에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 50 g, 건조삼은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣고 약 1시간 방치, 인삼농축액은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣는다.)를 추출용기에 넣고 아세톤 150 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지 위에 셀라이트 545를 1 cm 두께로 깔은 흡인여과기로 여과한다. 수삼 및 건조삼의 잔류물은 다시 추출용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 여과하고 인삼농축액은 아세톤 소량으로 흡인여과기 위의 잔류물을 씻어 여과액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 날려 버리고 남은 용액을 분액깔때기에 옮긴다. 이에 5% 염화나트륨용액 200 mL 및 디클로로메탄 200 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞어 추출하고 정치한 후 층을 분리시키고 층을 분리시키고 디클로로메탄층을 다른 분액깔때기에 취한다. 물층에 다시 디클로로메탄 100 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 디클로로메탄층을 위의 분액깔때기에 합쳐 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하에 약 5 mL로 농축한다.

2) 정제
안지름 10 mm의 컬럼관에 플로리실 5 g과 무수황산나트륨 2 g을 각각 디클로로메탄에 현탁시켜 충전한 후 그 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도까지 유출시켜 버린다. 이 컬럼에 위의 농축액을 넣고 30% 아세톤함유 디클로로메탄 100 mL로 용출하고 용출액을 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 메탄올에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: μ-Bondapak C8, C18 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼: 안지름 3～5 mm, 길이 25～50 cm의 스테인리스관

다) 이동상: 물과 메탄올(40:60, v/v)의 혼합용액

라) 검출파장: 218 nm

마) 유량: 0.5～1 mL/분

2) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제

(1) 고정상담체: 기체크로마토그래프용 크로모솔브 W(AW-DMCS), 크로모솔브 G(AW-DMCS) 및 가스크롬 Q(60～80 mesh 또는 80～100 mesh) 또는 이와 동등한 것

(2) 고정상액체: 기체크로마토그래프용 5% DC-11, 2% OV-17, 2% DEGS+0.5% 인산, 2% QF-1, 2% PEGA, 2% DC-200+0.2% 에폭시수지 1009, 5% OV-17, 5% DC-200, 1.5% SE-30+1.5% QF-1, 5% XE-60, 0.5% XE-60 및 3% OV-17+4% QF-1(1: 4)

나) 컬럼: 안지름 2～3 mm, 길이 100～200 cm의 유리관 또는 캐필러리컬럼(HP-1, HP-5, HP-608 또는 이와 동등한 것)

다) 주입부 및 검출기의 온도: 250～300℃

라) 컬럼온도: 항온 또는 승온조건

(1) 항온조건의 예: 180～220℃

(2) 승온조건의 예: 120℃에서 시험용액 주입하고 4분간 유지한 후, 8℃/분의 비율로 260℃까지 상승시킨 후 5분간 유지한다.

마) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1(캐필러리컬럼) 또는 30～50 mL/분(유리관)

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 표준용액 및 시험용액을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간이 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래프를 하여 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라서 정량한다.

7.2.2.3 카벤다짐(Carbendazim)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 실리카 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD) 또는 형광검출기(HPLC-FLD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 플로리실(Florisil): 컬럼크로마토그래피용 플로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에 보관하여 사용한다.

4) 여과보조제: 셀라이트 545(celite 545) 또는 하이플로슈퍼셀(Hyflo Super Cel) 또는 이와 동등한 것

5) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 50 g을 정밀히 달고, 건조삼은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣고 약 1시간 방치, 인삼농축액은 10 g을 정밀히 달아 이에 물 40 mL를 넣는다.)를 추출용기에 넣고 메탄올 200 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지 위에 셀라이트 545를 1 cm 두께로 깔은 흡인여과기로 여과한다. 수삼 및 건조삼의 잔류물은 다시 추출용기에 넣고 메탄올 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 위와 같이 되풀이하여 여과하고 인삼농축액은 아세톤 소량으로 흡인여과기 위의 잔류물을 씻어 여과액과 합쳐 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 날려 버리고 남은 용액을 분액깔때기에 옮긴다. 농축용 플라스크를 0.1 N 염산 25 mL 및 물 소량으로 잘 씻고 이 씻은 액은 분액깔때기에 합친다. 이에 헥산 50 mL를 넣고 1분간 천천히 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 헥산층은 버린다. 물층에 다시 헥산 50 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 층을 분리시켜 헥산층은 버린다. 물층을 200 mL의 비커에 옮겨 1 N 수산화나트륨액으로 pH를 6～7로 맞춘 후 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸아세테이트 50 mL 씩으로 2회 강하게 흔들어 섞은 후 에틸아세테이트층을 합하여 40℃ 이하에서 감압하에 약 50 mL로 농축하고 다시 분액깔때기에 옮겨 0.1 N 염산 25 mL를 넣고 약 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시켜 물층을 200 mL의 비커에 옮긴다. 에틸아세테이트층은 다시 0.1 N 염산 25 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 물층을 앞의 비커에 합쳐 1 N 수산화나트륨액으로 pH를 6～7로 조정한 후 분액깔때기로 옮긴다. 이에 에틸아세테이트 50 mL씩으로 2회 강하게 흔들어 섞은 후 에틸아세테이트층을 합하여 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 날려버리고 잔류물을 디클로로메탄 2 mL에 녹인다.

2) 정제
활성화한 실리카 카트리지(sep-pak 또는 이와 동등한 것: 1 g)에 위의 녹인액을 넣고 카트리지에 흡착시킨 후 디클로로메탄 20 mL로 유출시켜 버리고 이어서 디클로로메탄:에틸아세테이트(90:10, v/v) 혼합용액 6 mL를 용출하여 용출액을 40℃ 이하에서 감압하에 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 메탄올에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: μ-Bondapak C18 또는 이와 동등한 것

나) 컬럼: 안지름 3～5 mm, 길이 25～50 cm의 스테인리스관

다) 이동상: 0.01 M 인산완충용액(0.01 M KH2PO4와 0.01 M Na2HPO4를 혼합하여 pH 7로 조정)과 메탄올(40:60, v/v)의 혼합용액

라) 검출파장: 형광검출기 여기파장 280 nm, 형광파장 315 nm, 자외부검출기 UV 282 nm

마) 이동상 유량: 1 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
컬럼충전제 2개 이상을 선정하여 표준용액 및 시험용액을 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크를 표준용액의 피크와 비교할 때 머무름 시간이 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험에서 얻어진 결과를 근거로 적절한 컬럼충전제를 써서 기체크로마토그래프를 하여 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라서 정량한다.

7.2.2.4 디페노코나졸(Difenoconazole)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세톤으로 추출한 후 플로리실 카트리지로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD) 또는 불꽃광도검출기(GC-FPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 아세톤에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 크로모소브 컬럼(chromosorb column): SPE용 또는 이와 동등한 것

6) 플로리실 카트리지(florisil cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
수삼은 40 g, 건조삼은 10 g 인삼농축액은 5 g을 달아 추출용기에 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 강하게 흔들어 추출한 후 이를 부흐너깔때기로 흡인 여과 한다. 잔류물을 아세톤 50 mL로 씻고 씻은 액은 위의 여과액에 합한 다음 40℃ 이하에서 감압하에 약 15 mL로 농축한다. 이를 크로모소브 컬럼에 넣고 5분간 방치한 후 헥산 100 mL로 용출하여 용출액을 40℃ 이하에서 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 헥산 4 mL에 녹인다.

2) 정제
플로리실 카트리지에 위의 액을 넣어 유출시키고 다시 아세톤:헥산(5:95, v/v)의 혼합용액 20 mL로 유출시켜 버린다. 이어서 아세톤:헥산(30:70, v/v)의 혼합용액 20 mL로 용출하여 40℃ 이하에서 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 아세톤 일정량에 녹여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: 안지름 0.53 mm, 길이 50 m의 모세관 유리 컬럼에 기체크로마토그래프용 50% 트리풀루오르프로필-메틸실리콘(trifluorpropyl methyl silicone)을 1.0 μm의 두께로 코팅한 것 또는 이와 동등한 것

나) 주입부 및 검출기의 온도: 280℃

다) 컬럼온도: 240℃(필요에 따라 적절히 조정한다)

라) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 헬륨(He)을 적절히 조절한다.

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건에서 시험할 때 시험결과는 표준용액의 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.2.2.5 이미녹타딘(Iminoctadine)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 유도체화 시켜 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 실리카(silica): 컬럼크로마토그래피용

4) 유도체화 시약: 1,1,1,5,5,5-hexafluoro-2,4-pentadion 및 무수트리플루오로초산(anhydrous trifluoroacetate)

5) 표준원액: 표준품(minoctadine triacetate)을 메탄올에 녹여 50 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 표준원액 1 mL를 취하여 플라스크에 넣고 실온에서 질소를 통과하면서 증발건고 시킨 후 마. 시험용액의 조제 2) 유도체화에 따라 실험하고 헥산으로 희석하여 적절한 농도(0.1～2 mg/L)로 희석하여 사용한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼 40 g, 건조삼 10 g, 인삼농축액 5 g)를 정밀히 달아 시료 10 g 당 5 g에 해당하는 염산구아니딘(guanidine hydrochloride)을 넣고 섞은 후 분액깔때기에 옮기고 2 N 수산화나트륨 및 메탄올 100 mL를 넣고 30분간 흔들어 섞은 후 감압 여과한다. 잔류물은 다시 분액깔때기에 옮기고 이에 2 N 수산화나트륨 및 메탄올 50 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 여과액을 합쳐 분액깔때기에 옮기고 물 150 mL 및 클로로포름 100 mL를 넣고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 클로로포름층을 분리한다. 물층에 다시 클로로포름 100 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이한 후 클로로포름층을 농축기용 둥근바닥플라스크에 모아 이에 0.1 N 황산 50 mL를 넣어 섞고 40℃ 이하에서 용매를 날려버리고 물층을 분액깔때기에 옮긴다. 다시 둥근바닥플라스크를 물 150 mL 및 클로로포름 100 mL로 잘 씻고 이 씻은 액은 분액깔때기에 합쳐 5분간 강하게 흔들어 섞고 방치하여 층을 분리하고 물층을 500 mL의 플라스크에 옮긴다. 이를 50℃ 이하에서 감압 농축하여 약 10 mL로 농축하여 50 mL의 둥근바닥플라스크에 옮기고 위의 플라스크를 소량의 물로 씻어 50 mL의 둥근바닥플라스크에 합쳐 이를 50℃ 이하에서 감압 농축하여 약 0.5 mL 정도로 농축한다. 이 농축액에 이산화탄소의 발생이 정지될 때까지 포화 탄산수소나트륨 몇 방울을 넣는다.

2) 유도체화
위의 용액에 포화 탄산나트륨용액 0.2 mL, 톨루엔 5 mL 및 1, 1, 1, 5, 5, 5-hexafluoro-2, 4 pentadion 0.5 mL를 넣고 마개를 하여 때때로 흔들면서 90℃에서 4시간 방치하고 냉각한 후 5% 탄산수소나트륨용액 5 mL를 넣고 흔들어 섞어 100 mL의 분액깔때기에 옮기고 둥근바닥플라스크를 헥산 20 mL로 씻어 분액깔때기에 합쳐 5분간 강하게 흔들어 섞고 정치하여 층을 분리한다. 물층에 다시 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이하여 전 헥산층을 합하여 액상분리여과지로 100 mL의 플라스크에 탈수, 여과한다. 이에 무수트리플루오로초산(anhydrous trifluoroacetate) 0.2 mL를 넣고 마개를 하여 때때로 흔들면서 25℃에서 6시간 방치한 후 이 용액에 물 10 mL 및 5% 탄산수소나트륨용액 5 mL를 사용하여 분액깔때기에 옮기고 5분간 강하게 흔들어 섞은 후 방치하여 헥산층을 분리하고 물층에 다시 헥산 20 mL를 넣고 위와 같이 되풀이한 후 헥산층을 모아 액상분리용 여과지를 사용하여 100 mL의 둥근바닥플라스크에 탈수, 여과하고 이를 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 에틸아세테이트:헥산(5:95, v/v) 혼합용액 10 mL에 녹인다.

3) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 에틸아세테이트:헥산(5:95, v/v) 혼합용액을 사용하여 실리카 10 g 및 무수황산나트륨 5 g을 차례로 충전하고 용매를 무수황산나트륨층까지 유출시켜 버리고 위의 ‘2) 유도체화’에서 얻은 용액을 넣어 유출시킨 후 에틸아세테이트:헥산(5:95, v/v) 혼합용액 100 mL를 넣어 초기의 용출액 20 mL는 버리고 이후 용출액 80 mL를 모아 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 완전히 날려버리고 잔류물을 헥산에 녹여 일정량으로 하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-17(5 m × 0.53 mm × 1.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 5 mL/분

다) 오븐 온도: 100℃에서 시험용액을 주입하고 1분간 유지한 후 30℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.2.2.6 메탐-소디움(Metam-sodium)

가. 시험법 적용범위
수삼, 건삼, 홍삼, 인삼농축액, 홍삼농축액 등 식품에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 EDTA(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid) 완충용액으로 추출한 후 액-액 분배하여 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
기체크로토그래프-질소․인 검출기(GC-NPD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 표준품(metam-sodium hydrate)을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 표준원액을 일정량 취하여 마. 시험용액의 조제에 따라 실험하고 디이소프로필에테르(diisopropyl ether)로 적절한 농도로 혼합, 희석하여 사용한다.

