1. 개정이유

종계의 신속한 마이코플라스마병(MG) 검사를 통한 방역조치 강화를 위해 검사방법(유전자 검사)을 추가하고, 관련 별표를 수정하고자 함

2. 주요내용

가. 닭마이코플라스마병 검사방법 중 2차 검사에 유전자 검사법을 추가하고 관련 별표를 수정함(안 제10조의2, 별표 2)

나. 2차 검사방법 추가에 따른 음성 계군 판정 기준을 변경하고자 함(안 제11조의2)

다. 개정에 따른 재검토 기한을 변경하고자 함(안 제18조)

라. 시행일 설정을 위한 부칙을 신설하고자 함

3. 참고사항

가. 관계법령 : 가축전염병 예방법

나. 예산조치 : 별도조치 필요 없음

다. 합    의 : 해당기관 없음

라. 기    타 : 붙임자료

1) 신․구조문 대비표

농림축산식품부고시  제        호

종계장·부화장 방역관리요령 일부개정고시안

종계장·부화장 방역관리요령 일부를 다음과 같이 개정한다.

제10조의2제1항제2호 중 “균분리 검사”를 “원인체 동정(균분리 검사 또는 유전자 검사)”으로 하고, 같은 조제3항 중 “1차”를 “제1항제2호에 따른 2차 검사는 1차”로, “30수 이상에 대해 제1항제2호에 따라”를 “30수 이상에 대해”로, “2차 검사를 실시한다”를 “실시한다”로 한다.

제11조의2제1항제2호 중 “음성인”을 “야외균주로 확인되지 않은”으로 하고, 같은 조제2항 중 “균분리가 된”을 “야외 균주로 확인된”으로 한다.

제18조 중 “2023년 1월 1일”을 “2025년 7월 1일”로, “12월 31일”을 “6월 30일”로 한다.

부      칙

이 고시는 공포한 날부터 시행한다.

신ㆍ구조문대비표

현 행	개 정 안
제10조의2(닭마이코플라스마병 검사방법) ① 닭마이코플라스마병 검사는 다음 각 호의 순서로 실시한다.	제10조의2(닭마이코플라스마병 검사방법) ① --------------------------------------------.
1. (생 략)	1. (현행과 같음)
2. 2차검사 : 균분리 검사	2. ------ 원인체 동정(균분리 검사 또는 유전자 검사)
② (생 략)	② (현행과 같음)
③ 1차 검사에서 양성반응을 보이는 개체와 임상증상을 보이는 개체를 포함하여 30수이상에 대해 제1항제2호에 따라 별표 2의 방법으로 2차 검사를 실시한다.	③ 제1항제2호에 따른 2차 검사는 1차 ------------------------------- 30수 이상에 대해 -------------------------------- 실시한다.
제11조의2(닭마이코플라스마병 판정기준) ① 제10조의2의 검사방법별 판정기준은 다음 각 호와 같다.	제11조의2(닭마이코플라스마병 판정기준) ① -------------------------------------------.
1. (생 략)	1. (현행과 같음)
2. 1차 검사에서 양성율이 30%미만인 계사에 대하여 2차 검사결과 음성인 경우 음성계군으로 판정한다.	2. ---------------------- -------------------------- 야외균주로 확인되지 않은 --------.
② 2차 검사결과 1수 이상에서 균분리가 된 계사는 양성계군으로 판정	② --------------------- 야외균주로 확인된 ---------------
제18조(재검토기한) 농림축산식품부장관은 이 고시에 대하여 「훈령ㆍ예규 등의 발령 및 관리에 관한 규정」에 따라 2023년 1월 1일을 기준으로 매 3년이 되는 시점(매 3년째의 12월 31일까지를 말한다)마다 그 타당성을 검토하여 개선 등의 조치를 하여야 한다.	제18조(재검토기한) -------------------------------------------------------------------------------- 2025년 7월 1일-------------------------------- 6월 30일-----------------------------------------------------------.
부칙 <신 설>	부칙 이 고시는 발령한 날부터 시행한다.