4) 유도체시약: 메틸브로모아세테이트(methylbromoacetate)는 특급 또는 이와 동등한 것

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(수삼은 40 g, 건조삼은 10 g, 인삼농축액은 5 g)를 정밀히 달아 추출용기에 넣고 pH 6.9인 EDTA완충용액 170 mL와 메틸브로모아세테이트 1 mL를 넣어 20초간 강하게 흔들어 섞어 추출한 후 여과지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과 한다. 여과액을 500 mL 비커에 옮겨 자석교반기에서 5분간 교반한 다음 2 M 염산 용액으로 pH 4가 되도록 조절해서 실온에서 90분간 교반시킨다. 이를 분액깔때기에 옮겨 디이소프로필에테르 100 mL를 넣고 강하게 흔들어 섞은 후 정치하여 디이소프로필에테르층을 취한다. 다시 물층에 디이소프로필에테르 100 mL를 넣고 위와 같이 2회 되풀이하여 위의 디이소프로필에테르층에 합한 다음 무수황산나트륨으로 탈수시킨다. 여기에 5% 에틸렌글리콜 함유 아세톤 1 mL를 넣어 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 날려버리고 디이소프로필에테르로 녹여 일정량으로 한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-17 캐필러리 컬럼(30 m × 0.25 mm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 1 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하고 2분간 유지한 후 10℃/분의 비율로 280℃까지 온도를 상승시켜 10분 이상 유지한다.

라) 주입부 온도: 280℃

마) 검출기 온도: 280℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.3 축·수산물의 잔류물질

7.3.1 다성분 시험법(multiresidue methods)

7.3.1.1 축산물 중 잔류농약 동시 다성분 시험법

가. 시험법 적용범위
축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

2) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각각의 표준품을 유기용매에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 무처리 시료용액*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함)

* 무처리 시료용액: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine, C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 지방을 제외한 축산물
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 용량의 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 10 mL를 넣은 뒤 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

나) 고기 중 지방(f)
균질화한 시료 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 넣고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣어 섞은 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분 동안 균질화하고 여과보조제(celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 날린 후 3 g을 정밀히 달아 아세토니트릴을 9 mL 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

다) 지방
시료(지방) 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리하고 건조 여과지로 여과한 후 3 g을 정밀히 달아 아세토니트릴을 9 mL 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 다음 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg, PSA 25 mg, C18 25 mg이 담긴 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 섞은 다음 이를 4℃, 13,000 ×g에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.2 mL/분

다) 오븐 온도: 60℃에서 시험용액을 주입하여 20℃/분의 비율로 180℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 300℃까지 상승시켜 5분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 주입량: 2 μL

바) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)		머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	델타메트린 (Deltamethrin)	28.67 29.04	505.2	502.9	253	931)	15
						174	5
2	p,p’-디디티* (p,p’-DDT)	18.30	354.5	353.9	235	1651)	20
						199	20
	o,p’-디디티* (o,p’-DDT)	17.14	354.5	353.9	235	1651)	20
						199	20
	p,p’-디디이* (p,p’-DDE)	15.69	318.0	315.9	246	1761)	30
					318	246	20
	p,p’-디디디* (p,p’-DDD)	17.05	320.0	317.9	235	1651)	20
						199	20
3	디메테나미드 (Dimethenamid)	11.17	275.8	275.0	230	1541)	10
					152	111	30
4	디메티핀 (Dimethipin)	10.10	210.3	210.0	118	581)	5
					124	76	5
5	디페닐아민 (Diphenylamine)	8.41	169.2	169.0	169	1681)	15
					168	167	20
6	린단 (Lindane, γ-BHC)	10.34	290.8	287.8	181	1451)	25
						109	25
7	메카밤 (Mecarbam)	14.45	329.4	329.0	159	1311)	5
					160	132	10
8	메타크리포스 (Methacrifos)	7.16	240.2	240.0	208	1801)	5
					240	180	10
9	메티다티온 (Methidathion)	14.52	302.3	301.9	145	851)	5
						58	15
10	뷰프로페진 (Buprofezin)	15.93	305.4	305.1	105	771)	15
						104	10
11	α-비에이치시 (α-BHC)	9.75	290.8	287.8	181	1451)	15
					217	181	5
	β-비에이치시 (β-BHC)	10.28	290.8	287.8	181	1451)	15
					217	181	5
	δ-비에이치시 (δ-BHC)	11.19	290.8	287.8	181	1451)	15
					217	181	5
12	비터타놀 (Bitertanol)	23.45	337.4	337.1	170	1151)	40
						141	20
13	비펜트린*** (Bifenthrin)	20.03	422.9	422.1	181	1651)	15
						166	30
14	빈클로졸린 (Vinclozolin)	11.40	286.1	284.9	187	1241)	20
					198	145	15
	빈클로졸린 대사산물 (3,5-dichloroaniline)	6.87	162.0	160.9	161	991)	30
					163	90	30
15	사이퍼메트린 (Cypermethrin)	25.63 25.85 25.95 26.03	416.3	415.0	163	911)	10
						127	5
16	사이프로디닐** (Cyprodinil)	13.64	225.3	225.1	225	2241)	10
					224	208	25
17	사이플루트린 (Cyfluthrin)	25.29 25.49 25.59 25.67	434.3	433.0	226	2061)	10
					163	127	5
18	γ-사이할로트린 (γ-Cyhalothrin)	20.84	449.8	449.1	181	1521)	30
					197	141	10
	λ-사이할로트린 (λ-Cyhalothrin)	21.18	449.8	449.1	181	1521)	30
					197	141	10
19	스피로디클로펜 (Spirodiclofen)	23.09	411.3	410.1	312	1091)	15
						259	10
20	아이소펜포스 (Isofenphos)	14.55	345.4	345.1	213	1211)	20
						185	5
21	아트라진 (Atrazine)	10.20	215.7	215.1	215	581)	15
						200	10
22	알드린* (Aldrin)	13.24	364.9	361.8	263	1931)	40
						191	40
	디엘드린* (Dieldrin)	16.41	380.9	377.8	263	1931)	40
					265	193	40
23	에토펜프록스 (Etofenprox)	26.26	376.5	376.2	163	1071)	20
						135	10
24	에토프로포스 (Ethoprophos)	8.45	242.3	242.0	158	971)	20
						114	5
25	에톡사졸 (Etoxazole)	20.85	359.4	359.1	141	631)	25
						113	10
26	에티온 (Ethion)	17.07	384.5	383.9	231	1291)	25
						175	10
27	α-엔도설판** (α-Endosulfan)	14.98	406.9	403.8	241	2061)	15
					205	170	15
	β-엔도설판 (β-Endosulfan)	17.44	406.9	403.8	207	1721)	10
						170	10
	엔도설판 설페이트 (Endosulfansulfate)	18.12	422.9	419.8	272	2371)	15
					270	235	15
28	엔드린*** (Endrin)	15.82	380.9	377.8	263	1931)	40
						191	35
	δ-케토-엔드린 (δ-keto-Endrin)	19.68	380.9	377.8	243	1731)	25
					317	101	20
29	이피엔 (EPN)	20.55	323.3	323.0	169	1411)	5
					157	77	30
30	퀴녹시펜*** (Quinoxyfen)	18.10	308.1	306.9	237	2081)	30
					307	237	20
31	퀸토젠* (Quintozene)	10.21	295.3	292.8	249	2141)	10
					295	237	20
	퀸토젠 대사산물* (Pentachloroaniline)	11.00	265.3	262.8	263	1921)	20
					267	194	20
32	클로로벤질레이트 (Chlorobenzilate)	17.31	325.2	324.0	139	1111)	10
					251	139	10
33	클로르단-시스* (Chlordane-cis)	15.52	409.8	405.7	373	2661)	20
					375	266	20
	클로르단-트랜스* (Chlordane-trans)	15.11	409.8	405.7	373	2661)	20
					375	266	20
	옥시클로르단* (Oxychlordane)	14.38	423.7	419.7	185	1491)	5
					387	263	10
34	클로르페나피르 (Chlorfenapyr)	16.24	407.6	405.9	247	2271)	15
					328	247	20
35	클로르펜빈포스(E) (Chlorfenvinphos E)	13.77	359.6	357.9	267	1591)	5
					295	267	15
	클로르펜빈포스(Z) (Chlorfenvinphos Z)	14.09	359.6	357.9	267	1591)	5
					295	267	15
36	클로르프로팜 (Chlorpropham)	8.98	213.7	213.0	171	1271)	15
					153	90	25
37	클로르피리포스 (Chlorpyrifos)	12.59	350.6	348.9	197	1691)	15
					199	171	15
38	클로르피리포스-메틸 (Chlorpyrifos-methyl)	11.33	322.5	320.8	286	931)	20
					125	79	5
39	키노메티오네이트* (Chinomethionate)	15.17	234.3	233.9	234	2061)	5
					206	148	15
40	터부포스 (Terbufos)	10.00	288.4	288.0	231	1291)	20
						175	10
41	트리아디메놀 (Triadimenol)	13.61	295.8	295.1	128	651)	20
					130	65	25
42	트리아디메폰 (Triadimefon)	12.91	293.8	293.0	208	1811)	10
						111	35
43	트리아조포스 (Triazophos)	18.38	313.3	313.0	161	1341)	5
						106	15
44	티플루자마이드 (Thifluzamide)	16.25	528.1	525.8	194	1661)	10
						125	25
45	파라티온 (Parathion)	13.52	291.3	291.0	291	811)	30
						109	20
46	퍼메트린-시스** (Permethrin-cis)	23.94	391.3	390.0	183	1681)	20
						155	10
	퍼메트린-트랜스** (Permethrin-trans)	24.23	391.3	390.0	183	1681)	20
						155	10
47	페녹사닐 (Fenoxanil)	16.48	329.2	328.0	189	1251)	10
						154	10
48	페니트로티온 (Fenitrothion)	12.13	277.2	277.0	277	1091)	20
					125	47	10
49	펜발러레이트/에스펜발러레이트 이성체 1 (Fenvalerate/Esfenvalerate, Iso.1)	26.68	419.9	419.1	167	1251)	10
					125	89	20
	펜발러레이트/에스펜발러레이트 이성체 2 (Fenvalerate/Esfenvalerate, Iso.2)	27.17	419.9	419.1	167	1251)	10
					125	89	20
50	펜토에이트 (Phenthoate)	14.04	320.4	320.0	274	1211)	10
						125	15
51	펜티오피라드 (Penthiopyrad)	17.50	359.4	359.1	302	1771)	20
					177	101	20
	펜피오피라드 대사물질 (PAM)	6.26	193.1	193.0	193	1771)	10
					177	101	10
52	펜티온 (Fenthion)	12.74	278.3	278.0	278	1091)	20
						169	20
53	펜프로파트린 (Fenpropathrin)	20.35	349.4	349.1	265	2101)	10
						89	40
54	포스멧 (Phosmet)	20.69	317.3	316.9	160	771)	30
						133	10
55	프로피코나졸, 이성체 1** (Propiconazole, Iso.1)	18.11	342.2	341.0	259	691)	10
						173	5
	프로피코나졸, 이성체 2** (Propiconazole, Iso.2)	18.30	342.2	341.0	259	691)	10
						173	5
56	프탈리드 (Phthalide, Fthalide)	13.84	271.9	269.8	243	2151)	15
					241	213	15
57	플루실라졸 (Flusilazole)	15.92	315.4	315.1	233	1651)	20
						152	20
58	피리다벤 (Pyridaben)	23.63	364.9	364.1	147	1171)	20
						132	10
59	피리미카브 (Pirimicarb)	10.73	238.3	238.1	238	1661)	10
					166	71	25
60	헵타클로르*** (Heptachlor)	11.77	373.3	369.8	272	2371)	15
					274	239	15
	헵타클로르 에폭사이드** (Heptachlor epoxide)	14.38	389.3	385.8	183	1191)	25
					289	219	30
1) 정량이온

2) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
3.0	40	60
13.0	0	100
18.0	0	100
18.1	95	5
23.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 4 μL

바) Capillary voltage: 4.0 kV

사) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

아) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)		이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	노발루론 (Novaluron)	Positive	10.35	492.7	492.0	493	1411)	41
							158	23
2	다이아지논 (Diazinon)	Positive	9.41	304.3	304.1	305	1691)	30
							97	42
3	디노테퓨란 (Dinotefuran)	Positive	4.08	202.2	202.1	203	1291)	14
							114	15
4	디메토모르프(E) (Dimethomorph E)	Positive	7.09	387.9	387.1	388	3011)	23
							165	33
	디메토모르프(Z) (Dimethomorph Z)	Positive	7.45	387.9	387.1	388	3011)	23
							165	33
5	디메토에이트 (Dimethoate)	Positive	4.87	229.2	228.9	230	1251)	22
							199	11
6	디설포톤 (Disulfoton)	Positive	10.07	274.4	274.0	275	611)	36
							89	19
	디설포톤-설폰 (Disulfoton-sulfone)	Positive	6.18	306.4	306.0	307	971)	30
							125	18
	디설포톤-설폭사이드 (Disulfoton-sulfoxide)	Positive	6.07	290.4	290.0	291	1851)	16
							157	23
	데메톤-S (Demeton-S)	Positive	6.96	258.3	258.1	259	891)	22
							61	34
	데메톤-S-설폰 (Demeton-S-sulfone)	Positive	4.94	290.3	290.0	291	2351)	17
							263	14
	데메톤-S-설폭사이드 (Demeton-S-sulfoxide)	Positive	4.88	274.3	274.0	275	1091)	25
							141	27
7	디클로르보스 (Dichlorvos)	Positive	5.58	221.0	219.9	221	1091)	19
							95	36
8	디프루벤주론 (Diflubenzuron)	Positive	8.58	310.7	310.0	311	1581)	16
							141	33
9	루페뉴론 (Lufenuron)	Negative	11.15	511.1	509.9	509	3261)	19
							339	12
10	마이클로뷰타닐 (Myclobutanil)	Positive	7.62	288.8	288.1	289	701)	23
							125	35
11	말라티온 (Malathion)	Positive	9.74	330.4	330.0	331	1271)	14
							125	31
12	메타미도포스 (Methamidophos)	Positive	1.26	141.1	141.0	142	941)	16
							125	18
13	메타플루미존(E) (Metaflumizone E)	Positive	10.88	506.4	506.1	507	1781)	27
							287	25
	메타플루미존(Z) (Metaflumizone Z)	Positive	10.07	506.4	506.1	507	1781)	27
							287	25
14	메토밀 (Methomyl)	Positive	4.40	162.2	162.0	163	881)	10
							106	11
15	메토프렌** (Methoprene)	Positive	13.06	310.5	310.2	311	2791)	8
							191	15
16	메톡시페노자이드 (Methoxyfenozide)	Positive	7.61	368.5	368.2	369	1491)	19
							91	45
17	메트라페논 (Metrafenone)	Positive	9.86	409.3	408.0	409	2091)	19
							227	23
18	메티오카브 (Methiocarb)	Positive	7.28	225.3	225.0	226	1211)	19
							169	11
19	모노크로토포스 (Monocrotophos)	Positive	4.48	223.2	223.0	224	1271)	16
							98	13
20	바이오레스메트린 (Bioresmethrin)	Positive	13.03	338.4	338.1	339	1281)	41
							143	25
21	벤디오카브 (Bendiocarb)	Positive	5.60	223.2	223.0	224	1091)	20
							167	10
22	벤조빈디플루피르 (Benzovindiflupyr)	Negative	9.03	398.2	397.0	398	3421)	20
							378	16
23	벤타존** (Bentazone)	Negative	5.41	240.2	240.0	239	1321)	25
							197	19
24	보스칼리드 (Boscalid)	Positive	7.34	343.2	342.0	343	3071)	21
							271	34
25	비페나제이트 (Bifenazate)	Positive	7.90	300.3	300.1	301	1701)	21
							198	12
	비페나제이트 디아젠 (Bifenazate diazene)	Positive	10.23	298.3	298.1	299	2131)	13
							197	22
26	빅사펜 (Bixafen)	Positive	8.66	414.2	413.0	414	3941)	16
							266	25
27	사이로마진* (Cyromazine)	Positive	1.23 2.36	166.1	166.0	167	681)	33
							43	36
28	사이안트라닐리프롤 (Cyantraniliprole)	Positive	5.81	473.7	472.0	473	2841)	21
							442	20
29	사이클라닐리프롤 (Cyclaniliprole)	Positive	8.53	602.1	598.9	602	2861)	31
							284	25
30	사이프로코나졸** (Cyproconazole)	Positive	7.63 7.92	291.8	291.1	292	701)	23
							125	33
31	사플루페나실** (Saflufenacil)	Positive	6.78	500.9	500.0	501	3491)	29
							198	47
32	설폭사플로르 (Sulfoxaflor)	Positive	4.93	277.3	277.0	278	1541)	28
							174	11
33	세닥산 (Sedaxane)	Positive	7.80 8.31	331.4	331.1	332	1591)	22
							292	17
34	스피노신 A (Spinosyn A)	Positive	8.66	732.0	731.4	732	1421)	40
							98	48
	스피노신 D (Spinosyn D)	Positive	9.29	746.0	745.4	746	1421)	42
							98	49
35	스피로메시펜 (Spiromesifen)	Positive	11.62	370.5	370.2	371	2731)	13
							255	26
36	시마진 (Simazine)	Positive	5.66	201.7	201.0	202	1041)	26
							68	34
37	시아나진 (Cyanazine)	Positive	5.34	240.7	240.0	241	2141)	18
							104	31
38	아메톡트라딘 (Ametoctradin)	Positive	9.65	275.4	275.2	276	1761)	37
							149	39
39	아바멕틴** (Abamectin)	Positive	12.87	873.1	872.4	890	3051)	27
							145	36
40	아세타미프리드 (Acetamiprid)	Positive	4.80	222.7	222.0	223	1261)	22
							56	16
	N-데스메틸-아세타미프리드 (N-desmethyl-acetamiprid, IM-2-1)	Positive	4.80	208.7	208.1	209	1261)	18
							90	34
41	아세페이트 (Acephate)	Positive	3.69	183.2	183.0	184	1431)	12
							95	24
42	아이소페타미드 (Isofetamid)	Positive	8.02	359.5	359.1	360	1251)	42
							210	11
43	아이소프로카브 (Isoprocarb)	Positive	6.22	193.2	193.1	194	951)	17
							137	12
44	아이소프로티올레인 (Isoprothiolane)	Positive	7.64	290.4	290.0	291	1891)	23
							231	13
45	아이소피라잠 (Isopyrazam)	Positive	9.86	359.4	359.1	360	2441)	25
							320	22
46	아족시스트로빈 (Azoxystrobin)	Positive	6.92	403.4	403.1	404	3721)	19
							329	32
47	아진포스-메틸 (Azinphos-methyl)	Positive	6.82	317.3	317.0	318	1321)	16
							261	9
48	아피도피로펜 (Afidopyropen)	Positive	7.23	593.7	593.2	594	1481)	51
							202	36
49	알디카브 (Aldicarb)	Positive	5.26	190.3	190.0	208	891)	19
							116	10
	알디카브 설폰 (Aldicarb-sulfone)	Positive	4.17	222.2	222.0	240	861)	23
							148	15
	알디카브 설폭사이드 (Aldicarb-sulfoxide)	Positive	4.04	206.2	206.0	207	891)	16
							132	10
50	알라클로르 (Alachlor)	Positive	8.37	269.8	269.1	270	1621)	22
							147	31
51	에디펜포스 (Edifenphos)	Positive	9.02	310.4	310.0	311	1091)	35
							283	15
52	에트림포스 (Etrimfos)	Positive	9.35	292.3	292.0	293	2651)	18
							125	27
53	에티오펜카브 (Ethiofencarb)	Positive	6.02	225.3	225.0	226	1071)	19
							77	45
54	에티프롤 (Ethiprole)	Positive	7.10	397.2	395.9	397	3511)	23
							255	38
55	에폭시코나졸 (Epoxiconazole)	Positive	8.15	329.8	329.0	330	1211)	23
							101	45
56	오리사스트로빈 (Orysastrobin)	Positive	7.47	391.4	391.1	392	2051)	16
							116	29
57	옥사밀 (Oxamyl)	Positive	4.21	219.3	219.0	237	721)	23
							90	9
58	옥사티아피프롤린 (Oxathiapiprolin)	Positive	7.43	539.5	539.1	540	5001)	26
							522	27
59	이마잘릴 (Imazalil)	Positive	5.63	297.2	296.0	297	1591)	23
							69	19
60	이버멕틴** (Ivermectin)	Positive	13.87	875.1	874.5	892	5691)	17
							307	27
61	인독사카브 (Indoxacarb)	Positive	10.03	527.8	527.0	528	2031)	39
							150	24
62	카바릴 (Carbaryl)	Positive	5.83	201.2	201.0	202	1451)	17
							127	27
63	카벤다짐** (Carbendazim)	Positive	4.44	191.2	191.0	192	1321)	30
							160	28
64	카보퓨란 (Carbofuran)	Positive	5.60	221.3	221.1	222	1231)	22
							165	14
	3-하이드록시 카보퓨란 (3-Hydroxy carbofuran)	Positive	4.82	237.3	237.1	238	1631)	16
							181	12
65	카프로파미드 (Carpropamide)	Positive	9.03	334.7	333.0	334	1391)	22
							103	43
66	쿠마포스 (Coumaphos)	Positive	9.25	326.8	362.0	363	2271)	28
							307	20
	쿠마포스 옥손 (Coumaphos oxon)	Positive	6.68	346.7	346.0	347	2911)	24
							211	33
67	크레속심메틸 (Kresoxim-methyl)	Positive	9.08	313.4	313.1	314	2351)	17
							222	16
68	크로마페노자이드 (Chromafenozide)	Positive	7.95	394.5	394.2	395	1751)	22
							147	44
69	클로란트라닐리프롤 (Chlorantraniliprole)	Positive	6.69	483.1	480.9	482	4511)	21
							284	15
70	클로티아니딘 (Clothianidin)	Positive	4.71	249.7	249.0	250	1321)	19
							169	14
71	클로펜테진 (Clofentezine)	Positive	10.10	303.0	302.0	303	1381)	16
							102	38
72	테부코나졸 (Tebuconazole)	Positive	8.97	307.8	307.1	308	701)	24
							125	33
73	테부페노자이드 (Tebufenozide)	Positive	8.59	352.5	352.2	353	1331)	22
							297	10
74	테트라코나졸 (Tetraconazole)	Positive	8.10	372.1	371.0	372	1591)	35
							70	23
75	테플루벤주론 (Teflubenzuron)	Negative	11.09	381.1	379.9	379	3391)	11
							196	23
76	톨펜피라드 (Tolfenpyrad)	Positive	11.05	383.9	383.1	384	1971)	26
							154	43
77	트리사이클라졸 (Tricyclazole)	Positive	5.07	189.2	189.0	190	1361)	29
							163	21
78	트리클로르폰 (Trichlorfon)	Positive	4.84	257.4	255.9	257	1091)	18
							221	12
79	트리포린 (Triforine)	Positive	6.44 6.68	435.0	431.9	435	3901)	14
							215	30
80	트리플루메조피림 (Triflumezopyrim)	Positive	5.58	398.3	398.0	399	2781)	31
							279	21
81	티아디닐 (Tiadinil)	Negative	7.88	267.7	267.0	266	711)	16
							238	11
82	티아메톡삼 (Thiamethoxam)	Positive	4.43	291.7	291.0	292	2111)	14
							181	24
83	티아클로프리드 (Thiacloprid)	Positive	4.96	254.7	252.0	253	1261)	22
							99	43
84	파목사돈 (Famoxadone)	Positive	9.20	374.4	374.1	392	2381)	19
							331	12
85	페나리몰 (Fenarimol)	Positive	8.10	331.2	330.0	331	2681)	24
							259	25
86	페나미돈 (Fenamidone)	Positive	7.30	311.4	311.1	312	921)	26
							236	16
87	페노뷰카브 (Fenobucarb)	Positive	6.96	207.3	207.1	208	771)	38
							95	19
88	페림존(E) (Ferimzone E)	Positive	6.58	254.3	254.1	255	1321)	22
							91	35
	페림존(Z) (Ferimzone Z)	Positive	7.04	254.3	254.1	255	1321)	22
							91	35
89	펜디메탈린 (Pendimethalin)	Positive	11.77	281.3	281.1	282	2121)	12
							194	19
90	펜뷰코나졸 (Fenbuconazole)	Positive	8.31	336.8	336.1	337	1251)	31
							70	23
91	펜사이큐론 (Pencycuron)	Positive	9.66	328.8	328.1	329	1251)	27
							218	17
92	펜설포티온 (Fensulfothion)	Positive	6.30	308.4	308.0	309	2811)	16
							253	20
93	펜코나졸 (Penconazole)	Positive	8.88	284.1	283.0	284	1591)	29
							70	19
94	펜피록시메이트 (Fenpyroximate)	Positive	12.12	421.5	421.2	422	3661)	19
							138	33
95	펜헥사미드** (Fenhexamid)	Positive	8.03	302.2	301.0	302	971)	26
							55	40
96	포레이트 (Phorate)	Positive	4.82	260.4	260.0	261	971)	34
							75	23
	포레이트 설폰 (Phorate sulfone)	Positive	6.24	292.3	292.0	293	1151)	25
							171	12
	포레이트 설폭사이드 (Phorate sulfoxide)	Positive	6.10	276.4	276.0	277	971)	41
							143	21
	포레이트 옥손 (Phorate oxon)	Positive	6.69	244.3	244.0	245	751)	19
							97	51
	포레이트 옥손 설폰 (Phorate oxon sulfone)	Positive	4.94	276.3	276.0	277	1111)	27
							99	25
	포레이트 옥손 설폭사이드 (Phorate oxon sulfoxide)	Positive	4.83	260.3	260.0	261	1111)	25
							97	29
97	포사론 (Phosalone)	Positive	9.64	367.8	366.9	368	1821)	16
							111	42
98	폭심 (Phoxim)	Positive	9.59	298.3	298.0	299	1291)	13
							77	45
99	프로파모카브* (Propamocarb)	Positive	3.81	188.3	188.1	189	1021)	19
							74	26
100	프로파자이트 (Propargite)	Positive	11.79	350.5	350.1	368	2311)	12
							175	18
101	프로페노포스 (Profenofos)	Positive	10.58	373.6	371.9	373	3031)	20
							345	14
102	프로폭서 (Propoxur)	Positive	5.60	209.2	209.1	210	651)	37
							93	26
103	플루디옥소닐 (Fludioxonil)	Negative	7.23	248.2	248.0	247	1801)	26
							126	29
104	플루랄라너 (Fluralaner)	Positive	10.38	556.3	555.0	556	4001)	24
							160	46
105	플루메트린 (Flumethrin)	Positive	13.38	510.4	509.0	527	2671)	17
							239	25
106	플루미옥사진 (Flumioxazine)	Positive	6.68	354.3	354.1	355	3271)	20
							299	29
107	플루벤디아마이드 (Flubendiamide)	Negative	8.74	682.4	682.0	681	2541)	28
							274	16
108	플루오피콜라이드 (Fluopicolide)	Positive	7.61	383.6	381.9	383	1731)	24
							145	48
109	플루톨라닐 (Flutolanil)	Positive	7.40	323.3	323.1	324	2621)	20
							242	27
110	플루트리아폴 (Flutriafol)	Positive	6.20	301.3	301.1	302	701)	23
							123	29
111	플루페녹수론 (Flufenoxuron)	Positive	11.72	488.8	488.0	489	1411)	42
							158	22
112	플룩사피록사드 (Fluxapyroxad)	Positive	7.53	381.3	381.0	382	3621)	15
							342	22
113	피디플루메토펜 (Pydiflumetofen)	Positive	9.78	426.7	425.0	426	1931)	36
							406	15
114	피라클로스트로빈 (Pyraclostrobin)	Positive	9.51	387.8	387.0	388	1631)	25
							194	14
115	피리메타닐 (Pyrimethanil)	Positive	7.21	199.3	199.1	200	821)	27
							183	25
	피리메타닐-4-하이드록시**** (Pyrimethanil-4-hydroxy)	Positive	5.02	215.3	215.0	216	1071)	27
							109	31
	피리메타닐-5-하이드록시***** (Pyrimethanil-5-hydroxy)	Positive	5.98	215.3	215.0	216	1231)	25
							68	33
116	피리프록시펜 (Pyriproxifen)	Positive	11.58	321.4	321.1	322	961)	17
							185	23
117	피콕시스트로빈 (Picoxystrobin)	Positive	8.75	367.3	367.1	368	1451)	23
							205	11
118	피페로닐 부톡사이드 (Piperonyl butoxide)	Positive	11.12	338.4	338.2	356	1771)	17
							119	35
119	피리미포스-메틸 (Pirimiphos-methyl)	Positive	9.86	305.3	305.0	306	671)	43
							108	35
120	피프로닐 (Fipronil)	Negative	8.56	437.1	435.9	435	3301)	16
							250	25
	피프로닐 설폰 (Fipronil sulfone)	Negative	9.07	453.1	451.9	451	2821)	26
							415	15
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