현        행

개   정   안

[별표 2] 닭마이코플라스마병 균분리 검사법 (제10조의2 관련)

생계		폐사계
기관 삼출물		기관, 기낭, 관절 병변부의 삼출물1)

↓         ↓

멸균시료 접종 증균배양2)	→	닭마이코플라스마병 원인체 확인
□ 멸균면봉으로 각 시료를 채취하여 각각 Frey 또는 PPLO 액체배지에 접종 □ 37℃ 최소 20일 배양3)		□ 유전자검사4)
↓

선택배지 접종						계대 배양
□ Frey 또는 PPLO 고형배지5) □ 37℃, 3~5일 배양					← (필요시)	□ Frey 또는 PPLO 액체배지에 계대 접종 □ 37℃ 배양

↓

마이코플라스마 유사집락 검사 및 순수분리

□ 현미경하에서 전형적인 유두상의 집락 관찰

□ 시료 당 3~5개의 의심집락을 순수분리

↓

닭마이코플라스마병 원인체 확인

□ 유전자검사

1) 기관, 기낭 및 관절병변부의 삼출물 이외에 비강, 뒷콧구멍틈새, 안와하동 등의 삼출물, 폐 유제 등도 추가 검사 가능

2) 멸균면봉으로 각 시료를 채취하여 돼지혈청(120~150 ml/L) 및 1% NAD-cystein HCl 용액(20 ml/L)이 포함된 Frey 배지 또는 PPLO 배지에 강하게 현탁시켜 접종한 후 면봉 제거

3) 37℃에서 배양하면서 매일 관찰하여 색깔의 변화가 있으면 즉시 Frey 또는 PPLO 고형배지에 도말하고, 계대배양과 유전자검사 실시, 색깔의 변화가 없어도 7∼10일째 선택배지에 접종

4) 양성 결과 시 양성시료로 판정하고 검사 종료 가능

5) Frey 또는 PPLO 고형배지는 기존의 액체배지 성분에서 phenol red를 첨가하지 않고 1% agar 첨가

[별표 2] 닭마이코플라스마병 균분리 및 유전자 검사법 (안 제10조의2 관련)

		시료
		기관 삼출물 또는 뒷콧구멍틈새 swab1) 하여 Fray 또는 PPLO 액체배지 3ml에 현탁
증균배양					또는		전처리
□ 현탁액을 0.45㎕ 필터로 여과하여 Fray 또는 PPLO 액체배지 3ml에 0.5ml 접종 □ 37℃에서 최대 21일 배양2) 하고 색상이 변하면 고형배지3)에 도말							□ 현탁액을 0.45㎕ 필터로 여과 □ 원심분리(14,000rpm, 10분) 후 침전물에 PBS로 세척 □ 추가 원심분리 후 침전물에 증류수 첨가하여 DNA 추출
균분리
□ 현미경하에서 유두상의 집락 관찰 □ 도말한 고형배지에서 형성된 1개의 의심집락을 액체배지에 배양하여 병원체 확인 후 보관5)
								↓
							유전자 검사
							□ 백신균주와 야외균주 확인4)

1) 시료에 대해 직접 유전자 검사를 실시하는 경우에는 최대 5개씩 시료를 혼합하여 검사할 수 있음

2) 37℃에서 배양하면서 매일 관찰하고 색깔의 변화가 없어도 균 분리율을 높이기 위해 7일 간격으로 Fray 또는 PPLO 액체배지(3ml에 0.5ml 접종)에 계대배양

3) Frey 또는 PPLO 고형배지는 기존의 액체배지 성분에서 1% agar 첨가

4) 유전자 검사를 실시하여 야외균주로 확인되면 양성계군으로 최종 판정

5) 확인된 병원체는 액체배양액 0.8ml와 glyceol 0.2ml을 혼합하여 –80℃에 보관