Aldrin	Dieldrin	Atrazine	α-BHC
β-BHC	δ-BHC	Bifenthrin	Bitertanol
Buprofezin	Chinomethionate	Chlordane-cis	Chlordane-trans
Oxychlordane	Chlorfenapyr	Chlorfenvinphos	Chlorobenzilate
Chlorpropham	Chlorpyrifos	Chlorpyrifos-methyl	Cyfluthrin
Cyhalothrin	Cypermethrin	Cyprodinil	p,p’-DDT
o,p’-DDT	p,p’-DDE	p,p’-DDD	Deltamethrin
Dimethenamid	Dimethipin	Diphenylamine	α-Endosulfan
β-Endosulfan	Endosulfan sulfate	Endrin	δ-keto-Endrin
EPN	Ethion	Ethoprophos	Etofenprox
Etoxazole	Fenitrothion	Fenoxanil	Fenpropathrin
Fenthion	Fenvalerate/Esfenvalerate	Flusilazole	Heptachlor
Heptachlor epoxide	Isofenphos	Lindane, γ-BHC	Mecarbam
Methacrifos	Methidathion	Parathion	Penthiopyrad
PAM	Permethrin	Phenthoate	Phosmet
Phthalide, Fthalide	Pirimicarb	Propiconazole	Pyridaben
Quinoxyfen	Quintozene	Pentachloroaniline	Spirodiclofen
Terbufos	Thifluzamide	Triadimefon	Triadimenol
Triazophos	Vinclozolin	3,5-dichloroaniline

그림 1. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

Abamectin	Acephate	Acetamiprid	N-desmethyl-acetamiprid, IM-2-1
Afidopyropen	Alachlor	Aldicarb	Aldicarb-sulfone
Aldicarb-sulfoxide	Ametoctradin	Azinphos-methyl	Azoxystrobin
Bendiocarb	Bentazone	Benzovindiflupyr	Bifenazate
Bifenazate diazene	Bioresmethrin	Bixafen	Boscalid
Carbaryl	Carbendazim	Carbofuran	3-Hydroxy carbofuran
Carpropamide	Chlorantraniliprole	Chromafenozide	Clofentezine
Clothianidin	Coumaphos	Coumaphos oxon	Cyanazine
Cyantraniliprole	Cyclaniliprole	Cyproconazole	Cyromazine
Diazinon	Dichlorvos	Diflubenzuron	Dimethoate
Dimethomorph	Dinotefuran	Disulfoton	Disulfoton-sulfone
Disulfoton-sulfoxide	Demeton-S	Demeton-S-sulfone	Demeton-S-sulfoxide
Edifenphos	Epoxiconazole	Ethiofencarb	Ethiprole
Etrimfos	Famoxadone	Fenamidone	Fenarimol
Fenbuconazole	Fenhexamid	Fenobucarb	Fenpyroximate
Fensulfothion	Ferimzone	Fipronil	Fipronil sulfone
Flubendiamide	Fludioxonil	Flufenoxuron	Flumethrin
Flumioxazine	Fluopicolide	Fluralaner	Flutolanil
Flutriafol	Fluxapyroxad	Imazalil	Indoxacarb
Isofetamid	Isoprocarb	Isoprothiolane	Isopyrazam
Ivermectin	Kresoxim-methyl	Lufenuron	Malathion
Metaflumizone	Methamidophos	Methiocarb	Methomyl
Methoprene	Methoxyfenozide	Metrafenone	Mopnocrotophos
Myclobutanil	Novaluron	Orysastrobin	Oxamyl
Oxathiapiprolin	Penconazole	Pencycuron	Pendimethalin
Phorate	Phorate sulfone	Phorate sulfoxide	Phorate oxon
Phorate oxon sulfone	Phorate oxon sulfoxide	Phosalone	Phoxim
Picoxystrobin	Piperonyl butoxide	Pirimiphos-methyl	Profenofos
Propamocarb	Propargite	Propoxur	Pydiflumetofen
Pyraclostrobin	Pyrimethanil	Pyrimethanil-4-hydroxy	Pyrimethanil-5-hydroxy
Pyriproxifen	Saflufenacil	Sedaxane	Simazine
Spinosyn A	Spinosyn D	Spiromesifen	Sulfoxaflor
Tebuconazole	Tebufenozide	Teflubenzuron	Tetraconazole
Thiacloprid	Thiamethoxam	Tiadinil	Tolfenpyrad
Trichlorfon	Tricyclazole	Triflumezopyrim	Triforine

그림 2. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg
(단, 아피도피로펜: 유 0.001 mg/kg

린단: 유 및 포유류·가금류 부산물 0.005 mg/kg

메티다티온: 유 0.001 mg/kg

스피로디클로펜: 유 0.004 mg/kg

펜피록시메이트: 유 0.005 mg/kg

페니트로티온: 유 0.002 mg/kg)

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기 및 액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험

1) 정량시험은 표준품으로 표준용액을 일정 농도로 제조한 후 검량선을 작성하여 정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험 결과에 의해 피크 높이 또는 피크 면적에 따라 정량한다.

2) ‘바. 시험조작’의 분석대상 농약 중 * 표시된 농약의 정량시험은 다음을 따른다.

가) ‘*’ 표시된 농약이 축산물에서 검출될 경우 개별 시험법으로 정량한다.

나) ‘**’ 표시된 농약이 지방에서 검출될 경우 개별 시험법으로 정량한다.

다) ‘***’ 표시된 농약이 소, 지방에서 검출될 경우 개별 시험법으로 정량한다.

라) ‘****’ 표시된 피리메타닐-4-하이드록시(Pyrimethanil-4-hydroxy)가 조직에서 검출될 경우 피리메타닐(Pyrimethanil)의 잔류량으로 환산하여 정량한다.

피리메타닐의 잔류량 = 피리메타닐의 잔류량 + (환산계수* × 피리메타닐-4-하이드록시의 잔류량)

* 환산계수 = 0.92 (피리메타닐 분자량 199/피리메타닐-4-하이드록시 분자량 215)

마) ‘*****’ 표시된 피리메타닐-5-하이드록시(Pyrimethanil-5-hydroxy)가 유에서 검출될 경우 피리메타닐(Pyrimethanil)의 잔류량으로 환산하여 정량한다.

피리메타닐의 잔류량 = 피리메타닐의 잔류량 + (환산계수* × 피리메타닐-5-하이드록시의 잔류량)

* 환산계수 = 0.92 (피리메타닐 분자량 199/피리메타닐-5-하이드록시 분자량 215)

7.3.1.2 디디티(DDT), 비펜트린(Bifenthrin), 알드린(Aldrin), 엔도설판(Endosulfan), 엔드린(Endrin), 클로르단(Chlordane), 퍼메트린(Permethrin), 헵타클로르(Heptachlor)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알, 지방 등의 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 표준원액: 농약 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

3) 표준용액: 희석한 표준원액과 무처리 시료추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

4) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), PSA(Primary Secondary Amine), C18(octadecyl bonded silica)

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 지방을 제외한 축산물
검체를 분쇄하여 균질화한 후 2 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 1분간 진탕한다. 진탕 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 강하게 흔들어주고 원심분리관을 -20℃에서 1시간 동안 보관한 뒤, 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

나) 고기 중 지방(f)
균질화된 고기류 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 취하고 무수황산나트륨 약 50 g을 첨가하여 균질화한 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 첨가하여 5분 동안 균질화하고 여과보조제(celite 545)를 깔은 부흐너깔때기에서 감압여과 한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하의 수욕상에서 감압하여 용매를 날린 후 1 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 1분간 진탕한다. 진탕 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 강하게 흔들어주고 원심분리관을 -20℃에서 1시간 동안 보관한 뒤, 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

다) 지방
검체가 지방인 경우 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리한 후 건조 여과지로 여과한 것 1 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 아세토니트릴을 20 mL 첨가하여 1분간 진탕한다. 진탕 후 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 강하게 흔들어주고 원심분리관을 -20℃에서 1시간 동안 보관한 뒤, 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 900 mg, PSA 150 mg, C18 150 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1)추출’로부터 얻은 상층액 8 mL를 넣고 1분간 강하게 섞은 다음 이를 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액 5 mL을 취하여 유리 시험관에 옮기고 40℃ 이하에서 질소 건고한 뒤, 아세토니트릴 1 mL(지방과 우유의 경우는 0.5 mL)을 이용하여 즉시 정용한다. 이를 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS UI(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 및 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.0 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 시험용액을 주입하여 2분간 유지시킨 후 20℃/분의 비율로 230℃까지 온도를 상승시키고 5℃/분의 비율로 300℃까지 상승시켜 8분간 유지한다.

라) 주입 방법: Splitless mode

마) 주입부 온도: 260℃

바) 주입량: 1 μL

사) Interface 온도: 250℃

아) 이온화 방법: EI, 70 eV

자) 분석대상물질 조

1)정량이온

	분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Colllision energy, eV)
1	p,p’-디디티 (p,p’-DDT)	14.66	354.5	353.9	235	1651)	20
					237	165	20
	p,p’-디디이 (p,p’-DDE)	12.99	318.0	315.9	246	1761)	26
					318	248	18
	o,p’-디디티 (o,p’-DDT)	13.90	354.5	353.9	235	1651)	20
					237	165	20
	p,p’-디디디 (p,p’-DDD)	13.83	320.0	317.9	235	1651)	20
					237	165	20
2	비펜트린 (Bifenthrin)	15.69	422.9	422.1	181	1651)	15
						166	30
3	알드린 (Aldrin)	11.47	364.9	361.8	263	1931)	28
						186	34
	디엘드린 (Dieldrin)	13.20	380.9	377.8	277	2411)	8
					263	193	28
4	α-엔도설판 (α-Endosulfan)	12.70	406.9	403.8	241	2061)	15
					205	170	15
	β-엔도설판 (β-Endosulfan)	13.83	406.9	403.8	207	1721)	10
						170	10
	엔도설판 설페이트 (Endosulfan sulfate)	14.64	422.9	419.8	272	2371)	15
					270	235	15
5	엔드린 (Endrin)	13.63	380.9	377.8	263	1931)	40
						191	35
	δ-케토-엔드린 (δ-keto-Endrin)	15.78	380.9	377.8	243	1731)	25
					317	101	20
6	클로르단-시스 (Chlordane-cis)	12.67	409.8	405.7	373	2661)	20
					375	266	20
	클로르단-트랜스 (Chlordane-trans)	12.45	409.8	405.7	373	2661)	20
					375	266	20
	옥시클로르단 (Oxychlordane)	12.05	423.7	419.7	185	1491)	5
					387	263	10
7	퍼메트린-시스 (Permethrin-cis)	18.40	391.3	390.0	183	1681)	20
						155	10
	퍼메트린-트랜스 (Permethrin-trans)	18.61	391.3	390.0	183	1681)	20
						155	10
8	헵타클로르 (Heptachlor)	10.94	373.3	369.8	272	2371)	12
					337	266	10
	헵타클로르 에폭사이드 (Heptachlor epoxide)	12.06	389.3	385.8	263	1931)	28
					353	282	14

건

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 혼합한 후 기체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

Aldrin	Dieldrin	Bifenthrin	Chlordane-cis
Chlordane-trans	Oxychlordane	p,p’-DDT	p,p’-DDE
o,p’-DDT	p,p’-DDD	α-Endosulfan	β-Endosulfan
Endosulfan sulfate	Endrin	δ-keto-Endrin	Heptachlor
Heptachlor epoxide	Permethrin-cis	Permethrin-trans
그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg(유는 0.005 mg/kg)

사. 정성 및 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.1.3 아바멕틴(Abamectin), 이버멕틴(Ivermectin)

가. 시험법 적용범위
닭고기, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 PSA(Primary Secondary Amine), C18 및 GCB(Graphitized Carbon Black)를 이용하여 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 달걀, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 정확히 달아 50 mL 용량 원심분리관에 넣고 1% 아세트산이 함유된 아세토니트릴 15 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞어 추출한다. 원심분리관에 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 차례로 넣고 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
새로운 15 mL 용량 원심분리관에 무수황산마그네슘 1,200 mg, C18 400 mg, PSA 400 mg과 GCB 45 mg을 넣고 ‘1)추출’로부터 얻은 용액 중 상층액 6 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4000 ×g에서 10분간 원심분리한다. 상층액 중 3 mL를 취하여 질소를 이용하여 농축, 건고한 후 잔류물에 메탄올을 1 mL를 넣어 녹인다. 추출액을 멤브레인 필터(nylon 재질, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
3.0	10	90
7.0	10	90
7.1	95	5
12.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 5.5 kV

다) Collision gas: 질소(N2) 또는 아르곤(Ar)

라) 분석대상물질 조건

※ Abamectin*의 분석대상물질은 Avermectin B1a이고, Ivermectin**의 분석대상물질은 22,23-Dihydroavermectin B1a임

	분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	아바멕틴* (Abamectin)	Positive	6.8	873.1	872.4	891	3051)	31
							95	95
							568	19
2	이버멕틴** (Ivermectin)	Positive	7.9	875.1	874.5	892	5691)	21
							307	35
							551	29
1) 정량이온

3) 검량선 작성
농도별 표준 용액을 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 각각 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 정량한계

가) 정량한계가 제시되지 않은 농약 검출시 정량분석은 다음을 따른다.

‘*’ 표시된 농약이 식품에서 검출될 경우 8.3.9 시험법으로 정량한다.

나) 정량이 가능한 농약

분석성분 (Compound)	정량한계(mg/kg)
	가금류고기	알
아바멕틴 (Abamectin)	0.01	0.01
이버멕틴* (Ivermectin)	-	-

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.1.4 벤타존(Bentazone), 사이프로코나졸(Cyproconazole), 사플루페나실(Saflufenacil), 퀴녹시펜(Quinoxyfen), 퀸토젠(Quintozene), 키노메티오네이트(Chinomethionat), 펜헥사미드(Fenhexamid), 프로파모카브(Propamocarb), 프로피코나졸(Propiconazole)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물(지방 포함)에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction) 및 C18 카트리지로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기 및 기체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치

1) 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 아스코르브산 및 아스코르브산 나트륨 혼합용액(A.A 혼합용액): 100 mL 용량플라스크에 아스코르브산 7.5 g과 아스코르브산 나트륨 7.5 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

4) 완충용액: 100 mM 포름산암모늄 용액에 포름산 용액을 약 1 mL 넣어 pH 4∼4.5로 맞춘다.

5) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 각각 1,000 mg/L가 되게 한다.

6) 표준용액: 희석한 표준원액과 무처리 시료추출물*을 이용하여 다음과 같은 조성으로 혼합, 희석한다.

* 무처리 시료추출물: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것(단, 지방시료는 최종단계에서 아세톤 2 mL에 녹이기 전 질소가스로 건조한 상태의 것)을 말한다.

가) 액체크로마토그래프-질량분석기

구분	목적농도(예시)
	1 ug/L	2 ug/L	10 ug/L	20 ug/L	50 ug/L
희석한 표준원액	10 ug/L 100 μL	20 ug/L 100 μL	100 ug/L 100 μL	200 ug/L 100 μL	500 ug/L 100 μL
완충용액	300 μL	300 μL	300 μL	300 μL	300 μL
무처리 시료추출물	600 μL	600 μL	600 μL	600 μL	600 μL

나) 기체크로마토그래프-질량분석기

(1) 지방을 제외한 축산물

구분	목적농도(예시)
	1 ug/L	2 ug/L	10 ug/L	20 ug/L	50 ug/L
희석한 표준원액	10 ug/L 100 μL	20 ug/L 100 μL	100 ug/L 100 μL	200 ug/L 100 μL	500 ug/L 100 μL
아세토니트릴	150 μL	150 μL	150 μL	150 μL	150 μL
무처리 시료추출물	750 μL	750 μL	750 μL	750 μL	750 μL

(2) 지방

구분	목적농도(예시)
	1 ug/L	2 ug/L	10 ug/L	20 ug/L	50 ug/L
희석한 표준원액	10 ug/L 200 μL	20 ug/L 200 μL	100 ug/L 200 μL	200 ug/L 200 μL	500 ug/L 200 μL
아세톤	1,800 μL	1,800 μL	1,800 μL	1,800 μL	1,800 μL
무처리 시료추출물	-	-	-	-	-

7) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), PSA(Primary Secondary Amine)

8) C18 카트리지(C18 cartridge): SPE용 또는 이와 동등한 것

9) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 지방을 제외한 축산물
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 A.A 혼합용액 0.5 mL 및 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 15 mL을 넣은 후 1분간 흔들어 섞는다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 3,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

나) 고기 중 지방(f)
균질화한 고기류 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 취하고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣고 흔들어 섞은 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분 동안 흔들어 혼합한 후 여과보조제(celite 545)를 넣은 부흐너깔때기에서 감압 여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃ 이하에서 감압하여 용매를 날린 후 3 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 15 mL을 넣은 후 1분간 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 10분간 흔들어 섞은 후 4℃, 3,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

다) 지방
시료 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리한 후 건조 여과지로 여과한 것 3 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 15 mL을 넣은 후 1분간 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 10분간 흔들어 섞은 후 4℃, 3,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제

가) LC-MS/MS
무수황산마그네슘 150 mg, C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리 튜브에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 혼합한 후 이를 4℃, 13,000 ×g에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액 600 μL에 완충용액 300 μL, 아세토니트릴 100 μL을 넣어 1000 μL로 맞춰 혼합한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

나) GC-MS/MS

(1) 지방을 제외한 축산물
무수황산마그네슘 300 mg, PSA 100 mg, C18 100 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출 가) 지방을 제외한 축산물’로부터 얻은 상층액 4 mL를 넣고 1분간 강하게 혼합한 후 이를 4℃, 3,000 ×g에서 10분간 원심분리한다. 정제된 상층액 750 μL에 아세토니트릴 250 μL을 넣어 1000 μL로 맞춰 혼합한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

(2) 고기 중 지방(f) 또는 지방
‘1) 추출 나) 고기 중 지방(f) 또는 다) 지방’으로부터 얻은 상층액 4 mL를 40℃에서 질소가스를 사용하여 건조시킨 후, 디클로로메탄:메탄올(99:1, v/v) 혼합용액 4 mL로 녹여 정제액으로 사용한다. C18 1 g이 함유된 카트리지에 디클로로메탄 6 mL을 주입하여 2∼3 방울/초의 속도로 유출시켜 버린다. 이 카트리지에 상기 정제액을 주입하여 2∼3 방울/초 속도로 용출하여 시험관에 받는다. 계속해서 카트리지에 디클로로메탄:메탄올(99:1, v/v) 혼합용액 3 mL을 용출하여 동일한 시험관에 받아 총 7 mL 추출용액을 40℃에서 질소가스를 사용하여 건조한다. 건조된 시료를 아세톤 2 mL으로 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 2.6 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
1.0	95	5
1.5	85	15
2.4	40	60
10.0	10	90
12.0	10	90
12.1	2	98
16.0	2	98
16.1	95	5
21.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode 및 Negative ion mode)

사) Capillary voltage: 4.0 kV

아) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

자) 분석대상물질 조건

	분석성분 (Compound)	이온화 (Ionization mode)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	벤타존 (Bentazone)	Negative	4.8	240.3	240.0	239	1321)	25
							197	20
2	사이프로코나졸 (Cyproconazole)	Positive	6.5 6.8	291.8	291.1	292	701)	18
							125	30
3	사플루페나실 (Saflufenacil)	Positive	6.1	500.9	500.1	501	1981)	44
							349	28
4	퀴녹시펜 (Quinoxyfen)	Positive	9.7	308.1	306.9	308	1971)	33
							162	46
5	펜헥사미드 (Fenhexamid)	Positive	6.9	302.2	301.0	302	551)	41
							97	24
6	프로파모카브 (Propamocarb)	Positive	3.8	188.3	188.1	189	1021)	17
							74	26
7	프로피코나졸 (Propiconazole)	Positive	7.3 7.9	342.2	341.0	342	1591)	31
							69	22
1) 정량이온

2) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: ZB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.5 mL/분

다) 오븐 온도: 90℃에서 시험용액을 주입하고 3분간 유지한 후 20℃/분의 속도로 120℃까지 올리고 8℃/분의 속도로 300℃까지 올린 뒤 3분간 유지한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 검출기 온도: 300℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 2 μL

자) 분석대상물질 조건

	분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌 에너지 (Colllision energy, eV)
1	퀸토젠2) (Quintozene)	13.5	295.3	292.8	265	2371)	12
						194	15
	퀸토젠 대사산물2) (Pentachloroaniline)	14.7	265.3	264.8	265	1941)	20
						192	20
2	키노메티오네이트2) (Chinomethionat)	17.9	234.3	233.9	206	1481)	15
						121	24
1) 정량이온 2) 지방 검체에서 정성만 가능

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기 및 기체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

가) LC-MS/MS

Bentazone	Cyproconazole(Ⅰ)	Cyproconazole(Ⅱ)	Fenhexamid
Propamocarb	Propiconazole(Ⅰ)	Propiconazole(Ⅱ)	Quinoxyfen
Saflufenacil

그림 1. 액체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

나) GC-MS/MS

Chinomethionat	Quintozene	Pentachloroaniline

그림 2. 기체크로마토그래프-질량분석기에서 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계(mg/kg)
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기 및 기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.1.5 사이헥사틴(Cyhexatin), 아조사이클로틴(Azocyclotin), 펜뷰타틴 옥사이드(Fenbutatin oxide)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등의 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴과 에틸아세테이트 혼합용액으로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.
※ 아조사이클로틴은 분석과정 중 사이헥사틴으로 전환됨

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 사이헥사틴, 펜뷰타틴 옥사이드 각 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 각 물질의 표준원액 100 mg/L을 메탄올에 적당한 농도로 혼합하여 희석한다. 희석한 용액은 정량 시 조직표준곡선(Tissue standard curve) 작성을 위해 각 해당 물질이 검출되지 않은 음성대조시료(Blank sample)에 공시료를 포함하여 5개 이상 농도로 전처리하여 표준용액을 제조한다.

5) d-SPE: C18(octadecyl bonded silica), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴:에틸아세테이트(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 30분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
C18 250 mg과 PSA 100 mg이 담긴 15 mL 용량 원심분리관에 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 상층액 5 mL를 넣어 1분간 강하게 흔든 후 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 새로운 15 mL 용량 원심분리관에 상층액 3 mL를 취하여 40℃에서 질소를 이용하여 농축한다. 농축 후 1% 포름산과 5 mM 포름산 암모늄이 첨가된 메탄올 1.5 mL를 넣고 5분간 초음파 처리하여 충분히 녹이고, 5분간 흔들어 섞는다. 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한 후 상층액을 멤브레인필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 50 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산 암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산 암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
2.0	0	100
5.0	0	100
5.1	60	40
8.0	60	40

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.7 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
사이헥사틴 (Cyhexatin)	3.2	386.2	387.2	369	2051)	17
					81	28
펜뷰타틴 옥사이드 (Fenbutatin oxide)	3.6	1052.7	1052.4	519	1971)	55
					351	33
1) 정량이온

3) 검량선 작성
조직표준곡선(Tissue standard curve)에 사용되는 표준용액을 농도별로 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

사이헥사틴(3.2분)	펜뷰타틴 옥사이드(3.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.1.6 이마자목스(Imazamox), 이마자픽(Imazapic), 이마자피르(Imazapyr), 이마제타피르(Imazethapyr)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알, 지방 등의 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

* 무처리 시료추출물: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 포름산 함유 아세토니트릴 20 mL를 첨가하여 10분간 진탕하고 무수황산마그네슘 4 g과 염화나트륨 1 g을 추가하여 1분간 진탕한다. 진탕 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는  2 mL 용량 원심분리관에 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 13,000 ×g에서 5분간 원심분리한다. 원심분리 상층액을 멤브레인필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
0.5	95	5
2.0	75	25
7.0	55	45
8.0	0	100
9.0	0	100
10.0	95	5
12.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 300℃

다) Capillary voltage: 4.0 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)		머무름 시간(분)	평균 분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	이마자목스 (Imazamox)	7.1	305.3	305.1	306	2611)	22
						246	27
2	이마자픽 (Imazapic)	7.2	275.3	275.1	276	2311)	21
						163	27
3	이마자피르 (Imazapyr)	5.6	261.2	261.1	262	2171)	21
						220	18
4	이마제타피르 (Imazethapyr)	8.6	289.3	289.1	290	1771)	27
						245	21
	OH-이마제타피르 (OH-Imazethapyr)	6.4	305.3	305.1	306	1931)	29
						69	30
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

Imazamox	Imazapic	Imazapyr
Imazethapyr	OH-Imazethapyr

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.1.7 엠시피에이(MCPA), 이사-디(2,4-D), 이사오-티(2,4,5-T)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알, 지방 등의 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질를 아세토니트릴로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각각의 표준품을 유기용매에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 희석한 표준원액과 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

* 무처리 시료추출물: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 지방을 제외한 축산물
시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 정제수 5 mL을 첨가 후 5분간 방치한다. 5 N 수산화나트륨액 1 mL와 아세토니트릴을 10 mL 첨가하여 1분간 진탕한 후 45℃에서 25분간 반응시킨다. 반응 후 실온에서 5 N 염산 1.5 mL와 무수황산나트륨 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산삼나트륨·3수화물 1 g과 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

나) 지방
시료(지방) 적당량을 취하여 약 50℃로 가열하여 지방을 분리하고 건조여과지로 여과한 후 3 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 정제수 5 mL을 첨가 후 방치한다. 방치 후 5 N 수산화나트륨액 1 mL와 아세토니트릴을 9 mL 넣어 1분간 진탕한 후 45℃에서 25분간 반응시킨다. 반응 후 실온에서 5 N 염산 1.5 mL와 무수황산나트륨 4 g, 염화나트륨 1 g, 구연산삼나트륨·3수화물 1 g 및 구연산이나트륨·1.5수화물 0.5 g을 넣어 1분간 흔들고 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 150 mg과 C18 25 mg이 미리 담겨져 있는 2 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 1 mL를 넣고 1분간 충분히 흔들어 섞은 후 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 분리된 상층액을 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 1.8 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 아세트산(acetic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90	10
1.0	90	10
3.0	45	55
10.5	0	100
12.0	0	100
12.5	90	10
15.0	90	10

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 10 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

나) Capillary temperature: 300℃

다) Capillary voltage: 4.0 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질

분석성분 (Compound)		이온화 (Ionization mode)	머무름시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
1	엠시피에이 (MCPA)	Negative	4.1	200.6	200.0	199	1411)	14
							105	27
2	이사-디 (2,4-D)	Negative	4.1	221.0	220.0	219	1611)	13
							125	25
3	이사오-티 (2,4,5-T)	Negative	4.5	255.5	253.9	253	1951)	13
							159	25
1) 정량이온

의 조건

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 무처리 시료 추출 용액과 혼합한 후 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

엠시피에이(4.1분)	이사-디(4.1분)	이사오-티(4.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 각각의 성분을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.2 단성분 시험법(Individual residue method)

7.3.2.1 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)

7.3.2.1.1 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)(제1법)

가. 시험법 적용범위
가금류고기, 가금류부산물, 돼지고기, 돼지고기부산물, 돼지신장, 소부산물, 소신장, 소고기, 알, 양고기, 양부산물, 양신장, 유, 포유류고기, 포유류부산물 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 염산용액으로 추출한 후 실리카 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마도그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

4) 표준원액: 표준품(Diquat dibromide monohydrate, Paraquat dichloride hydrate)을 각각 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

5) 표준용액: 표준원액을 이동상을 사용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료 50 g을 달아 250 mL의 둥근플라스크에 넣은 후 2 M 염산을 50 mL 넣는다. 이후 마개를 열은 상태에서 1시간 동안 100℃를 유지하면서 교반한 후 서서히 물 60 mL를 넣는다. 이 용액을 1,600 rpm에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하고 용액을 250 mL의 비커에 넣은 후 다시 잔류물에 2 M 염산 50 mL를 넣고 추출과정을 반복하여 60 mL의 물로 묽히고 원심분리하여 용액을 합한다. 이 용액을 6 M 또는 1 M 수산화나트륨액과 1 M 염산으로 pH를 9～10으로 맞춘 후 원심분리를 하여 고체물질을 제거한다.

2) 정제
안지름 15 mm의 컬럼관에 실리카 4 g을 0.1 N 수산화나트륨액 25 mL를 사용하여 충전하고 위의 원심분리액을 컬럼에 넣어 유출시켜 버린다. 다시 컬럼에 물 100 mL, 메탄올 50 mL와 메탄올로 희석한 0.1 N 염산 40 mL를 차례로 유출시켜 버리고 실리카를 완전히 건조시킨다. 이어서 메탄올:6.5 M 염산(7:3, v/v) 혼합용액 100 mL로 용출하고 받은 용출액은 90℃에서 1 mL가 남을 때까지 증발시키고 남은 1 mL는 질소가스를 사용하여 농축하고 잔류물을 이동상 1 mL에 녹이고 잘 흔들어 섞은 후 0.45 μm의 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 검출파장: 257 nm

나) 컬럼: Silica(4.6 mm × 250 mm) 또는 이와 동등한 것

다) 이동상: 아세토니트릴, 메탄올, 98 mM sodium perchlorate 용액(4:3:3, v/v/v)의 혼합용액

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.3.2.1.2 다이쾃(Diquat), 패러쾃(Paraquat)(제2법)

가. 시험법 적용범위
가금류고기, 가금류부산물, 돼지고기, 돼지고기부산물, 돼지신장, 소부산물, 소신장, 소고기, 알, 양고기, 양부산물, 양신장, 유, 포유류고기, 포유류부산물 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 TCA 용액으로 추출한 후 C18 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품(diquat dibromide monohydrate, paraquat dichloride hydrate)을 각각 물에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 이동상에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 염기성 벤잘코니움(benzalkonium) 용액: benzalkonium chloride 0.05 g과 암모니아수 0.5 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

6) 염기성 헵탄설포네이트(heptanesulphonate) 용액: sodium heptanesulphonate 2 g과 암모니아수 2 mL를 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 산성 메탄올: 진한 염산 1 mL를 메탄올에 넣어 100 mL가 되게 한다.

8) 25% TCA 용액: trichloroacetic acid 25 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

9) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 취하여 25% TCA 용액 5 mL 및 물 15 mL와 혼합, 2분간 강하게 흔들어 추출한 후 이를 원심분리관에 옮겨 3,000 rpm에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리하여 상층액을 취한다. 다시 잔류물에 물 20 mL와 25% TCA 용액 2 mL를 넣어 추출 및 원심분리를 하여 앞의 상층액에 합한다. 이 액에 약 0.9 mL의 암모니아수를 넣어 pH가 9～10이 되도록 한다. 이때 침전물이 생길 경우에는 이를 다시 원심분리하여 사용한다.

2) 정제
C18 카트리지에 물 5 mL, 메탄올 5 mL, 정제수 5 mL, 염기성 벤잘코니움용액 5 mL, 물 5 mL, 메탄올 5 mL, 물 5 mL, 염기성 헵탄설포네이트 용액 10 mL 순으로 2～3 방울/초의 속도로 흘려주어 활성화시킨 후, 위의 추출용액을 1방울/초의 속도로 통과시키고 물과 메탄올 각 5 mL로 유출시켜 버린다. 여기에 산성 메탄올 3 mL를 넣어 시험관에 용출하고 질소가스를 사용하거나 감압하여 용매를 모두 날려 보낸다. 잔류물은 액체크로마토그래프 분석용 이동상 용매 1 mL에 용해하여 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(4.6 mm × 250 mm, 5.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 검출파장: 패러쾃-255 nm, 다이쾃-310 nm

다) 이동상: 7.5mM(약 1.52 g) sodium heptanesulphonate와 diethylamine 10.3 mL, orthophosphoric acid 6.75 mL를 아세토니트릴:물(1:9, v/v) 혼합용액에 녹여 1 L가 되게 한 것

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.3.2.2 사이로마진(Cyromazine)

가. 시험법 적용범위
가금류고기, 알, 양고기, 유 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴 또는 메탄올로 추출한 후 양이온 교환수지 컬럼크로마토그래피로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD)

라. 시약

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 양이온교환수지: 50～100메쉬(mesh), 200～400메쉬(mesh) Dowex 50W-X4(Bio-Rad)

4) 음이온 교환수지: 50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8, Cl-form(Aldrich Cat. No. 21, 741-7) 물 500 mL와 1 N 수산화나트륨액 적당량으로 세척하여 활성화시킴(암갈색 pH 7～8)

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

6) 표준원액: 표준품을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

7) 표준용액: 표준원액을 적절한 농도로 혼합, 희석한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 20 g을 추출 용기에 넣고 아세토니트릴:물(9:1, v/v) 혼합용액(동물조직의 경우) 또는 메탄올:물(9:1, v/v) 혼합용액(달걀의 경우) 200 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 추출한다(달걀의 경우에는 10분간 원심분리한다). 여과를 할 경우 여과지를 사용하여서는 안된다(경우에 따라 여과지 제조공정에서 사이로마진의 대사산물인 멜라민(melamine)이 함유될 수 있음).

2) 정제
추출액 중 5 g을 20 mL의 주사기를 사용하여 C18 Sep-Pak을 통과시킨 후 양이온교환수지 2 mL가 충전된 Econo컬럼(폴리프로필렌, 0.7×4 cm Bio-Rad # 731-1110)에 서서히 용출시킨다. 이후 Econo 컬럼을 감압장치에 연결하고 0.1 N 염산 50 mL, 메탄올:물(9:1, v/v) 혼합용액 50 mL과 메탄올 10 mL를 차례로 흘려 세척한 후 감압장치를 제거한다. 위의 컬럼에 수산화암모늄용액:메탄올(1:19, v/v) 혼합용액 20 mL를 흘려주어서 사이로마진을 용출하고 이 용출액을 감압 농축기로 농축, 건고시킨 후 물 10 mL로 녹인다. 50～100메쉬(mesh) Dowex 50W-X4 2 mL를 충전시킨 Econo컬럼 위에 50～100메쉬(mesh) Dowex 1-X8 2 mL를 충전시킨 Econo컬럼을 연결한 후 미리 물 10 mL로 세척하고 위의 용액 10 mL를 흘려준다. 이후 플라스크의 내벽을 5 mL의 물로 세척하여 추가로 흘려준다. 수용액층이 Dowex 50W-X4컬럼을 통과한 후 Dowex 1-X8컬럼을 제거하고 Dowex 50W-X4컬럼을 메탄올 10 mL로 세척하여 메탄올은 버린다. Dowex 50W-X4컬럼에 수산화암모늄용액:메탄올(1:3, v/v) 혼합용액 30 mL를 흘려주어서 사이로마진을 용출시키고 이 용출액을 감압 농축기로 농축 건고시킨다. 위의 잔류물을 소량의 메탄올로 녹여 시험용액으로 한다.

라. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 검출파장: 214 nm

나) 컬럼: NH2계 컬럼(4.0 mm × 25 mm) 또는 이와 동등한 것

다) 이동상: 아세토니트릴과 물(19:1, v/v) 혼합용액

라) 유량: 1.0 mL/분

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크는 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.
주1) 위 방법으로 멜라민(Melamine)의 동시분석도 가능

7.3.2.3 글리포세이트(Glyphosate)

가. 시험법의 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 포름산 함유 용액으로 추출하여 HLB 카트리지로 정제한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 글리포세이트와 대사산물인 N-아세틸글리포세이트 표준품을 1% 포름산 함유 용액에 녹여 각 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함)

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

6) 특이사항: 글리포세이트는 유리 벽면에 흡착할 가능성이 있으므로 모든 시험과정에서 폴리프로필렌 재질의 용기를 사용한다.

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 원심분리관에 넣고 1% 포름산 용액 5 mL과 아세토니트릴 15 mL을 넣고 1분간 강하게 흔들어 추출한 후 여과지(Whatman 6)로 여과 후 아세토니트릴 10 mL로 여과지를 씻어준다(추출액이 여과지를 통과하지 못하는 경우는 10,000 ×g 이상으로 원심분리 후 상층액 전량을 취한다). 이후 40℃ 이하에서 질소가스를 사용하여 유기용매층을 증발시키고 물층만을 남긴 후 1% 포름산 함유 용액으로 10 mL 정용한다.

2) 정제
HLB 카트리지(200 mg)를 0.1% 포름산 함유 용액 6 mL로 활성화한 후, ‘1) 추출’로부터 얻은 추출물 2 mL을 카트리지에 넣고 용출하여 받는다. 카트리지 상단이 마르기 전에 0.1%(v/v) 포름산 함유 용액 2 mL을 용출하여 앞서 받은 추출액과 합하여 4 mL로 만들고 멤브레인필터(nylon, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: 다공성 그래파이트 카본 컬럼(2.1 mm × 100 mm × 5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	90.0	10.0
5.0	10.0	90.0
6.0	10.0	90.0
7.0	90.0	10.0
10.0	90.0	10.0

다) 이동상 유량: 0.25 mL/분

라) 컬럼온도: 35℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Negative ion mode)

나) Capillary voltage: 3.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
글리포세이트 (Glyphosate)	1.9	169.1	168.1	168	631)	3
					150	9
N-아세틸글리포세이트 (N-acetyl glyphosate)	4.1	211.1	209.8	210	1501)	7
					124	5
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

글리포세이트(1.9분), N-아세틸글리포세이트(4.1분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
글리포세이트(Glyphosate): 0.05 mg/kg, N-아세틸글리포세이트(N-acetylglyphosate): 0.05 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토크래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 글리포세이트와 N-아세틸글리포세이트를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

※ 글리포세이트의 잔류량 = 글리포세이트의 잔류량 + (환산계수* × N-아세틸글리포세이트의 잔류량)

* 환산계수 = 0.80(글리포세이트의 분자량 169 / N-아세틸글리포세이트의 분자량 211)

7.3.2.4 메토프렌(Methoprene)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기 등 축산물(지방 포함)에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 1% 아세트산 함유 아세톤:아세토니트릴(1:1, v/v) 혼합용액으로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료추출물 90% 이상 포함).

* 무처리 시료추출물: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 지방을 제외한 축산물
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴:아세톤(1:1, v/v) 혼합용액 20 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 옮겨 –20℃에서 30분간 방치한 후 -4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

나) 고기 중 지방(f)
균질화한 고기류 30～50 g(지방함량이 3 g이 되도록)을 용기에 담고 무수황산나트륨 약 50 g을 넣고 섞은 후 여기에 석유에테르 또는 헥산 150 mL를 넣어 5분간 흔들어 혼합한 후 여과보조제(celite 545)를 넣은 부흐너깔때기에서 감압 여과한다. 잔류물은 석유에테르 또는 헥산 50 mL로 재추출하여 위의 여과액과 합하고 무수황산나트륨으로 탈수한 후 40℃이하에서 감압하여 용매를 날린다. 지방 2 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴:아세톤(1:1, v/v) 혼합용액 10 mL를 넣어 10분간 흔들어 추출한다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 1분간 혼합한 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액을 옮겨 –20℃에서 1시간 방치한 후 –4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 500 mg, PSA 125 mg, C18 125 mg이 담긴 15 mL 원심분리관에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 5 mL를 넣고 1분간 강하게 혼합한 후 이를 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 새로운 15 mL 원심분리관에 상층액 3 mL을 옮겨 40℃이하에서 질소 농축한 후 메탄올 3 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 것을 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 50 mm, 1.9 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	60	40
1.0	60	40
2.0	10	90
4.0	0	100
7.0	0	100
7.1	60	40
10.0	60	40

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 3.5 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
메토프렌 (Methoprene)	4.2	310.5	310.25	311	1911)	12
					279	5
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

메토프렌(4.2분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 메토프렌을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.2.5 카벤다짐(Carbendazim)

가. 시험법 적용범위
가금류고기, 쇠고기, 알, 양고기, 유 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 메탄올로 추출한 후 액-액 분배하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-자외선흡광검출기(HPLC-UVD) 또는 형광검출기(HPLC-HFD)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 메탄올에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 메탄올에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 20 g을 달아 물 40 mL를 가하여 2시간 방치한 후 추출 용기에 넣어 메탄올 150 mL와  5분간 강하게 흔들어 추출한 다음 여과보조제를 깔은 흡인여과기로 여과한다. 잔류물은 균질기에 다시 넣고 아세톤 100 mL를 넣어 5분간 흔들어 섞은 후 위와 같이 되풀이하여 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 약 40 mL로 감압 농축한다. 이를 0.1 N 염산 25 mL 및 소량의 물로 분액깔때기에 옮기고 헥산 50 mL를 넣어 1분간 천천히 흔들어 섞은 후 정치하여 헥산층을 버린다. 물층에 헥산 50 mL를 넣어 1분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 물층을 분액깔때기에 취한다. 물층에 1 N 수산화나트륨액 및 0.1 N 수산화나트륨액으로 pH 6～7로 조정하여 에틸아세테이트 50 mL를 넣어 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 에틸아세테이트층을 취한다. 물층에 에틸아세테이트 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 에틸아세테이트층을 위의 에틸아세테이트에 합친다. 에틸아세테이트를 40℃ 이하에서 50 mL로 감압 농축한 후 분액깔때기에 옮긴다. 이에 0.1 N 염산 25 mL를 넣어 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 물층을 분액깔때기에 옮긴다. 에틸아세테이트층에 0.1 N 염산 25 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 물층을 위의 분액깔때기에 합친다. 이에 1 N 수산화나트륨액 및 0.1 N 수산화나트륨액으로 pH 6～7로 조정하여 에틸아세테이트 50 mL를 넣어 5분간 심하게 흔들어 섞은 후 정치하여 층을 분리시키고 에틸아세테이트층을 삼각플라스크에 옮긴다. 물층에 에틸아세테이트 50 mL를 넣어 위와 같이 되풀이하여 에틸아세테이트층을 위의 삼각플라스크에 합친다. 에틸아세테이트층에 적당량의 무수황산나트륨을 넣어 때때로 흔들어 섞으면서 1시간 방치한 후 여과한다. 다시 에틸아세테이트 20 mL로 삼각플라스크를 씻고 이 씻은 액으로 여과지의 잔류물을 씻고 여과한다. 여과액을 합쳐 40℃ 이하에서 감압 농축한 후 잔류물을 메탄올 또는 아세토니트릴에 일정량 녹인 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼충전제: 옥타데실화한 실리카(5 μm)

나) 컬럼: 안지름 2～5 mm, 길이 20～50 cm의 스테인리스관

다) 이동상: 인산이수소칼륨용액과 메탄올(4:6, v/v)의 혼합용액

라) 검출기파장: 형광검출기의 경우 여기파장 285nm, 형광파장 315nm, 자외선흡광검출기의 경우 파장 282nm

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 정량한계
0.05 mg/kg

사. 정성시험
위 조건으로 시험할 때 시험결과는 표준품과 일치하여야 한다.

아. 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피크높이법 또는 피크면적법에 따라 정량한다.

7.3.2.6 프로클로라즈(Prochloraz)

가. 시험법의 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 프로클로라즈와 대사산물(BTS 44595, BTS 44596, 2,4,6-트리클로로페놀)을 pyridine hydrochloride를 사용하여 2,4,6-트리클로로페놀로 변환 후 기체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치

1) 기체크로마토그래프-전자포획검출기(GC-ECD)

2) 기체크로마토그래프-질량분석기(GC-MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품2,4,6-트리클로로페놀(2,4,6-trichlorophenol; 2,4,6-TCP)을 아세톤에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 에틸아세테이트를 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출

가) 고기류 등 지방 많이 함유한 검체: 균질화한 시료 10 g을 정밀히 달아 아세톤 100 mL를 넣은 뒤 30분간 추출하고 흡입 여과한다. 아세톤 50 mL로 잔류물과 흡입 여과에 사용한 용기를 씻어 합한 후 감압 농축하고 1% 포름산 함유된 n-헥산:아세토니트릴(1:1, v/v)의 혼합용액 50 mL를 넣고 분배 추출을 2회 반복 후 하층을 모아 감압 농축한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 녹인 후 질소가스를 사용하여 1 mL로 농축한 뒤, 2)의 과정으로 진행한다.

나) 알과 유: 균질화한 시료 10 g을 정밀히 달아 아세톤 20 mL를 넣고 30분간 추출하고 3,500 rpm으로 5분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다. 상층액을 전량 취한 후 물 100 mL와 포화 염화나트륨용액 50 mL를 넣고 디클로로메탄 50 mL로 2회 분배 추출한 후 하층을 무수황산나트륨에 통과시켜 탈수한 다음 감압 농축한다. 잔류물을 디클로로메탄 10 mL에 녹여 1 mL로 질소 농축한 뒤, 2)의 과정을 거쳐 시험용액으로 한다.

2) 2,4,6-TCP로 변환
‘1) 추출’ 과정에서 얻은 용액에 pyridine hydrochloride 5 g을 넣고 200℃에서 2시간 동안 분해시킨다. 이후 0.2 M 염산 20 mL를 넣고 물 100 mL와 포화 염화나트륨용액 50 mL를 넣은 뒤, 디클로로메탄 50 mL로 2회 분배 추출하여 하층을 무수황산나트륨을 통과시켜 탈수 후 감압 농축한다. 유와 알은 에틸아세테이트 10 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 하고, 고기류 등 지방 많은 검체는 ‘3) 정제’ 과정을 따른다.

3) 정제
추출 및 2,4,6-TCP로 변환 후 감압 농축한 잔류물을 디클로로메탄 6 mL로 녹여, 디클로로메탄 10 mL로 활성화시킨 아미노프로필 카트리지(1 g)에 넣고 1% 포름산 함유 메탄올 10 mL로 용출하여 받은 후 감압 농축한다. 잔류물을 에틸아세테이트 10 mL에 녹여 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 기체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: DB-5 컬럼(30 m × 0.53 mm, 0.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것, 7.0 mL/분

다) 주입부 온도: 300℃

라) 오븐 온도: 100℃에서 시료를 주입하고 2분간 유지한 후 15℃/분의 비율로 190℃까지 온도를 상승시켜 1분간 유지하고 20℃/분의 비율로 290℃까지 온도를 상승시켜 2분 이상 유지한다.

마) 주입 방법: Splitless mode

바) 주입량: 1 μL

사) 검출기 온도: 300℃

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 기체크로마토그래프-전자포획검출기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

2,4,6-트리클로로페놀(7.3분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.02 mg/kg

사. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.
※ 프로클로라즈의 잔류량 = 환산계수* × 2,4,6-TCP의 잔류량
* 환산계수 = 1.91(프로클로라즈의 분자량 377 / 2,4,6-TCP의 분자량 197)

아. 확인시험
기체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 대상성분을 확인한다.

1) 기체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: DB-5MS(30 m × 0.25 mm, 0.25 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상 가스 및 유량: 헬륨(He) 또는 이와 동등한 것, 1.0 mL/분

다) 오븐 온도: 80℃에서 2분간 유지한 후 15℃/분의 속도로 180℃까지 승온하고 10℃/분의 속도로 250℃까지 승온한다.

라) 주입부 온도: 250℃

마) 인터페이스 온도: 280℃

바) 이온화 방법: 전자충격(EI), 70 eV

사) 주입 방법: Splitless mode

아) 주입량: 1 μL

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	이온 (m/z)
2,4,6-트리클로로페놀 (2,4,6-trichlorophenol)	7.3	197.5	195.9	196, 132
1) 정량이온

7.3.2.7 스피네토람(Spinetoram)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 각각 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하여 아세토니트릴 20 mL를 넣고 5분간 흔들어 섞은 후. 추출물을 4℃, 3,000 ×g에서 5분간 원심분리하고 상층액을 취해 새로운 원심분리관에 옮긴다. 남아있는 시료에 아세토니트릴 20 mL를 추가로 넣어 5분간 강하게 흔들어 섞고, 추출물을 4℃, 3,000 ×g에서 원심분리한 후 상층액을 취해 앞의 상층액과 합친다. 합친 용액에 아세토니트릴을 넣어 50 mL로 정용한 뒤, 상층액 20 mL를 PSA 500 mg이 미리 담겨져 있는 50 mL 원심분리관에 옮겨 2분간 강하게 흔들고 이를 4℃, 3,000 ×g에서 5분간 원심분리한다. 정제된 상층액 중 10 mL를 취하여 40℃ 이하에서 감압 농축하여 용매를 모두 날려버린 다음 2 mM 아세트산암모늄 함유 메탄올:아세토니트릴(50:50, v/v)의 혼합용액을 넣어 최종부피가 2 mL가 되게 한 뒤 멤브레인 필터로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 2 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 2 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 메탄올과 아세토니트릴(50:50, v/v)의 혼합용액

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	30	70
1.0	30	70
5.0	0	100
8.0	0	100
10.0	30	70
15.0	30	70

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 350℃

다) Capillary voltage: 4.5 kV

라) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
스피네토람-J형 (Spinetoram-J)	6.5	748.0	747.4	749	98	40
					1421)	30
스피네토람-L형 (Spinetoram-L)	6.7	760.0	759.4	761	98	40
					1421)	30
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 아세토니트릴에 일정 농도로 희석한 다음 시료에 주입하고 시험용액의 조제과정에 따라 시험한 후, 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입한다. 두 이온의 피크 높이 또는 면적의 합을 구하여 검량선(matrix matched calibration curve)을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

A: 스피네토람-J형(6.5 분), B: 스피네토람-L형(6.7 분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 대상 농약을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.2.8 이미다클로프리드(Imidacloprid)

가. 시험법 적용범위
닭고기, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 이미다클로프리드 및 대사산물을 1% 아세트산 함유 아세토니트릴로 추출한 후 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 이미다클로프리드 및 대사산물 이미다클로프리드 우레아, 이미다클로프리드 올레핀, 5-하이드록시 이미다클로프리드, 6-클로로니코티닉 엑시드 표준품을 각각 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리 시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) d-SPE: C18(octadecyl bonded silica)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
시료(닭의 경우 피부와 뼈, 내장 제거한 근육 부위 100 g, 알의 경우 달걀, 오리알은 10개, 메추리알 20개 또는 이와 동등한 양)를 균질화한 후 5 g을 50 mL 용량의 원심분리관에 정확히 달아 넣고 1% 아세트산 함유 아세토니트릴 15 mL를 넣어 10분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다.

2) 정제
새로운 15 mL 용량 원심분리관에 C18 400 mg을 넣고 ‘1) 추출’ 로부터 얻은 원심분리 상층액 중 6 mL를 넣어 1분간 강하게 흔들어 섞은 후 4℃, 4,000 ×g에서 10분간 원심분리한다. 상층액 중 3 mL를 취하여 질소가스를 사용하여 농축, 건고한 후 잔류물에 1% 포름산 함유 50% 아세토니트릴 수용액 1 mL를 넣어 녹인 후 멤브레인 필터(nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3.5 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 아세트산암모늄(ammonium acetate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid) 함유한 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
2.0	95	5
4.0	10	90
4.5	30	70
6.0	30	70
7.0	95	5
8.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage:  3.2 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) Cone voltage: 54 V(imidacloprid), 44 V(imidacloprid urea), 38 V(imidacloprid olefin), 58 V(5-hydroxy imidacloprid), 60 V(6-chloronicotinic acid)

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
이미다클로프리드 (Imidacloprid)	4.6	255.7	255.0	256	2091)	21
					175	25
					128	20
이미다클로프리드 우레아 (Imidacloprid urea)	4.4	211.6	211.0	212	1281)	18
					99	18
					126	20
이미다클로프리드 올레핀 (Imidacloprid olefin)	4.3	253.6	253.0	254	2051)	16
					171	20
					152	16
5-히드록시이미다클로프리드 (5-Hydroxy imidacloprid)	4.4	271.7	271.0	272	1911)	18
					225	28
					146	32
6-클로로니코틴산 (6-Chloronicotinic acid)	4.5	157.6	156.9	158	1221)	18
					78	20
					112	26
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

이미다클로프리드(A: 4.6분), 이미다클로프리드 우레아(B: 4.4분), 이미다클로프리드 올레핀(C: 4.3분), 5-히드록시이미다클로프리드(D: 4.4분), 6-클로로니코틴산(E: 4.5분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 이미다클로프리드 및 각 대사산물을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.2.9 카탑(Cartap), 티오사이클람(Thiocyclam)

가. 시험법 적용범위
가금류고기, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 2% 시스테인 염산용액, 3% 염화니켈 용액 및 암모니아수를 사용하여 네레이스톡신(nereistoxin)으로 전환시켜 헥산 및 아세토니트릴로 추출한 후 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 옥살산수소 네레이스톡신(nereistoxin hydrogen oxalate) 표준품을 아세토니트릴에 녹여 네레이스톡신(nereistoxin)으로써 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액을 무처리시료 추출물을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

5) 2% 시스테인(cysteine) 용액: 무수염산시스테인(L-cysteine-HCl, anhydrous) 20 g을 0.02 N 염산 950 mL에 녹인 후 10 N 수산화나트륨 용액을 넣어 pH 3로 맞춘 다음 0.02 N 염산을 넣어 1,000 mL가 되게 한다.

6) 3% 염화니켈(nickel chloride) 용액: 염화니켈 3 g을 물에 녹여 100 mL가 되게 한다.

7) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 10 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 취하여 2% 시스테인 용액 40 mL(알의 경우 30 mL)를 넣고 30분간 흔들어 섞어 추출한다(단, 추출액의 pH가 4∼5 범위를 벗어날 경우, 2 N 염산으로 조절한 후 30분간 다시 흔들어 섞어 추출한다). 이를 3,500 ×g, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상층액 20 mL를 별도의 50 mL 원심분리관에 취한다(알의 경우 상층액을 별도의 50 mL 원심분리관에 옮긴 후 추출용액으로 전체 부피를 40 mL로 한 다음 그 중 20 mL를 취한다). 여기에 3% 염화니켈 용액과 진한 암모니아수를 각각 1.5 mL씩 첨가한 다음 5분간 흔들어 섞은 후 70℃에서 1시간 동안 흔들어 섞어 반응 시킨다. 반응이 끝난 추출액을 냉각시킨 다음 10 N 황산을 넣으면서 pH 5로 맞춘 후 헥산 10 mL를 넣어 흔들어 섞는다. 이를 3,500 ×g, 4℃에서 10분간 원심분리한 후 상층액을 버린 다음 10 N 수산화나트륨 용액을 넣으면서 pH 9로 맞춘다. 여기에 염화나트륨 6 g과 아세토니트릴 20 mL를 가한 후 흔들어 섞고, 다시 3,500 ×g, 4℃에서 10분간 원심분리한 다음 상층액(아세토니트릴 층)을 멤브레인 필터(PTFE, 0.45 μm)로 여과한 후 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: HILIC계 컬럼(2.1 mm × 100 mm, 3 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상: 0.1%(v/v) 포름산 함유 아세토니트릴과 0.1%(v/v) 포름산 함유 물(90:10, v/v) 혼합용액

다) 이동상 유량: 0.4 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary voltage: 4.0 kV

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) Cone voltage: 12 V

마) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precursor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
네레이스톡신 (Nereistoxin)	1.6	149.0	149.0	150	1051)	12
					71	36
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

네레이스톡신(1.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
0.005 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 네레이스톡신을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다.

7.3.2.10 에톡시퀸(Ethoxyquin)

가. 시험법 적용범위
수산물 등에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 대상물질을 아세토니트릴로 추출하고 QuEChERS시약을 이용하여 지방을 제거한 다음, PSA, C18, MgSO4로 정제하여 액체크로마토그래프/질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 각각의 표준품을 정밀히 달아 메탄올(에톡시퀸) 또는 아세토니트릴(에톡시퀸다이머)에 녹여 100 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 각각의 표준원액을 아세토니트릴로 희석하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.

5) 10 mM 포름산 암모늄 용액: 1,000 mL 용량플라스크에 포름산 암모늄 0.63 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

6) 아스코르브산 및 아스코르브산 나트륨 혼합용액(AA혼합용액): 100 mL 용량플라스크에 아스코르브산 7.5 g과 아스코르브산 나트륨 7.5 g을 넣고 물로 표시선까지 채운다.

7) QuEChERS시약: QuEChERS pouch(sodium citrate 1 g, NaCl 1 g, MgSO4 4 g, Sodium sesquihydrate 0.5 g) 또는 이와 동등한 것

8) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 2 g 을 정밀히 달아 50 mL 폴리프로필렌 재질의 시험관에 취하고 AA혼합용액 0.5 mL를 넣어 가볍게 흔들어 섞는다. 물 5 mL와 아세토니트릴 10 mL를 넣고 15분간 흔들어 섞은 다음 QuEChERS 시약 6.5 g을 넣어 1분간 흔들어 섞은 후 4,700 ×g, 4℃에서 5분간 원심분리한다.

2) 정제

‘1) 추출’에서 얻은 상층액 전량을 PSA 150 mg, C18 150 mg과 MgSO4 900 mg가 담겨진 50 mL 폴리프로필렌 재질의 튜브에 취한 후 1분간 흔들어 섞고 4,700 ×g, 4℃에서 5분간 원심분리 한다. 정제된 상층액을 멤브레인 필터(Nylon, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.1 mm × 150 mm, 2.7 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 10 mM 포름산암모늄(ammonium formate)을 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 아세토니트릴

시간(분)	A(%)	B(%)
0	40	60
1	40	60
8	0	100
9	0	100
9.5	40	60
12	40	60

다) 이동상 유량: 0.3 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 5 μL

2) 질량분석기 분석조건

가) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

나) Capillary temperature: 350℃

다) Collision gas: 아르곤(Ar) 또는 이와 동등한 것

라) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)	선구이온 (Precusor ion, m/z)	생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
에톡시퀸 (Ethoxyquin)	3.6	217.3	217.1	218	1481)	20
					134	20
					176	18
에톡시퀸 다이머 (Ethoxyquin dimer)	8.9	432.6	432.3	433	2161)	25
					188	35
					375	29
1) 정량이온

3) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 각각 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

4) 표준품 크로마토그램

에톡시퀸(3.6분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

에톡시퀸 다이머(8.9분)

그림 2. 표준품의 크로마토그램 예시.

5) 정량한계
에톡시퀸(Ethoxyquin): 0.01 mg/kg
에톡시퀸 다이머(Ethoxyquin dimer): 0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기상의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 엑톡시퀸, 에톡시퀸 다이머를 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 시료검량곡선(sample calibration curve)에 대입하여 정량한다.

7.3.2.11 플로니카미드(Flonicamid)

가. 시험법 적용범위
소고기, 돼지고기, 가금류고기, 유, 알 등 축산물에 적용한다.

나. 분석원리
시료 중 분석대상물질을 아세트산 함유 아세토니트릴과 에틸아세테이트의 혼합액으로 추출하고 d-SPE(dispersive-Solid Phase Extraction)로 정제하여 액체크로마토그래프-질량분석기로 분석한다.

다. 장치
액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS/MS)

라. 시약 및 시액

1) 용매: 액체크로마토그래프용 또는 이와 동등한 것

2) 물: 3차 정제수 또는 이와 동등한 것

3) 표준원액: 표준품을 아세토니트릴에 녹여 1,000 mg/L가 되게 한다.

4) 표준용액: 표준원액과 무처리 시료추출물*을 이용하여 적당한 농도로 혼합, 희석한다(무처리 시료 추출물 90% 이상 포함).

* 무처리 시료추출물: 분석대상 농약을 포함하지 않은 시료를 시험용액과 동일한 방법으로 추출, 정제한 것을 말한다.

5) d-SPE: 무수황산마그네슘(MgSO4, anhydrous magnesium sulfate), C18(octadecyl bonded silica), PSA(Primary Secondary Amine)

6) 기타시약: 특급 또는 이와 동등한 것

마. 시험용액의 조제

1) 추출
균질화한 시료 5 g을 정밀히 달아 50 mL 원심분리관에 넣고(고기류의 경우 10 mL 물을 첨가하여 10분간 습윤화) 1% 아세트산 함유 에틸아세테이트:아세토니트릴(30:70, v/v) 혼합용액 10 mL 를 가한 후 1분간 흔들어 섞는다. 여기에 무수황산마그네슘 6 g과 무수아세트산나트륨 1.5 g을 넣어 3분간 흔들어 섞은 후, 1시간동안 –20℃에 냉동보관 후 3,000 ×g에서 10분간 또는 이와 동등한 조건에서 원심분리한다.

2) 정제
무수황산마그네슘 1,200 mg, C18 400 mg, PSA 400 mg이 담긴 15 mL 원심분리 튜브에 ‘1) 추출’로부터 얻은 상층액 6 mL를 넣고 1분간 강하게 혼합한 후 이를 원심분리 등의 방법으로 층을 분리한다. 정제된 상층액 900 μL에 아세토니트릴 100 μL을 넣어 1,000 μL로 맞춰 혼합한 뒤 멤브레인 필터(PTFE, 0.2 μm)로 여과하여 시험용액으로 한다.

바. 시험조작

1) 액체크로마토그래프-질량분석기 분석조건

가) 컬럼: C18계 컬럼(2.0 mm × 100 mm, 3.0 μm) 또는 이와 동등한 것

나) 이동상

(1) 이동상 A: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 수용액

(2) 이동상 B: 0.1%(v/v) 포름산(formic acid)과 5 mM 포름산암모늄(ammonium formate) 함유한 메탄올

시간(분)	A(%)	B(%)
0.0	95	5
3.0	95	5
12.0	10	90
15.0	10	90
18.0	95	5
20.0	95	5

다) 이동상 유량: 0.2 mL/분

라) 컬럼온도: 40℃

마) 주입량: 2 μL

바) 이온화 방법: ESI(Positive ion mode)

사) Capillary voltage: 5.5 kV

아) Collision gas: 질소(N2) 또는 이와 동등한 것

자) 분석대상물질 조건

분석성분 (Compound)	머무름 시간 (분)	분자량 (MW)	관측질량 (Exact mass)		선구이온 (Precusor ion, m/z)		생성이온 (Product ion, m/z)	충돌에너지 (Collision energy, eV)
플로니카미드 (Flonicamid)	8.5	229.2		229		230	1481)	37
							97	47
4-(trifluoromethyl) nicotinamide	6.7	190.1		190		191	1481)	29
							135.1	17
1) 정량이온

2) 검량선 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프-질량분석기에 주입하여 얻은 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적 값으로 검량선을 작성한다.

3) 표준품 크로마토그램

플로니카미드(8.5분)	4-(trifluoromethyl) nicotinamide(6.7분)

그림 1. 표준품의 크로마토그램 예시.

4) 정량한계
0.01 mg/kg

사. 정성 및 확인시험
액체크로마토그래프-질량분석기의 표준용액과 시험용액의 머무름 시간과 특성이온으로 플로카미드 및 대사물을 확인한다.

아. 정량시험
위 조건으로 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이 또는 면적을 검량선에 대입하여 정량한다. 시험용액의 농도가 검량선 범위를 초과하는 경우 무처리 시료 추출물로 희석하여 검량선 범위 내에서 정량한다.